antibiotic discs for the detection of extended spectrum beta

ANTIBIOTIC DISCS FOR THE DETECTION OF EXTENDED
SPECTRUM BETA-LACTAMASE (ESBL)
CARTRIDGE OF 50 DISCS
CONFIRMATION TEST FOR THE DETECTION OF ESBL
IVD
1- CLINICAL VALUE
The detection of extended spectrum Beta-lactamases (ESBL) is complicated by the wide diversity of plasmid enzymes that hydrolyze
and inactivate numerous Beta-lactams. These ESBL are becoming more and more widespread in numerous species of bacteria. The
utility of detecting this phenotype is two-fold: to enable appropriate treatment and to control the diffusion of this mechanism of
resistance (1) (2).
2- PRINCIPLE
The technique involves comparing the in vitro activity of discs of third generation cephalosporins (3GC) and of these same 3GC in
association with clavulanic acid (3GC + CA).
Interpretation will be based on the recommendations of the CLSI/NCCLS and / or the supplier (3) regarding ESBL detection in
Enterobacteriaceae, and notably in strains that produce large quantities of cephalosporinase.
3- PRESENTATION
Bio-Rad disks are 6.5 mm disks made from superior quality absorbent paper and impregnated with precise concentrations of
antimicrobial agents and inhibitor.
The disks are clearly identified by a code, comprising 4 letters, printed on each side of the disk.
DISK CONTENT
SYMBOL
PACK SIZE
ORDER N°
Ceftazidime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCAZ
1x50 disks
68446
Cefotaxime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCTX
1x50 disks
68456
Cefepime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CFEP
1x50 disks
68466
4- STORAGE
The expiry date applies exclusively to disks contained in intact cartridges stored according to the manufacturer's instructions. The
expiry date and batch number are indicated on each packaging (cartridge and container).
• Cartridges of disks must be stored in their containers at a temperature between +2°C and +8°C in a dry place.
• Containers must be allowed to adjust to room temperature (18-30°C) before opening. After applying the disks, return unused
cartridges to a temperature between +2°C and +8°C.
• Do not use disks after the expiry date. Do not use any cartridge of disks left at room temperature (18-30°C) for more than 8 hours
without verifying an acceptable level of performance before continuing to use this cartridge (5).
• If the cartridge remain in the distributor after dispatch, it is necessary to preserve it at +2-8°C in a dry place with dessicants
inside.
The stability of the disks, of open cartridges placed in distributors (preserved according to the recommendations with dessicants)
was validated in routine conditions. The stability in weeks is shown inside this symbol:
4 wks
1
5- MATERIAL REQUIRED BUT NOT SUPPLIED
• disk dispenser: :
6 disks
ref # 50271
8 disks
ref # 50270
12-16 disks
ref # 50295
• culture media (Mueller-Hinton)
• reagents
• bacterial strains for quality control
• opacity control equivalent to the Mac Farland 0.5 standard
• laboratory equipment necessary for antibiotic susceptibility testing by the agar diffusion method.
6- PRECAUTIONS
Follow the instructions of the current guidelines (CLSI/NCCLS, CA-SFM). Always observe the current techniques and precautions
concerning protection against microbiological hazards.
After use, sterilize the cultures and all contaminated material.
7- PROCEDURE
Samples: disks must not be used for tests performed directly on biological samples. Refer to the current guidelines (CLSI/NCCLS,
CASFM) defining preparation of the inoculum (pure, fresh culture), inoculation of Petri dishes, the incubation temperature and
incubation time.
Follow the instructions provided by the CLSI/NCCLS and the CASFM to perform the antibiogram. Place the discs that are
impregnated with a predetermined concentration of 3GC+CA (CCAZ, 30µg/10µg, CCTX 30µg/10µg, CFEP 30µg/10µg), as well
as those with a 3GC alone (CAZ 30µg, CTX 30µg, FEP 30µg) on the surface of a suitable, inoculated medium.
Good laboratory practice should also be applied at all times.
8- INTERPRETATION OF THE RESULTS
• Precisely measure the diameters of the zones of inhibition observed
- Ceftazidime+ Clavulanic acid/Ceftazidime
- Cefotaxime + Clavulanic acid /Cefotaxime
- Cefepime + Clavulanic acid/Cefepime
• The bacterial strain is interpreted as having an ESBL resistance phenotype if 3GC activity is seen to be restored in the presence of CA.
• A strain is ESBL positive if at least one of the differences in diameter between the (3GC+CA) and (3GC) is greater than or equal to
5mm (3)(4).
9- PERFORMANCE/QUALITY CONTROL
The performances of antibiotic disks are systematically controlled by using the following strains:
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
≥
3 mm
- CCAZ-CAZ ≥
5 mm
≥
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
• Escherichia coli ATCC® 25922
≤
2 mm
- CCAZ-CAZ ≤
2 mm
≤
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
: Standard CLSI/NCCLS
: Standard Internal
10-QUALITY CONTROL OF THE MANUFACTURER
All manufactured and commercialized reagents are under complete quality system starting from reception of raw material to the
final commercialization of the product.
Each lot is submitted to a quality control and only is released on the market when conforming to the acceptance criteria.
The records relating to production and control of each single lot are kept within our company
2
11-LIMITATIONS OF USE
• A resistant phenotype such as an ESBL is detected by measuring the diameters in the inhibitory zones: to the nearest millimeter,
the difference between the diameters of the two discs tested determines whether or not an ESBL is present. Measurements taken to
the nearest millimeter give an acceptable margin of error under laboratory conditions.
• The final interpretation, as for all laboratory interpretations, can not be based on the results of one single test but on an overview
of the clinical data and other antibiotic test results.
• The performances of the test depend not only on the activity of the disks, but also on factors such as the use of an appropriate
inoculum and control strains, appropriate and previously tested culture media and adequate storage.
12-REFERENCES
1)Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2)Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3)Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the detection of
Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4)CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5)CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
3
DISQUES ANTIBIOTIQUES POUR LA DETECTION DE
BETA-LACTAMASE A SPECTRE ETENDU (BLSE)
CARTOUCHE DE 50 DISQUES
TEST DE CONFIRMATION POUR LA DETECTION DES BLSE
IVD
1- INTÉRÊT CLINIQUE
La détection des Bêta-lactamases à spectre étendu (BLSE) est rendue difficile par la grande diversité d’enzymes plasmidiques
hydrolysant et inactivant de nombreuses Bêta-lactamines. Ces BLSE sont de plus en plus répandues chez de nombreuses espèces
bactériennes. La détection de ce phénotype a deux objectifs : adapter la prescription thérapeutique et contrôler la diffusion de ce
mécanisme de résistance (1)(2).
2- PRINCIPE
La technique consiste à comparer l’activité in vitro de disques de céphalosporines de troisième génération (C3G) et de ces même
C3G associées à de l’acide clavulanique (C3G+CA).
L’interprétation se fera selon les recommandations du CLSI/NCCLS et/ou du fournisseur (3) pour la recherche de BLSE chez les
entérobactéries, notamment les souches hyperproductrices de céphalosporinase.
3- PRÉSENTATION
Disques de 6,5 mm fabriqués à partir de papier absorbant de qualité supérieure, imprégnés d’agents antimicrobiens et d’inhibiteurs à
des concentrations précises.
Les disques sont clairement identifiés par un sigle de 4 lettres imprimé de chaque côté du disque.
CHARGE DU DISQUE
SYMBOLE
CONDITIONNEMENT
CODE PRODUIT
Ceftazidime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCAZ
1x50 disques
68446
Cefotaxime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCTX
1x50 disques
68456
Cefepime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CFEP
1x50 disques
68466
4- CONSERVATION
La date de péremption s’applique uniquement aux disques contenus dans les cartouches intactes conservées conformément aux
instructions du fabricant. La date de péremption et le numéro de lot figurent sur chaque conditionnement (cartouche et container).
• Les cartouches de disques doivent être conservées dans leur container entre +2 et +8 °C au sec.
• Laisser les containers à température ambiante avant de les ouvrir (maximum une heure) ; remettre les cartouches une fois la pose des
disques terminée entre +2 et +8°C au sec.
• Ne pas utiliser les disques dont la date de péremption est dépassée.
• Ne pas utiliser les cartouches de disques laissée à température ambiante plus de 8 heures, sinon en contrôler le niveau
acceptable de performance avant de continuer à l’utiliser.
• Si les cartouches sont conservées dans le distributeur après dépôt, il est nécessaire de conserver celui-ci à +2- +8°C au sec avec
des dessicants à l’intérieur.
La stabilité des disques dans les cartouches ouvertes placées dans des distributeurs (conservées suivant les recommandations avec
dessicants) a été validée en conditions de routine. Elle est indiquée en semaine a l’intérieur du pictogramme suivant :
4 wks
1
5- MATÉRIEL NÉCESSAIRE NON FOURNI
• distributeur de disques :
6 disques
ref # 50271
8 disques
ref # 50270
12-16 disques
ref # 50295
• milieux de cultures (Mueller-Hinton)
• réactifs
• souches bactériennes pour le contrôle qualité
• témoin d’opacité équivalent au standard Mac Farland 0,5
• matériel de laboratoire nécessaire pour la réalisation des antibiogrammes par la méthode de diffusion en milieu gélosé.
6- PRÉCAUTIONS D’UTILISATION
Suivre les instructions d’utilisation des recommandations en vigueur, CLSI/NCCLS, CASFM. Observer à tout moment les techniques
et précautions en vigueur en matière de protection contre les dangers microbiologiques.
Après usage, stériliser les cultures et tout le matériel contaminé.
7- MODE OPÉRATOIRE
Les disques ne doivent pas être utilisés pour un test directement sur échantillons biologiques. Se référer aux recommandations en
vigueur du CLSI/NCCLS, CASFM qui précisent : la façon de préparer l’inoculum (culture pure et fraîche), l’ensemencement des
boîtes de Pétri, la température et le délai d’incubation.
Se référer aux instructions recommandées par le CLSI/NCCLS et le CASFM pour toutes les étapes aboutissant à la réalisation de
l’antibiogramme. A la surface du milieu adéquat, préalablement ensemencé déposer les disques imprégnés d’une concentration
déterminée de C3G+AC (CCTX 30µg/10µg, CCAZ 30µg/10µg, CFEP 30µg/10µg), ainsi que C3G seules (CTX 30 µg, CAZ 30
µg, FEP 30 µg).
Il est recommandé dans le même temps d’appliquer les bonnes pratiques de laboratoire.
8- INTERPRÉTATION DES RÉSULTATS
• Mesurer précisément les diamètres des zones d’inhibition observées pour chacun des disques déposés.
- Ceftazidime + Clavulanic Acid/Ceftazidime
- Cefotaxime + Clavulanic Acid/Cefotaxime
- Cefepime + Clavulanic Acid/Cefepime
• La souche bactérienne est interprétée comme ayant un phénotype de résistance BLSE si on observe une restauration de l’activité
de la C3G en présence de l’acide clavulanique.
• Une souche sera rendu BLSE positive si au moins une des différences de diamètre entre les (C3G+AC) – (C3G) est supérieure ou
égale à 5mm (3)(4).
9- PERFORMANCES / CONTRÔLE QUALITÉ
Les performances des disques antibiotiques sont contrôlées à l’aide des souches suivantes :
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
≥
3 mm
- CCAZ-CAZ ≥
5 mm
≥
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
• Escherichia coli ATCC® 25922
≤
2 mm
- CCAZ-CAZ ≤
2 mm
≤
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
: Norme CLSI/NCCLS
: Norme Interne
10-CONTRÔLE QUALITÉ DU FABRICANT
Tous les produits fabriqués et commercialisés par la société Bio-Rad sont placés sous un système d'assurance qualité de la réception
des matières premières jusqu'à la commercialisation des produits finis. Chaque lot de produit fini fait l'objet d'un contrôle de qualité
et n'est commercialisé que s'il est conforme aux critères d'acceptation. La documentation relative à la production et au contrôle de
chaque lot est conservée par le fabricant.
2
11-LIMITES D’UTILISATION
• La détection d’un phénotype de résistance tel qu’une BLSE est dépendante de la lecture des diamètres des zones d’inhibition : à
un millimètre près, la différence entre les diamètres pour les deux disques testés peut faire conclure ou non à la présence d’une
BLSE. La lecture à un millimètre près correspond à une marge d’erreur courante en laboratoire.
• L’interprétation finale, comme toute interprétation biologique, ne peut être prise sur le résultat d’un seul test mais par un ensemble
de données cliniques et de résultats pour d’autres molécules testées pour l’antibiogramme.
• Les performances du test dépendent non seulement de l’activité des disques, mais également de facteurs tels que l’utilisation d’un
inoculum standardisé, de souches de contrôles appropriés, de milieux de culture adaptés pré testés et d’une température de
stockage adéquate.
12-RÉFÉRENCES BIBLIOGRAPHIQUES
1)Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2)Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3)Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the detection of
Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4)CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5)CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
3
DISCOS ANTIBIÓTICOS PARA LA DETECCIÓN DE LA
BETA-LACTAMASA DE ESPECTRO AMPLIADO (BLSE)
CARTUCHO DE 50 DISCOS
TEST DE CONFIRMACIÓN PARA LA DETECCIÓN DE LAS BLSE
IVD
1- VALOR CLÍNICO
La detección de las Bêta-lactamasas de amplio espectro (BLSE) es dificil por la gran diversidad de enzimas plasmídicas
hidrolizantes e inactivantes de numerosas Bêta-lactamasas. Estas BLSE se reparten cada vez más entre numerosas especies
bacterianas. La detección de este fenotipo tiene dos objetivos: adaptar la prescripción terapéutica y controlar la difusión de este
mecanismo de resistencia (1)(2).
2- PRINCIPIO
La técnica consiste en comparar la actividad in vitro de los discos de cefalosporinas de tercera generación (C3G) y de estas
mismas C3G asociadas al ácido clavulánico (C3G+AC).
La interpretación se efectuará según las recomendaciones del CLSI/NCCLS y/o del proveedor (3) para la reserva de BLSE en las
enterobacterias, principalmente las cepas hyperproductoras de cefalosporina.
3- PRESENTACIÓN
Los discos de Bio-Rad son discos de 6,5 mm fabricados en papel absorbente de calidad superior e impregnados con concentraciones
precisas de los agentes antimicrobianos and AC. Los discos están claramente identificados por medio de un código que comprende 4
letras, impreso en cada cara del disco.
CONTENIDO DEL
DISCO
SÍMBOLO
TAMAÑO DEL ENVASE
N° REFERENCIA
Ceftazidime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCAZ
1x50 discos
68446
Cefotaxime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCTX
1x50 discos
68456
Cefepime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CFEP
1x50 discos
68466
4- CONSERVACIÓN
La fecha de caducidad se aplica exclusivamente a los discos contenidos en cartuchos intactos almacenados de acuerdo con las
instrucciones del fabricante. La fecha de caducidad y el número de lote se indican en cada envase (cartucho y contenedor).
Los cartuchos de discos deben conservarse en sus contenedores a una temperatura de entre +2° C y +8° C en un lugar seco.
• Debe permitirse que los contenedores se adapten a la temperatura ambiente (+18-30°C) antes de abrirlos. Tras aplicar los
discos, guarde los cartuchos no usados nuevamente a una temperatura de entre +2° C y +8° C.
• No utilice los discos una vez transcurrida la fecha de caducidad. No utilice ningún cartucho de discos que haya permanecido a
temperatura ambiente (+18-30°C) durante más de 8 horas sin verificar que mantiene un nivel de comportamiento aceptable
antes de seguir utilizando el cartucho (5).
• Si las zonas de inhibiciones obtenidas con los discos de prueba y las cepas bacterianas de control no cumplen las
especificaciones, deberá verificarse el procedimiento; este error puede deberse al disco, el inóculo, la inoculación, el medio u
otros factores.
• Si el cartucho permanece en el distribuidor tras la distribución, es necesario conservarlo a una temperatura de entre +2º y +8° C
en un lugar seco con desecantes dentro.
La estabilidad de los discos una vez abiertos los cartuchos en el punto de distribución (conservados con desecante siguiendo las
recomendaciones especificadas) ha sido validada en condiciones de rutina. En los que la estabilidad se indica en semanas en el
interior del símbolo :
4 wks
1
5- MATERIAL NECESARIO PERO NO SUMINISTRADO
• Dispensador de discos:
6 discos
ref # 50271
8 discos
ref # 50270
12-16 discos
ref # 50295
• Medio de cultivo (Mueller-Hinton)
• Reactivos
• Cepas bacterianas para el control de calidad
• Control de opacidad equivalente al patrón de 0,5 de la escala de Mac Farland
• Equipo de laboratorio necesario para la comprobación de la susceptibilidad a los antibióticos mediante el método de difusión en agar.
6- PRECAUCIONES
Siga las instrucciones de las directrices actuales (CLSI/NCCLS, CA-SFM).
Respete siempre las técnicas y precauciones actuales relativos a la protección contra peligros microbiológicos.
Después de su empleo, esterilice los cultivos y todo el material contaminado.
7- PROCEDIMIENTO
Muestras: No deben utilizarse los discos para pruebas realizadas directamente sobre muestras biológicas. Remítase a las
directrices actuales (CLSI/NCCLS_, CA-SFM_) que definen la preparación del inóculo (cultivo fresco y puro), técnicas normalizadas
para la preparación del inóculo, la inoculación de placas de Petri, la temperatura de incubación y el tiempo de incubación.
Consúltense las instrucciones recomendadas por el CLSI/NCCLS y el CASFM para todas las etapas cuya finalidad sea la
realización del antibiograma. Depositar en la superficie del medio adecuado, previamente sembrada, los discos impregnados con
una concentración determinada de C3G+CA (CCAZ 30µg/10µg, CCTX 30µg/10µg, CFEP 30µg/10µg), así como C3G solas
(CAZ 30 µg, CTX 30 µg, FEP30 µg).
Deben seguirse en todo momento las buenas prácticas de laboratorio.
8- INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
• Mida con precisión los diámetros de las zonas de inhibición observadas.
- Ceftazidime + Clavulanic Acid/Ceftazidime
- Cefotaxime + Clavulanic Acid/Cefotaxime
- Cefepime + Clavulanic Acid/Cefepime
• La cepa bacteriana se interpreta como si de un fenotipo de resistencia BLSE se tratara, si se observa una restauración de la
actividad de la C3G en presencia de AC.
• Una cepa se reproducirá BLSE positiva si al menos una de las diferencias de diámetro entre las (C3G+AC) – (C3G) es superior o
igual a 5 mm (3)(4).
9- COMPORTAMIENTO / CONTROL DE CALIDAD
Los comportamientos de los discos de antibióticos son sistemáticamente controlados utilizando las siguientes cepas:
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
≥
3 mm
- CCAZ-CAZ ≥
5 mm
≥
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
• Escherichia coli ATCC® 25922
≤
2 mm
- CCAZ-CAZ ≤
2 mm
≤
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
: Estándar CLSI/NCCLS
: Estándar Interna
10-CONTROL DE CALIDAD DEL FABRICANTE
Todos los reactivos fabricados y comercializados se someten a un completo sistema de calidad que se inicia en el momento de la
recepción de las materias primas y se extiende hasta la comercialización final del producto. Cada lote se somete a un control de
calidad y únicamente se autoriza su introducción en el mercado cuando cumple los criterios de aceptación. La empresa mantiene
los registros relativos a la producción y el control de cada lote.
2
11-LIMITACIONES DEL EMPLEO
• La detección de un fenotipo de resistencia del tipo de una BLSE depende de la lectura de los diámetros de zonas de inhibición:
aproximadamente a un milímetro, la diferencia entre los diámetros para los dos discos probados puede manifestar o no la
presencia de una BLSE. La lectura aproximada a un milímetro corresponde a un margen de error normal en el laboratorio.
• La interpretación final, al igual que ocurre con todas las interpretaciones de laboratorio, no puede basarse en los resultados de
una única prueba, sino en una visión general de los datos clínicos y otros resultados de antibióticos.
• Los comportamientos de la prueba dependen no sólo de la actividad de los discos, sino también de factores como el uso de un
inóculo adecuado y cepas de control apropiadas, medios de cultivo adecuados y previamente comprobados, y de una
conservación correcta.
12-REFERENCIAS
1)Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2)Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3)Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the detection of
Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4)CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5)CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
3
ANTIBIOTIKATESTBLÄTTCHEN FÜR DEN NACHWEIS VON
BREITSPEKTRUM-BETALAKTAMASEN (EXTENDED SPECTRUM
BETA-LACTAMASE, ESBL)
KARTUSCHE MIT 50 TESTBLÄTTCHEN
BESTÄTIGUNGSTEST FÜR DEN NACHWEIS VON ESBL
IVD
1- KLINISCHE BEDEUTUNG
Der Nachweis von Breitspektrum-Betalaktamasen (extended spectrum Beta-lactamases, ESBL) ist wegen der großen Vielfalt an
plasmidkodierten Enzymen, die zahlreiche Betalaktame hydrolysieren und inaktivieren, nicht einfach. Die Verbreitung dieser ESBL
unter zahlreichen Bakterienspezies nimmt immer weiter zu. Der Nachweis dieses Phänotyps ist daher in doppelter Hinsicht wichtig :
zur Sicherung des klinischen Therapieerfolges sowie als eine Kontrollmöglichkeit , mit der die weitere Ausbreitung dieses
Resistenzmechanismus eingedämmt werden soll (1) (2).
2- TESTPRINZIP
Bei dieser Technik wird die in-vitro-Aktivität von Testblättchen mit Cephalosporinen der 3. Generation (3GC) mit der Aktivität dieser
3GC-Testblättchen in Kombination mit Clavulansäure (3GC + CA) verglichen.
Die Auswertung hinsichtlich des Nachweises von ESBL bei Enterobacteriaceae und insbesondere bei Stämmen, die große Mengen
an Cephalosporinase produzieren, beruht auf den Empfehlungen von CLSI/NCCLS bzw. des Herstellers (3).
3- INHALT DER TESTPACKUNG
Die Testblättchen mit einem Durchmesser von 6,5 mm werden aus hochwertigem Filterpapier hergestellt und sind jeweils mit genau
definierten Konzentrationen an Antibiotika bzw. Inhibitor imprägniert . Sie sind durch den beidseitig aufgedruckten Code (Symbol)
leicht zu identifizieren.
KONZENTRATION
DER TESTBLÄTTCHEN
SYMBOL
PACKUNGSEINHEIT
Art.Nr.
Ceftazidime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCAZ
1x50 Testblättchen
68446
Cefotaxime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCTX
1x50 Testblättchen
68456
Cefepime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CFEP
1x50 Testblättchen
68466
4- LAGERUNG
Das Verfallsdatum gilt ausschließlich für Testblättchen in ungeöffneten Kartuschen, die gemäß den Anweisungen des Herstellers
aufbewahrt werden. Das Verfallsdatum und die Charge sind auf jeder Verpackung (Kartusche und Packung) angegeben.
• Die Kartuschen müssen in ihren Verpackungen an einem trockenen Ort bei einer Temperatur zwischen +2°C und +8°C
aufbewahrt werden.
• Die Packung muss vor dem Öffnen Raumtemperatur (18-30°C) erreicht haben. Nach Verwendung der Testblättchen müssen die
Kartuschen wieder bei +2°C und +8°C gelagert werden.
• Die Testblättchen nach Ablauf des Verfallsdatums nicht mehr verwenden. Verwenden Sie Kartuschen, die länger als 8 Stunden bei
Raumtemperatur (18-30°C) aufbewahrt wurden erst, nachdem Sie überprüft haben, ob die Werte noch innerhalb des akzeptablen
Bereiches liegen. (5)
• Entsprechen die mit den Testblättchen und Kontroll-Bakterienstämmen erzielten Hemmhöfe nicht den Spezifikationen, muss der
Testablauf überprüft werden; Fehler können auf das Testblättchen, das Inokulum, die Beimpfung des Mediums oder auf andere
Faktoren zurückzuführen sein.
• Werden die die Kartuschen im Stempel (Dispenser) aufbewahrt, sollte dieser mit einem Tockenmittel bei +2-8°C und an einem
trockenen Ort gelagert werden.
1
Die Haltbarkeit von Testblättchen, die in den Kartuschen in einem Dispenser gelagert werden (gemäss Empfehlung mit einem Trockenmittel)
wurde unter Routinebedingungen geprüft. Der hierbei ermittelte Zeitraum (in Wochen) wird jeweils auf der Verpackung angegeben und
kann aus dem dargestellten Piktogram abgelesen werden:
4 wks
5- BENÖTIGTE, JEDOCH NICHT MITGELIEFERTE MATERIALIEN
• Dispenser (Stempel) für die Testblättchen :
Art.- Nr. 50271
6 Testblättchen
Art.- Nr. 50270
8 Testblättchen
Art.-Nr. 50295
12-16 Testblättchen
• Kulturmedium (Mueller-Hinton)
• Reagenzien
• Bakterienstämme für die Qualitätskontrolle
• Trübungsstandard ,entsprechend einem Mac Farland 0,5-Standard
• Laborausstattung zum Anlegen eines Antibiogramms im Agardiffusionstest
6- VORSICHTSMASSNAHMEN
Beachten Sie die aktuellen Richtlinien (z.B. CLSI/NCCLSO, CA-SFMO).
Beachten Sie stets die aktuellen Massgaben und Vorsichtsmaßnahmen zum Schutz vor mikrobiologischen Gefahren.
Nach der Verwendung die Kulturen und alle kontaminierten Materialien autoklavieren.
7- TESTDURCHFÜHRUNG
Die Testblättchen sind nicht zur direkten Untersuchung von klinischen Probenmaterialien geeignet. Für die standardisierte Herstellung
des Inokulums (aus einer frischen Reinkultur), die Beimpfung des Nährbodens, sowie für Inkubationstemperatur und – dauer,
beachten Sie bitte die jeweiligen, aktuellen Empfehlungen (z.B. CLSI/NCCLS, CA-SFM).
Beachten Sie auch bei der weiteren Durchführung des Antibiogramms die jeweiligen Richtlinien,( z.B. CLSI/NCCLS- , CASFM). Verteilen Sie
anschliessend die , mit der Kombination aus einem Cephalosporin der 3. Generation und der Clavulansäure imprägnierten Testblättchen
(CCAZ, 30 µg/10 µg, CCTX 30 µg/10 µg, CFEP 30 µg/10 µg) sowie jeweils ein Testblättchen das nur mit dem entsprechenden
Cephalosporin beladen ist (CAZ 30 µg, CTX 30 µg, FEP 30 µg) auf einem geeigneten und zuvor mit dem Teststamm beimpften
Nährboden.
Es sollten stets die GLP-Richtlinien beachtet werden.
8- INTERPRETATION DER ERGEBNISSE
• Die Durchmesser der Hemmhöfe für jedes Testblättchen genau ausmessen, d.h. für :
- Ceftazidime + Clavulanic Acid/Ceftazidime
- Cefotaxime + Clavulanic Acid/Cefotaxime
- Cefepime + Clavulanic Acid/Cefepime
• Der Bakterienstamm gilt als ein ESBL-Resistenzphänotyp, wenn die Aktivität eines Cephalosporins der 3. Generationin in
Gegenwart der Clavulansäure nachweislich wieder hergestellt ist.
• Ein Stamm ist ESBL-positiv, wenn zumindest einer der Durchmesser zwischen (3GC+CA) und (3GC) mindestens 5 mm größer
(3)(4) ist.
9- TESTEIGENSCHAFTEN / QUALITÄTSKONTROLLE
Die Testeigenschaften der Antibiotika -Testblättchen werden mittels folgender Teststämme systematisch kontrolliert:
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
≥
3 mm
- CCAZ-CAZ ≥
5 mm
≥
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
• Escherichia coli ATCC® 25922
≤
2 mm
- CCAZ-CAZ ≤
2 mm
≤
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
: Standard CLSI/NCCLS
: Standard Intern
2
10-QUALITÄTSKONTROLLE DES HERSTELLERS
Alle hergestellten oder im Handel erhältlichen Reagenzien unterliegen einem umfassenden Qualitätssystem , das vom Eingang der
Rohmaterialien bis zur Vermarktung des Produktes reicht. Jede Charge unterliegt einer Qualitätskontrolle und wird nur für den Markt
freigegeben, wenn die Akzeptanzkriterien erfüllt sind. Die Produkt- und Kontrolldokumentation zu jeder einzelnen Charge wird in
der Firma aufbewahrt.
11-GRENZEN DES VERFAHRENS
• Der Nachweis eines resistenten Phänotyps wie ESBL erfolgt durch Ausmessen der Hemmhofdurchmesser. Eine Abweichung der
für die 2 Testblättchen bestimmten Hemmhofdurchmesser um 1 Millimeter kann bereits zu einer anderen Schlussfolgerung in
Bezug auf das Vorliegen eines ESBL – Stammes führen. Eine solche Abweichung gilt als eine akzeptable Fehlerbreite unter
Laborbedingungen.
• Die endgültige Interpretation kann, wie bei allen Laborinterpretationen, nicht nur auf Basis der Ergebnisse eines einzelnen Tests
erfolgen, sondern muss ggf. auch klinische Daten und die Ergebnisse anderer Antibiotika mit dem jeweiligen Teststamm
berücksichtigen.
• Die Leistung des Tests hängt nicht nur von der Aktivität der Testblättchen ab, sondern auch von Faktoren wie der Verwendung
eines geeigneten Inokulums und geeigneter Kontrollstämme sowie geeigneter und zuvor validierter Kulturmedien und einer einer
adäquaten Lagerung ab.
12-LITERATUR
1)Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2)Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3)Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the detection of
Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4)CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5)CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
3
DISCHI ANTIBIOTICI PER LA RIVELAZIONE DI
BETA-LATTAMASI A SPETTRO ESTESO (BLSE)
CARTUCCIA DA 50 DISCHI
TEST DI CONFERMA PER LA RIVELAZIONE DI BLSE
IVD
1- INTERESSE CLINICO
La rivelazione di Beta-lattamasi a spettro esteso (BLSE) è difficile a causa della notevole diversità di enzimi plasmidici in grado di
idrolizzare e inattivare numerose Beta-lattamine. Dette BLSE sono sempre più diffuse in numerose specie batteriche. La rivelazione
del fenotipo si propone un duplice obiettivo: adattamento della prescrizione terapeutica e controllo della diffusione di questo
meccanismo di resistenza (1) (2).
2- PRINCIPIO
La tecnica consiste nel mettere a confronto l'attività in vitro di dischi di cefalosporine di terza generazione (C3G) con queste stesse
C3G associate ad acido clavulanico (C3G + AC).
L'interpretazione verrà effettuata in base alle raccomandazioni del CLSI/NCCLS e/o del fornitore (3) per la ricerca di BLSE presenti
negli enterobatteri, in particolare nei ceppi iperproduttori di cefalosporinasi.
3- PRESENTAZIONE
Si tratta di dischi da 6,5 mm prodotti a partire da carta assorbente di qualità superiore impregnati di agenti antimicrobici in precise
concentrazioni e acido clavulanico.
I dischi sono chiaramente identificati da una sigla, formata 4 lettere, stampata su ciascun lato del disco.
CARICA DEL DISCO
SIMBOLO
CONFEZIONE
CODICE PRODOTTO
Ceftazidime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCAZ
1x50 diski
68446
Cefotaxime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCTX
1x50 diski
68456
Cefepime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CFEP
1x50 diski
68466
4- CONSERVAZIONE
La data di scadenza si riferisce esclusivamente ai dischi contenuti nelle cartucce intatte conservate attenendosi alle istruzioni del
produttore. La data di scadenza e il numero di lotto sono indicati su ogni confezione (cartuccia e contenitore).
• Le cartucce contenenti i dischi devono essere conservate nel loro contenitore ad una temperatura compresa tra + 2 e + 8 °C in
luogo asciutto.
• Portare i contenitori a temperatura ambiente (18-30°C) prima di aprirli, una volta completato il posizionamento dei dischi,
riportare le cartucce inutilizzate a +2 - +8°C.
• Non utilizzare i dischi dopo la data di scadenza. Non utilizzare cartucce di dischi rimaste a temperatura ambiente (18-30°C)
per oltre 8 ore, o altrimenti controllare il livello di performance accettabile prima di continuare a utilizzarle(5).
• Se le cartucce vengono conservate nel distributore una volta depositati i dischi è necessario conservare il distributore stesso a +
2-8°C in luogo asciutto con essiccante all’interno.
• La stabilità dei dischetti nella cartuccia aperta e posta nel distributore (conservato con essicante secondo le raccomandazioni) è
stata validata in condizioni di routine.
La validità , in settimane, dei dischi è indicata all’interno del simbolo :
4 wks
1
5- MATERIALE NECESSARIO, MA NON FORNITO
• Distributore di dischi :
6 dischi
Cod 50271
8 dischi
Cod 50270
12-16 dischi
Cod 50295
• Mezzi i di coltura (Mueller-Hinton)
• Reagenti
• Ceppi batterici per il controllo di qualità
• Indicatore di opacità equivalente allo standard Mac Farland 0.5
• Materiale di laboratorio necessario per eseguire gli antibiogrammi mediante tecnica di diffusione in mezzo Agar.
6- PRECAUZIONI PER L’USO
Seguire le istruzioni di utilizzo indicate nelle raccomandazioni in vigore (CLSI/NCCLS, CA-SFM). Rispettare per ciascuna fase le
tecniche e le precauzioni in vigore in materia di protezione contro i pericoli microbiologici. Dopo l’uso, sterilizzare le colture e tutto
il materiale contaminato.
7- PROCEDURA
Campioni: i dischi non devono essere utilizzati per test eseguiti direttamente su campioni biologici. Fare riferimento alle
raccomandazioni in vigore (CLSI/NCCLS_, CA-SFM_) nelle quali sono precisati i metodi di preparazione dell’inoculo a partire da
una coltura pura e nuova, la semina sulle piastre di Petri, , la temperatura e la durata dell’incubazione.
Fare riferimento alle istruzioni raccomandate dal CLSI/NCCLS e dal CASFM per tutte le fasi da seguire per effettuare
l’antibiogramma. Sulla superficie del terreno di coltura idoneo, precedentemente inseminato, disporre i dischi impregnati con una
determinata concentrazione di C3G + CA (CCAZ 30 µg / 10 µg, CCTX 30 µg / 10 µg, CFEP 30 µg / 10 µg) e di sole C3G (CAZ
30 µg, CTX 30 µg, FEP 30 µg).
Si consiglia di applicare nel contempo le buone pratiche di laboratorio.
8- INTERPRETAZIONE DEI RISULTATI
• Misurare con precisione il diametro delle zone di inibizione osservate :
- Ceftazidime + Clavulanic Acid/Ceftazidime
- Cefotaxime + Clavulanic Acid/Cefotaxime
- Cefepime + Clavulanic Acid/Cefepime
• Il ceppo batterico viene interpretato come avente un fenotipo di resistenza alle BLSE se si osserva un ripristino dell'attività della
C3G in presenza di AC.
• Un ceppo è BLSE positivo se almeno una delle differenze di diametro tra (C3G + AC) e (C3G) è superiore o uguale a 5 mm (3) (4).
9- PERFORMANCE/CONTROLLO QUALITÀ
Le prestazioni dei dischi antibiotici sono controllate sistematicamente servendosi dei seguenti ceppi :
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
≥
3 mm
- CCAZ-CAZ ≥
5 mm
≥
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
• Escherichia coli ATCC® 25922
≤
2 mm
- CCAZ-CAZ ≤
2 mm
≤
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
: Norma CLSI/NCCLS
: Norma interna
10-CONTROLLO QUALITÀ DEL PRODUTTORE
Tutti i prodotti fabbricati e commercializzati dalla società Bio-Rad sono sottoposti ad un sistema di assicurazione di qualità dal
ricevimento delle materie prime fino alla commercializzazione dei prodotti finiti. Ciascun lotto di prodotto finito è soggetto a un
controllo di qualità e viene messo in commercio soltanto se risulta conforme ai criteri di approvazione. La documentazione relativa
alla produzione e al controllo di ciascun lotto è conservata presso il produttore.
2
11-LIMITI DI UTILIZZO
• La rivelazione di un fenotipo di resistenza del tipo BLSE dipende dalla lettura dei diametri delle zone di inibizione: con la
approssimazione ad un millimetro, la differenza tra i diametri per i due dischi testati può rilevare la presenza o meno di una
BLSE. La lettura approssimata a un millimetro corrisponde a un margine normale di errore nei laboratori.
• L’interpretazione finale, come per tutte le interpretazioni in campo biologico, non può essere stabilita in base al risultato di un
solo test, bensì in base ad un insieme di dati clinici e di risultati di altri test di sensibilità.
• Le performance del test non dipendono solo dall’attività dei dischi, ma anche da fattori quali l’utilizzo di un inoculo adeguato, di
ceppi di controllo appropriati, di mezzi di coltura idonei precedentemente testati e di una temperatura di stoccaggio adeguata.
12-BIBLIOGRAFIA
1)Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2)Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3)Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the detection of
Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4)CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5)CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
3
DISCOS ANTIBIÓTICOS PARA DETECÇÃO DE
BETA-LACTAMASES DE LARGO ESPECTRO (BLSE)
EMBALAGEM DE 50 DISCOS
TESTE DE CONFIRMAÇÃO PARA DETECÇÃO DE BLSE
IVD
1- INTERESSE CLÍNICO
A detecção das Beta-lactamases de Largo Espectro ("BLSE") tornou-se difícil devido à grande diversidade de enzimas plasmídicas
que hidrolizam e inactivam inúmeras beta-lactaminas. Estas BLSE estão cada vez mais disseminadas em muitas espécies
bacterianas. A detecção deste fenotipo tem dois objectivos: adaptar a prescrição terapêutica e controlar a difusão deste
mecanismo de resistência (1)(2).
2- PRINCÍPIO
A técnica consiste em comparar a actividade in vitro de discos de cefalosporinas de terceira geração (C3G) e destas mesmas C3G
associadas ao ácido clavulânico (C3G+AC).
A interpretação é feita segundo as recomendações do CLSI/NCCLS e/ou do fornecedor (3) para detecção de BLSE nas
enterobactérias, nomeadamente as estirpes hiperprodutoras de cefalosporinase.
3- PRESENTAÇÃO
Os dispositivos em causa são discos de 6,5 mm fabricados a partir de papel absorvente de qualidade superior, impregnados de
agentes antimicrobianos a concentrações específicas e ácido clavulânico.
Os discos estão claramente identificados por meio de uma sigla de 4 letras, impressa de cada lado do disco.
CONTEÚDO DO DISCO
SÍMBOLO
EMBALAGEM
Nº REF. DO PRODUTO
Ceftazidime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCAZ
1x50 disks
68446
Cefotaxime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCTX
1x50 disks
68456
Cefepime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CFEP
1x50 disks
68466
4- CONSERVAÇÃO
A indicação do prazo de validade aplica-se unicamente aos discos contidos em cartuchos intactos, conservados em conformidade
com as instruções do fabricante. O prazo de validade e o número de lote estão indicados em cada um dos recipientes (cartucho e
embalagem exterior).
• Os cartuchos de discos devem ser conservados na respectiva embalagem, a uma temperatura entre + 2 - 8 °C, em local seco.
• Aguardar que as embalagens equilibrem à temperatura ambiente (18-30°C) antes de os abrir; os cartuchos não utilizados
deverão ser guardados de novo à temperatura entre + 2 - 8 °C, uma vez terminada a colocação dos discos.
• Não utilizar os discos após o termo do prazo de validade. Não utilizar qualquer cartucho mantido à temperatura ambiente (18-30°C)
por mais de 8 horas, sem controlar previamente se o desempenho é aceitável (5).
• Se os cartuchos forem conservados no distribuidor após colocação, este deve ser conservado entre + 2-8°C, a seco com
exsicadores no interior.
A estabilidade dos discos depois dos kits abertos e colocados no distribuidor (preservados de acordo com as recomendações e com
exsicadores) foi validada em condições de rotina durante 6 semanas, a estabilidade está indicada em semanas no interior do pictograma:
4 wks
1
5- MATERIAL NECESSÁRIO MAS NÃO FORNECIDO
• Distribuidor de discos :
6 discos
ref. nº 50271
8 discos
ref. nº 50270
12-16 discos
ref. nº 50295
• meio de cultura (Mueller-Hinton)
• reagentes
• estirpes bacterianas para controlo da qualidade
• controlo de opacidade equivalente à norma Mac Farland 0.5
• material de laboratório necessário para realização de antibiogramas pelo método de difusão em meio de gelose.
6- PRECAUÇÕES DE UTILIZAÇÃO
Seguir as instruções de utilização das recomendações em vigor (CLSI/NCCLS, CA-SFM).
Observar permanentemente as técnicas e precauções em vigor em matéria de protecção contra riscos microbiológicos.
Após utilização, esterilizar as culturas e todo o material contaminado.
7- MODO DE FUNCIONAMENTO
Amostras: os discos não devem ser utilizados para teste directo em amostras biológicas. Consultar as recomendações em vigor
(CLSI/NCCLS, CA-SFM) que especificam a forma de preparação do inoculado a partir de uma cultura pura e recente, a
inoculação das caixas de Pétri, a temperatura e o período de incubação.
Consultar as instruções recomendadas pelo CLSI/NCCLS e o CASFM para todas as etapas de realização do antibiograma. À
superfície do meio adequado, previamente inoculado, depositar os discos impregnados de uma concentração determinada de
C3G+CA (CCAZ 30µg/10µg, CCTX 30µg/10µg, CFEP 30µg/10µg), bem como as C3G em isolado (CAZ 30µg, CTX 30 µg,
FEP30 µg).
Recomenda-se igualmente o cumprimento das boas práticas de laboratório.
8- INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS
• Medir com precisão os diâmetros das zonas de inibição observadas.
- Ceftazidime + Clavulanic Acid/Ceftazidime
- Cefotaxime + Clavulanic Acid/Cefotaxime
- Cefepime + Clavulanic Acid/Cefepime
• A estirpe bacteriana é interpretada como apresentando um fenotipo de resistência BLSE se se observar um restabelecimento da
actividade da C3G em presença de AC.
• Uma estirpe torna-se BLSE positiva se pelo menos uma das diferenças de diâmetro entre (C3G+AC) – (C3G) for superior ou igual
a 5mm (3)(4).
9- DESEMPENHOS/CONTROLO DA QUALIDADE
Os desempenhos dos discos antibióticos são controlados de forma sistemática por meio das estirpes seguintes:
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
≥
3 mm
- CCAZ-CAZ ≥
5 mm
≥
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
• Escherichia coli ATCC® 25922
≤
2 mm
- CCAZ-CAZ ≤
2 mm
≤
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
: Norma CLSI/NCCLS
: Norma Interna
10-CONTROLO DE QUALIDADE DO FABRICANTE
Todos os produtos fabricados e comercializados pela empresa Bio-Rad são submetidos a um sistema de garantia da qualidade, desde a
recepção das matérias primas até à comercialização do produto final. Cada lote de produto final é objecto de um controlo da qualidade,
sendo comercializado apenas quando em total conformidade com os critérios de aceitação. A documentação relativa à produção e
controlo de cada lote é arquivada pelo fabricante.
2
11-LIMITES DE UTILIZAÇÃO
• A detecção de um fenotipo de resistência, tal como uma BLSE , depende da leitura dos diâmetros das zonas de inibição: a cerca
de um milímetro, a diferença entre os diâmetros para os dois discos testados pode levar a concluir ou não da presença de uma
BLSE. A leitura a cerca de um milímetro corresponde a uma margem de erro corrente em laboratório.
• A interpretação final, tal como acontece com qualquer interpretação biológica, não pode ser traçada a partir do resultado de um
único teste, mas antes de um conjunto de dados clínicos e de resultados de ANTIBIÓTICOS.
• Os desempenhos do teste dependem não só da actividade dos discos, como também de factores tais como a utilização de um
inoculado, de estirpes de controlo apropriadas, de meios de cultura adaptados, previamente testados, e de uma temperatura de
armazenamento adequada.
12-REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
1)Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2)Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3)Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the detection of
Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4)CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5)CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
3
ANTIBIOTIKALAPPAR FÖR DETEKTION AV
BETA-LAKTAMASER MED UTÖKAT SPEKTRUM (ESBL)
HYLSA MED 50 LAPPAR
KONFIRMERANDE TEST FÖR DETEKTION AV ESBL
IVD
1- KLINISK BETYDELSE
Detektion av beta-laktamaser med utökat spektrum (ESBL) är komplicerat på grund av den stora mångfalden av plasmidenzymer
som hydrolyserar och inaktiverar många beta-laktamaser. ESBL blir allt mer vanligt förekommande hos ett flertal bakteriearter.
Detektion av den här fenotypen är användbar på två sätt: lämplig behandling kan bestämmas och diffusionen hos
resistansmekanismen kan kontrolleras (1) (2).
2- PRINCIP
Tekniken består i att jämföra in vitro-aktiviteten hos tredje generationens cefalosporinlappar (3GC) med samma 3GC i kombination
med klavulansyra (3GC + CA).
Utvärderingen baseras på rekommendationerna från CLSI/NCCLS och/eller leverantören (3) avseende ESBL-detektion i
enterobacteriaceae, och i synnerhet i stammar som producerar stora mängder cefalosporinas.
3- INNEHÅLL
Bio-Rads lappar är 6,5 mm i diameter, tillverkade av absorberande papper av högsta kvalitet och impregnerade med antibiotika i
exakt definierade koncentrationer och med klavulansyra.
Lapparna identifieras via en kod bestående av fyra bokstäver som är tryckt på båda sidor av lappen.
INNEHÅLL
SYMBOL
FÖRPACKNING
ORDERNR
Ceftazidime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCAZ
1x50 lappar
68446
Cefotaxime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCTX
1x50 lappar
68456
Cefepime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CFEP
1x50 lappar
68466
4- FÖRVARING
Angivet utgångsdatum gäller endast lappar i intakta hylsor som förvaras enligt tillverkarens anvisningar. Utgångsdatum och
partinummer anges på varje förpackning (hylsa och behållare).
• Hylsor med lappar ska förvaras i sina behållare i +2-8° C på torr plats.
• Behållare ska anta rumstemperatur (18-30° C) innan de öppnas. Efter användning ska oanvända hylsor åter förvaras i +2–8° C.
• Använd inte lappar efter sista förbrukningsdatum. Använd inte hylsor med lappar som har lämnats i rumstemperatur (18-30° C) i
mer än åtta timmar utan att först kontrollera deras funktion (5).
• Om hylsan lämnas kvar i dispensern efter användning ska den förvaras i +2-8° C på torr plats med torkmedel inuti.
Lapparnas stabilitet, i öppnade hylsor, placerade i dispensers (som enligt rekommendationer förvaras med torkmedel), validerades
under normala användningsförhållanden. Stabiliteten anges i veckor inuti symbolen:
4 wks
1
5- NÖDVÄNDIGT MATERIAL SOM EJ INGÅR
• lappdispenser:
6 lappar
ref nr 50271
8 lappar
ref nr 50270
12-16 lappar
ref nr 50295
• odlingsmedium (Mueller-Hinton)
• reagens
• bakteriestammar för kvalitetskontroll
• opacitetskontroll motsvarande McFarland-standard 0,5
• laboratorieutrustning som krävs för bestämning av antibiotikaresistens med agardiffusionsmetoden.
6- FÖRSIKTIGHETSÅTGÄRDER
Följ aktuella riktlinjer (CLSI/NCCLS, CA-SFM). Undvik mikrobiologiska risker genom att observera rådande tekniker och angivna
försiktighetsåtgärder.
Sterilisera odlingarna och allt kontaminerat material efter användning.
7- FÖRFARANDE
Prov: Lapparna får inte användas för tester som utförs direkt på biologiska prov. Se aktuella riktlinjer (CLSI/NCCLS, CA-SFM) för
anvisningar om preparation av inokulat från en färsk renkultur, inokulering av petriskålar, inkuberingstemperatur och inkuberingstid.
Genomför antibiogrammet genom att följa de instruktioner som anges av CLSI/NCCLS och CASFM. Placera lapparna, som är
impregnerade med en förutbestämd koncentration 3GC+CA (CCAZ, 30 µg/10 µg, CCTX 30 µg/10 µg, CFEP 30 µg/10 µg), samt
de lappar med endast 3GC (CAZ 30 µg, CTX 30 µg, FEP 30 µg) på ytan av ett lämpligt inokulerat medium.
God laboratoriesed (GLP) bör alltid tillämpas.
8- UTVÄRDERING AV RESULTAT
• Gör en exakt mätning av diametrarna på de inhibitionszoner som observeras
- Ceftazidim + klavunalsyra/ceftazidim
- Cefotaxim + klavunalsyra/cefotaxim
- Cefepim + klavunalsyra/cefepim
• Bakteriestammen antas ha en ESBL-fenotyp för resistens om 3GC-aktiviteten återställs vid förekomst av CA.
• En stam är ESBL-positiv om minst en av skillnaderna i diameter mellan (3GC+CA) och (3GC) är större än eller lika med 5 mm (3)(4).
9- FUNKTIONS-/KVALITETSKONTROLL
Antibiotikalapparnas funktion kontrolleras systematiskt med hjälp av nedanstående stammar:
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
≥
3 mm
- CCAZ-CAZ ≥
5 mm
≥
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
• Escherichia coli ATCC® 25922
≤
2 mm
- CCAZ-CAZ ≤
2 mm
≤
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
: Standard CLSI/NCCLS
: Standard Intern
10-TILLVERKARENS KVALITETSKONTROLL
Alla reagenser tillverkas och marknadsförs i enlighet med ett fullständigt kvalitetssystem, från mottagande av råmaterial till slutlig
marknadsföring av produkt.
Varje parti genomgår en kvalitetskontroll och släpps endast ut på marknaden om det överensstämmer med acceptanskriterierna.
Handlingar som hör samman med produktion och kontroll av varje enskilt parti sparas inom vårt företag.
2
11-BEGRÄNSNINGAR
• En resistent fenotyp, t.ex. en ESBL, detekteras genom att diametrarna i hämningszonerna mäts: skillnaden mellan diametrarna hos
de två lappar som testats avgör om en ESBL förekommer eller inte. Mått som tas med millimeternoggrannhet ger en acceptabel
felmarginal under gällande laboratorievillkor.
• Vid utvärdering i laboratorier kan inte slutgiltig tolkning baseras på resultatet från ett enda test utan ska göras genom att väga
samman kliniska data och resultat från andra antibiotikatester.
• Testresultatet är inte enbart beroende av lapparnas funktion. Även andra faktorer har betydelse, t.ex. att ett lämpligt inokulat och
lämpliga kontrollstammar används, liksom lämpliga, väl utprovade odlingsmedium samt adekvat förvaring.
12-REFERENSER
1)Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2)Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3)Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the detection of
Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4)CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5)CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
3
ANTIBIOTISKE PLADER TIL KONSTATERING AF
BETA-LACTAMASE MED UDVIDET SPEKTRUM (ESBL)
ÆSKE MED 50 PLADER
BEKRÆFTELSESTEST TIL KONSTATERING AF ESBL
IVD
1- KLINISK VÆRDI
Konstateringen af beta-lactamase med udvidet spektrum (ESBL) kompliceres af mangfoldigheden af plasmidbårne enzymer, som
hydrolyserer og inaktiverer adskillige beta-lactamer. Disse beta-lactamaser bliver mere og mere udbredt i adskillige bakteriearter.
Der er to fordele forbundet med konstatering af denne fænotype: At give mulighed for at finde den rette behandling og at
kontrollere spredningen af denne resistensmekanisme (1) (2).
2- PRINCIP
Teknikken går ud på at sammenligne in vitro-aktiviteten i plader med 3. generations cephalosporiner (3GC) og disse 3GC’er
sammen med clavulaninsyre (3GC + CA).
Fortolkningen vil blive baseret på anbefalinger fra CLSI/NCCLS og/eller leverandøren (3) vedrørende konstatering af ESBL i
enterobakterier og specielt i stammer, som producerer store mængder af cephalosporiner.
3- PRÆSENTATION
De 6,5 mm store Bio-Rad-plader er fremstillet af absorberende papir af meget høj kvalitet, som er imprægneret med præcise
koncentrationer af antimikrobielle stoffer og inhibitor.
Pladerne er tydeligt identificeret med en kode, bestående af 4 bogstaver, der er trykt på begge sider.
PLADERNES INDHOLD
SYMBOL
PAKKE-STØRRELSE
ORDRE-NUMMER
Ceftazidime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCAZ
1x50 plader
68446
Cefotaxime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CCTX
1x50 plader
68456
Cefepime + Clavulanic Acid
30 / 10 µg
CFEP
1x50 plader
68466
4- OPBEVARING
Udløbsdatoen gælder udelukkende for plader i ubrudte æsker, som er opbevaret ifølge producentens anvisninger. Udløbsdato og
batchnummer er angivet på hver pakning (æske og beholder).
• Opbevar æskerne med plader i deres beholdere ved +2-8°C på et tørt sted.
• Lad beholderne stabilisere sig ved stuetemperatur (+18-30°C), før de åbnes. Ubrugte æsker skal opbevares ved +2-8°C.
• Brug ikke pladerne efter udløbsdatoen. Benyt ikke æsker med plader, der har stået ved stuetemperatur (+18-30°C) i mere end 8
timer, uden først at kontrollere, om pladernes ydeevne er acceptabel (5).
• Hvis æsken med plader forbliver i dispenseren efter brug, skal dispenseren opbevares ved +2-8°C på et tørt sted med
tørremiddel.
Stabiliteten af pladerne efter åbning af æske og placeret i en dispenser (opbevaring med tørremiddel i henhold til anbefalinger) er
blevet kontrolleret under rutineforhold. Denne stabilitet vises i uger inde i symbolet:
4 wks
1
5- KRÆVET MATERIALE, DER IKKE MEDFØLGER
• Pladedispenser:
6 plader
ref. nr. 50271
8 plader
ref. nr. 50270
12-16 plader
ref. nr. 50295
• Medier (Mueller-Hinton)
• Reagenser
• Bakteriestammer til kvalitetskontrol
• Kontrol af uklarhed svarende til MacFarland 0,5 standard
• Laboratorieudstyr, der kræves for at udføre en følsomhedstest overfor antibiotika ved hjælp af agar-diffusionsmetoden.
6- FORHOLDSREGLER
Følg instruktionerne i de gældende retningslinjer (CLSI/NCCLS, CA-SFM). Overhold altid de gældende fremgangsmåder og
forholdsregler til beskyttelse mod mikrobiologiske farer.
Steriliser kulturerne og alt kontamineret materiale efter brug.
7- PROCEDURE
Prøver: Pladerne må ikke anvendes til tests, der udføres direkte på biologiske prøver. Læs de gældende retningslinjer (CLSI/NCCLS,
CA-SFM), der definerer klargøring af inokulum (ren, frisk kultur), inokulering af petriskåle, inkubationstemperatur og -tid.
Følg instruktionerne fra CLSI/NCCLS og CASFM til udførelse af antibiogrammet. Anbring pladerne, som er imprægneret med en
forudbestemt koncentration af 3GC+CA (CCAZ, 30µg/10µg, CCTX 30µg/10µg og CFEP 30µg/10µg), og pladerne, som
udelukkende er imprægneret med 3GC (CAZ 30µg, CTX 30µg og FEP 30µg), på overfladen af et egnet, inokuleret medie.
Der skal til enhver tid anvendes god laboratoriepraksis.
8- FORTOLKNING AF RESULTATERNE
• Mål de observerede hæmningszoners diametre præcist
- Ceftazidim + Clavulaninsyre/Ceftazidim
- Cefotaxim + Clavulaninsyre/Cefotaxim
- Cefepim + Clavulaninsyre/Cefepim
• Fortolkningen af bakteriestammen viser, at den har en resistent ESBL-fænotype, hvis 3GC-aktiviteten gendannes ved forekomsten af
clavulaninsyre.
• En stamme er ESBL-positiv, hvis mindst én af differencerne i diameter mellem (3GC+CA) og (3GC) er større end eller lig med 5 mm (3)(4).
9- YDEEVNE/KVALITETSKONTROL
De antibiotiske pladers ydeevne kontrolleres systematisk ved hjælp af følgende stammer:
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
≥
3 mm
- CCAZ-CAZ ≥
5 mm
≥
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
• Escherichia coli ATCC® 25922
≤
2 mm
- CCAZ-CAZ ≤
2 mm
≤
2 mm
- CCTX-CTX
- CFEP-FEP
: Standard CLSI/NCCLS
: Standard Intern
10-PRODUCENTENS KVALITETSKONTROL
Alle producerede og kommercialiserede reagenser er underlagt et komplet kvalitetssikringssystem lige fra modtagelsen af
råmaterialet til den endelige markedsføring af produktet.
Hvert batch sendes til kvalitetskontrol og markedsføres kun, hvis de opfylder de foruddefinerede kvalitetskriterier.
Dokumentation vedrørende produktion og kontrol af hvert batch opbevares inden for virksomheden.
2
11-TESTENS BEGRÆNSNINGER
• En resistent fænotype, som f.eks. en ESBL, konstateres ved at måle diametrene i hæmningszonerne: Til den nærmeste millimeter,
diameterdifferencen mellem de to testede plader bestemmer, om ESBL er til stede eller ej. Målinger til den nærmeste millimeter
giver en acceptabel fejlmargen under laboratorieforhold.
• Den endelige fortolkning kan som alle andre laboratoriefortolkninger ikke baseres på resultaterne af en enkelt test, men på en
samlet oversigt over de kliniske data og de antibiotiske testresultater.
• Testens ydeevne afhænger ikke kun af aktiviteten på pladerne, men også af faktorer som f.eks. brugen af det rette inokulum og
egnede kontrolstammer, korrekt og tidligere testede kulturmedier og en korrekt opbevaring.
12-REFERENCER
1)Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2)Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3)Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the detection of
Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4)CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5)CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
3
ANTIBIOTICKÉ DISKY K DETEKCI ŠIROKOSPEKTRÝCH
BETA-LAKTAMÁZ (ESBL)
ZÁSOBNÍK PRO 50 DISKŮ
KONFIRMAČNÍ TEST PRO DETEKCI ESBL
1- KLINICKÝ VÝZNAM
Detekce širokospektrých Beta-laktamáz (ESBL) je komplikovaná kvůli veliké rozmanitosti plazmidových enzymů, které hydrolyzují
a inaktivují početnou skupinu Beta-laktamáz. Tyto ESBL se stávají více a více rozšířenější v mnoha druzích bakterií. Užitečnost
detekování tohoto fenotypu je dvojnásobná: umožnit vhodnou léčbu a kontrolovat difusi tohoto mechanismu rezistence (1) (2).
2- PRINCIP
Tato technika zahrnuje srovnání in vitro aktivity disků třetí generace cefalosporinů (3GC) a ty stejné 3GC v kombinaci
s klavulánovou kyselinou (3GC + CA).
Interpretace je založena na doporučeních CLSI/NCCLS a/nebo dodavatele (3) s ohledem na detekci ESBL
u Enterobacteriaceae a převážně u kmenů s produkcí velkého množství cefalosporinázy.
3- SLOŽENÍ
Bio-Rad disky jsou 6,5 mm disky vyrobené z vysoce kvalitního savého papíru napuštěného přesnými koncentracemi
antimikrobiálních činidel a inhibitoru.
Disky jsou zřetelně označené kódem, složeným ze 4 písmen, vytištěných na každé straně disku.
OBSAH DISKU
SYMBOL
VELIKOST BALENÍ
OBJEDNACÍ Č.
Ceftazidim + klavulánová kyselina
30 / 10 µg
CCAZ
1 x 50 disků
68446
Cefotaxim + klavulánová kyselina
30 / 10 µg
CCTX
1 x 50 disků
68456
Cefepim + klavulánová kyselina
30 / 10 µg
CFEP
1x 50 disků
68466
4- UCHOVÁVÁNÍ
Datum exspirace se vztahuje výhradně na disky v neporušených zásobnících uchovávaných v souladu s instrukcemi výrobce.
Datum exspirace a číslo šarže jsou uvedeny na každém obalu (kazeta a obal).
• Zásobníky s disky musí být uchovávány ve svých obalech při teplotě mezi +2 °C a +8 °C na suchém místě.
• Před otevřením musí být zásobníky temperovány na laboratorní teplotu (18-30 °C). Po aplikaci disků, vraťte nepoužité
zásobníky do teploty mezi +2 °C a +8 °C.
• Nepoužívejte disky po uplynutí doby exspirace. Nepoužívejte zásobníky disků ponechané při laboratorní teplotě (18-30 °C)
déle jak 8 hodin bez ověření přijatelné míry účinnosti před dalším použitím tohoto zásobníku (5).
• Pokud jsou zásobníky po použití uchovávány v dispensoru, musí být uchovávány při +2-8 °C na suchém místě s adsorbentem
vlhkosti umístěným uvnitř.
Stabilita disků v otevřených zásobnících umístěných v dispensorech (dle doporučení uchovávaných s adsorbenty vlhkosti) byla
validována za rutinních podmínek. Stabilita v týdnech je vyznačena uvnitř tohoto symbolu:
5- POTŘEBNÝ MATERIÁL, NENÍ SOUČÁSTÍ VÝROBKU
• Zásobník disků:
6 disků
8 disků
12-16 disků
• Kultivační média (Mueller-Hinton)
• Reagencie
katalogové č. 50271
katalogové č. 50270
katalogové č. 50295
• Bakteriální kmeny pro kontrolu kvality
• Opacitní kontrola ekvivalentní ke standardu 0,5 MacFarland
• Laboratorní vybavení nezbytné pro testování citlivosti k antibiotikům pomocí agarové difúzní metody
6- UPOZORNĚNÍ
Dodržujte instrukce aktuálních směrnic (CLSI/NCCLS, CA-SFM). Dodržujte vždy aktuálně platné techniky a pokyny týkající se
ochrany proti mikrobiologickým rizikům.
Po použití sterilizujte kultury a veškerý kontaminovaný materiál.
7- POSTUP
Vzorky: Disky nelze použít pro testy probíhající přímo na biologických vzorcích. Viz aktuální směrnice (CLSI/NCCLS, CA-SFM)
definující přípravu inokula (čistá, čerstvá kultura), inokulaci Petriho misek, inkubační teplotu a inkubační čas..
Pro vytvoření antibiogramu postupujte podle instrukcí stanovených CLSI/NCCLS a CA-SFM. Disky, které jsou impregnované
předem definovanou koncentrací 3GC+CA (CCAZ, 30 µg/10 µg, CCTX, 30 µg/10 µg, CFEP, 30 µg/10 µg) umístěte na povrch
vhodného, naočkovaného média stejně jako disky impregnované jen 3GC (CAZ 30µg, CTX 30µg, FEP 30µg).
Neustále dodržujte zásady správné laboratorní praxe.
8- INTERPRETACE VÝSLEDKŮ
• Přesně změřte průměry pozorovaných inhibičních zón
-
Ceftazidime+ Clavulanic acid/Ceftazidime
Cefotaxime + Clavulanic acid /Cefotaxime
Cefepime + Clavulanic acid/Cefepime
• Bakteriální kmen je interpretován jako vykazující ESBL rezistenční fenotyp, jestliže je aktivita 3GC obnovena v přítomnosti CA.
• Kmen je ESBL pozitivní pokud je alespoň jeden z rozdílů průměru mezi (3GC+CA) a (3GC) větší nebo roven 5 mm (3)(4).
9- ÚČINNOST / KONTROLA KVALITY TESTU
Účinnosti antibiotických disků jsou systematicky kontrolovány požitím následujících kmenů:
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
-
CCTX-CTX
CCAZ-CAZ
CFEP-FEP
≥
≥
≥
3 mmc
5 mmc
2 mmd
• Escherichia coli ATCC® 25922
- CCTX-CTX
≤
2 mmc
- CCAZ-CAZ ≤
2 mmc
- CFEP-FEP
≤
2 mmd
c : Standard CLSI/NCCLS
d : Standard Internal
10- KONTROLA KVALITY PROVÁDĚNÁ VÝROBCEM
Všechny vyráběné a komercionalizované reagencie jsou kontrolovány kompletním systémem kontroly kvality začínajícím od
přijetí surovin až po komercionalizaci produktu.
Každá šarže je podrobena kontrole kvality a je uvolněna na trh pouze tehdy, jestliže odpovídá stanoveným akceptačním
kriteriím. Dokumentace týkající se výroby a kontroly každé jednotlivé šarže je uchovávána u výrobce.
11- LIMIT POUŽITELNOSTI
• Rezistenční fenotyp jako je ESBL je detekován měřením průměrů inhibičních zón: k nejbližšímu milimetru, rozdílem mezi
průměry dvou testovaných disků, který stanovuje, zda-li je nebo není přítomna ESBL. Měření zaokrouhlené na nejbližší milimetr
poskytuje akceptovatelnou mez chyb v laboratorních podmínkách.
• Výsledná interpretace, stejně jako veškeré laboratorní interpretace, nemůže být založena na výsledcích jednoho samotného
testu, ale na přehledu klinických dat a jiných výsledcích testů antibiotik.
• Účinnost testu nezávisí pouze na aktivitě disku, ale také na dalších faktorech jakými je používání vhodného inokula
a kontrolních kmenů, vhodné a předem otestované kultivační médium a správné uchovávání.
12- LITERATURA
1) Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2) Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3) Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the
detection of Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4) CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5) CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
ANTIBIOTICKÉ DISKY NA DETEKCIU
ŠIROKOSPEKTRÁLNYCH BETA-LAKTAMÁZ (ESBL)
ZÁSOBNÍK NA 50 DISKOV
KONFIRMAČNÝ TEST NA DETEKCIU ESBL
1- KLINICKÝ VÝZNAM
Detekcia širokospektrálnych Beta-laktamáz (ESBL) je komplikovaná kvôli veľkej rozmanitosti plazmidových enzýmov, ktoré
hydrolyzujú a inaktivujú početnú skupinu Beta-laktamáz. Tieto ESBL sa stávajú viac a viac rozšírenejšími v mnohých druhoch
baktérií. Užitočnosť detegovania tohto fenotypu je dvojnásobná: umožniť vhodnú liečbu a kontrolovať difúziu tohoto
mechanizmu rezistencie (1) (2).
2- PRINCÍP
Táto technika zahrňuje porovnanie in vitro aktivity diskov tretej generácie cefalosporínov (3GC) a tých istých 3GC v kombinácii
s klavulánovou kyselinou (3GC + CA).
Interpretácia je založená na doporučeniach CLSI/NCCLS a/alebo dodávateľa (3) s ohľadom na detekciu ESBL
u Enterobacteriaceae a prevažne u kmeňov s produkciou veľkého množstva cefalosporinázy.
3- ZLOŽENIE
Bio-Rad disky sú 6,5 mm disky vyrobené z vysoko kvalitného pijavého papiera napusteného antimikrobiálnymi činidlami a
inhibítorom s presnými koncentráciami.
Disky sú zreteľne označené kódom, zloženým zo 4 písmen, vytlačených na každej strane disku.
OBSAH DISKU
SYMBOL
VEĽKOSŤ BALENIA
OBJEDNÁVACIE Č.
Ceftazidim + klavulánová kyselina
30 / 10 µg
CCAZ
1 x 50 diskov
68446
Cefotaxim + klavulánová kyselina
30 / 10 µg
CCTX
1 x 50 diskov
68456
Cefepim + klavulánová kyselina
30 / 10 µg
CFEP
1x 50 diskov
68466
4- UCHOVÁVANIE
Termín exspirácie sa vzťahuje výhradne na disky v neporušených zásobníkoch uchovávaných v súladu s inštrukciami výrobcu.
Termín exspirácie a číslo šarže sú uvedené na každom obale (kazeta a obal).
• Zásobníky s diskmi musia byť uchovávané vo svojich obaloch pri teplote medzi +2 °C a +8 °C na suchom mieste.
• Pred otvorením musia byť zásobníky vytemperované na laboratórnu teplotu (18-30 °C). Po aplikácii diskov, vráťte nepoužité
zásobníky do teploty medzi +2 °C a +8 °C.
• Nepoužívajte disky po uplynutí termínu exspirácie. Nepoužívajte zásobníky diskov ponechané pri laboratórnej teplote
(18-30 °C) dlhšie ako 8 hodín bez overenia prijateľnej miery účinnosti pred ďalším použitím tohto zásobníka (5).
• Ak sú zásobníky po použití uchovávané v dispenzore, musia byť uchovávané pri +2-8 °C na suchom mieste s absorbentom
vlhkosti umiestneným vnútri.
Stabilita diskov v otvorených zásobníkoch umiestnených v dispenzoroch (podľa doporučení uchovávaných s absorbentmi
vlhkosti) bola validovaná za rutinných podmienok. Stabilita v týždňoch je vyznačená vnútri tohto symbolu:
5- POTREBNÝ MATERIÁL, KTORY NIE JE SÚČASŤOU VÝROBKU
• zásobník na disky:
6 diskov
8 diskov
12-16 diskov
katalógové č. 50271
katalógové č. 50270
katalógové č. 50295
•
•
•
•
•
kultivačné médium (Mueller-Hinton)
reagencie
bakteriálne kmene na kontrolu kvality
opacitná kontrola ekvivalentná ku štandardu 0,5 Mac Farland
laboratórne vybavenie nevyhnutné na testovanie citlivosti na antibiotiká pomocou agarovej difúznej metódy.
6- UPOZORNENIA
Dodržujte inštrukcie podľa aktuálnych smerníc (CLSI/NCCLS, CA-SFM). Dodržujte vždy aktuálne platné techniky a pokyny
týkajúce sa ochrany pred mikrobiologickými rizikami.
Po použití sterilizujte kultúry a všetok kontaminovaný materiál.
7- POSTUP
Vzorky: Disky nemožno použiť na testy prebiehajúce priamo na biologických vzorkách. Viď aktuálne smernice (CLSI/NCCLS, CASFM) definujúce prípravu inokula (čistá, čerstvá kultúra), inokuláciu Petriho misiek, inkubačnú teplotu a inkubačný čas..
Pri vytváraní antibiogramu postupujte podľa inštrukcií stanovených CLSI/NCCLS a CA-SFM. Disky, ktoré sú impregnované
3GC+CA (CCAZ, 30 µg/10 µg, CCTX, 30 µg/10 µg, CFEP, 30 µg/10 µg) s vopred definovanou koncentráciou umiestnite na
povrch vhodného, naočkovaného média rovnako ako disky impregnované len 3GC (CAZ 30µg, CTX 30µg, FEP 30µg).
Neustále dodržujte zásady Správnej laboratórnej praxe.
8- INTERPRETÁCIA VÝSLEDKOV
• Presne zmerajte priemery pozorovaných inhibičných zón
-
Ceftazidime+ klavulánnová kyselina/Ceftazidime
Cefotaxime + klavulánnová kyselina /Cefotaxime
Cefepime + klavulánnová kyselina /Cefepime
• Bakteriálny kmeň je interpretovaný ako vykazujúci ESBL rezistentný fenotyp, ak je aktivita 3GC obnovená za prítomnosti CA.
• Kmeň je ESBL pozitívny ak je aspoň jeden z rozdielov priemeru medzi (3GC+CA) a (3GC) väčší alebo rovný 5 mm (3)(4).
9- ÚČINNOSŤ / KONTROLA KVALITY TESTU
Účinnosti antibiotických diskov sú systematicky kontrolované použitím nasledujúcich kmeňov:
• Klebsiella pneumoniae ATCC® 700603
-
CCTX-CTX
CCAZ-CAZ
CFEP-FEP
≥
≥
≥
3 mmc
5 mmc
2 mmd
• Escherichia coli ATCC® 25922
- CCTX-CTX
≤
2 mmc
- CCAZ-CAZ ≤
2 mmc
- CFEP-FEP
≤
2 mmd
c : Standard CLSI/NCCLS
d : Standard Internal
10- KONTROLA KVALITY VYKONÁVANÁ VÝROBCOM
Všetky vyrábané a komercializované reagencie sú kontrolované kompletným systémom kontroly kvality začínajúcim od prijatia
surovín až po komercializáciu produktu.
Každá šarža je podrobená kontrole kvality a je uvoľnená na trh len vtedy, keď odpovedá stanoveným akceptačným kritériám.
Dokumentácia týkajúca sa výroby a kontroly každej jednotlivej šarže je uchovávaná našou spoločnosťou.
11- LIMIT POUŽITELNOSTI
• Rezistentný fenotyp ako je ESBL je detegovaný meraním priemerov inhibičných zón: ku najbližšiemu milimetru, rozdielom
medzi priemermi dvoch testovaných diskov, ktorý stanovuje, či je alebo nie je prítomná ESBL. Meranie zaokrúhlené na
najbližší milimeter poskytuje akceptovateľnú hranicu chýb v laboratórnych podmienkach.
• Výsledná interpretácia, rovnako ako všetky laboratórne interpretácie, nemôže byť založená na výsledkoch jedného
samotného testu, ale na prehľade klinických dát a iných výsledkoch testov antibiotík.
• Účinnosť testu nezávisí iba na aktivite disku, ale tiež na ďalších faktoroch akými je používanie vhodného inokula a kontrolných
kmeňov, vhodné a vopred otestované kultivačné médium a správne uchovávanie.
12- LITERATÚRA
1) Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and detection of this
important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2) Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3) Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid for the
detection of Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P
4) CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute/ National Committee for Clinical Laboratory Standards
5) CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
KRĄŻKI ANTYBIOGRAMOWE DO WYKRYWANIA BETA-LAKTAMAZ O
ROZSZERZONYM SPEKTRUM (ESBL)
50 KRĄŻKÓW W RURCE
TEST POTWIERDZENIA DO WYKRYWANIA ESBL
1- ZNACZENIE KLINICZNE
Wykrywanie beta-laktamaz o rozszerzonym spektrum (ESBL) komplikuje duża różnorodność enzymów
plazmidowych, które hydrolizują i inaktywują liczne beta-laktamy. Enzymy te stale rozprzestrzeniają się wśród
wielu gatunków bakterii. Wykrywanie tego rodzaju fenotypu oporności ma dwa cele: zastosowanie
odpowiedniego leczenia oraz kontrola rozpowszechnienia tego mechanizmu oporności (1) (2).
2- ZASADA METODY
Metoda polega na porównaniu in vitro aktywności krążków z cefalosporynami trzeciej generacji (3GC) oraz
krążków zawierających tę samą cefalosporynę w połączeniu z kwasem klawulanowym (3GC + CA).
Interpretacja opiera się na rekomendacjach CLSI/NCCLS i/lub dostawcy (3), dotyczących wykrywania ESBL u
Enterobacteriaceae, w szczególności u szczepów wytwarzających duże ilości cefalosporynaz.
3- POSTAĆ TESTU
Krążki produkowane przez Bio-Rad mają średnicę 6.5 mm i wykonane są z bibuły wysokiej jakości
impregnowanej roztworami antybiotyków i inhibitora o dokładnie określonym stężeniu.
Krążki z każdej strony są wyraźnie oznakowane 4 literowym symbolem.
STĘŻENIE
SYMBOL
OPAKOWANIE
NR KAT.
Ceftazydym + kwas klawulanowy
30 / 10 µg
CCAZ
1 x 50 krążków
68446
Cefotaksym + kwas klawulanowy
30 / 10 µg
CCTX
1 x 50 krążków
68456
Cefepim + kwas klawulanowy
30 / 10 µg
CFEP
1 x 50 krążków
68466
4- PRZECHOWYWANIE
Podana data ważności odnosi się wyłącznie do krążków w nie otwieranym opakowaniu, przechowywanym
zgodnie z zaleceniami producenta. Data ważności i numer serii znajdują się na etykiecie (na rurce z krążkami
oraz na opakowaniu zewnętrznym).
•
Rurki z krążkami należy przechowywać w oryginalnym opakowaniu w temp. +2-8°C w suchym miejscu.
•
Przed otwarciem opakowanie z krążkami musi osiągnąć do temperaturę pokojową (18-30°C). Po wyjęciu
potrzebnej liczby krążków, pozostałe schować do temp. +2-8°C.
•
Nie używać krążków po upływie terminu przydatności. W przypadku krążków, które były pozostawione w
temperaturze pokojowej (18-30°C) ponad 8 godzin, należy zweryfikować ich aktywność przed dalszym
użytkowaniem (5).
•
Krążki pozostające w dyspenserze powinny być przechowywane w temperaturze +2-8°C w suchym miejscu,
z pochłaniaczem wilgoci wewnątrz pojemnika dyspensera.
Stabilność krążków w otwartym opakowaniu lub w dyspenserze (przechowywanych zgodnie z zaleceniami z
pochłaniaczem wilgoci) została potwierdzona w warunkach rutynowego użytkowania. Stabilność krążków,
wyrażona w tygodniach, została przedstawiona wewnątrz symbolu:
1
5- INNE NIEZBĘDNE MATERIAŁY
•
dyspenser krążków na 6 krążków
nr kat. # 50271
na 8 krążków
nr kat. # 50270
na 12-16 krążków
nr kat. # 50295
•
podłoża mikrobiologiczne (Mueller-Hinton)
•
odczynniki
•
szczepy wzorcowe bakterii
•
wzorzec gęstości inokulum odpowiadający 0.5 w skali McFarlanda
•
sprzęt laboratoryjny do oznaczania wrażliwości na antybiotyki metodą dyfuzyjno-krążkową.
6- ZALECENIA DLA UŻYTKOWNIKA
Należy postępować zgodnie z najnowszymi wytycznymi (CLSI/NCCLS, CA-SFM). Należy
przestrzegać zasad bezpieczeństwa pracy z materiałem zakaźnym.
Wykorzystane hodowle i wszystkie zanieczyszczone nimi materiały poddać sterylizacji.
7- PROCEDURA
Próbki: Testu wrażliwości nie należy wykonywać na podłożach z bezpośrednio wysianym materiałem
klinicznym. Sposób przygotowania stosowanego do testu inokulum bakterii (czysta, młoda hodowla), opis
metody wysiania go na płytki Petriego, oraz temperaturę i czas inkubacji zawierają aktualne zalecenia
CLSI/NCCLS i CA-SFM.
Antybiogram należy wykonać zgodnie z instrukcjami CLSI/NCCLS i CA-SFM. Krążki nasycone 3GC+CA w
określonym stężeniu (CCAZ 30µg/10 µg, CCTX 30µg/10 µg, CFEP 30µg/10 µg) oraz krążki z samą 3GC (CAZ
30µg, CTX 30µg, FEP 30µg) należy ułożyć na powierzchni odpowiedniego, zaszczepionego podłoża.
Należy przestrzegać zasad dobrej praktyki laboratoryjnej.
8- INTERPRETACJA WYNIKÓW
•
Należy dokładnie zmierzyć średnice stref zahamowania wzrostu bakterii wokół krążków
- Ceftazydym + kwas klawulanowy / ceftazydym
- Cefotaksym + kwas klawulanowy / cefotaksym
- Cefepim + kwas klawulanowy / cefepim
•
Szczep ma fenotyp oporności ESBL, jeżeli w obecności CA zostaje zachowana aktywność 3GC.
•
Aby szczep został uznany za dodatni pod względem ESBL, w przypadku co najmniej jednej cefalosporyny
różnica wielkości strefy zahamowania wzrostu pomiędzy 3GC+CA i 3GC musi być równa lub większa od 5
mm (3) (4).
9- WŁAŚCIWOŚCI / KONTROLA JAKOŚCI
Aktywność krążków należy systematycznie kontrolować przy pomocy następujących szczepów wzorcowych:
•
•
®
Klebsiella pneumoniae ATCC 700603
- CCTX-CTX
≥
3 mmc
- CCAZ-CAZ
≥
5 mmc
- CFEP-FEP
≥
2 mmd
®
Escherichia coli ATCC 25922
- CCTX-CTX
≤
2 mmc
- CCAZ-CAZ
≤
2 mmc
- CFEP-FEP
≤
: Standard CLSI/NCCLS
d
: Standard wewnętrzny
2 mmd
c
10- KONTROLA JAKOŚCI PRODUCENTA
Odczynniki zostały przygotowane zgodnie z systemem jakości, poczynając od materiałów wyjściowych, aż do
ostatecznego produktu komercyjnego.
2
Odczynniki każdej serii podlegają oznaczeniu kontrolnemu i są dopuszczane do użytkowania, jeśli spełniają
wymagane kryteria. Bio-Rad posiada protokoły produkcji i kontroli jakości każdej serii.
11- OGRANICZENIA METODY
•
Wykrycie fenotypu oporności takiego jak ESBL polega na pomiarze stref zahamowania wzrostu i często
zależy od różnicy 1 milimetra w wielkości porównywanych stref zmierzonych dla dwóch krążków, co
odpowiada marginesowi błędu laboratorium.
•
Ostateczna interpretacja, podobnie jak w przypadku innych testów laboratoryjnych, nie powinna opierać się
na wyniku pojedynczego testu, lecz uwzględniać także dane kliniczne, oraz wyniki wrażliwości uzyskane dla
innych antybiotyków.
•
Prawidłowe wykonanie testu wrażliwości zależy nie tylko od aktywności krążków, lecz i od szeregu innych
czynników, jak stosowane inokulum, szczepy wzorcowe, podłoża, oraz sposób przechowywania krążków.
12- BIBLIOGRAFIA
1) Bradford, P. Extended-spectrum beta-lactamases in the 21st century: characterization, epidemiology, and
detection of this important resistance threat. Clin Microbiol Rev 2001;14:933-51.
2) Livermore D. Beta-lactamases in laboratory and clinical resistance. Clin Microbiol Rev 1995;8:557-84.
3) Bert F and al. Comparison of disks of cefotaxime, ceftazidime and cefepime combined with Clavulanic Acid
for the detection of Extended-Spectrum Beta-lactamases. 24th RICAI 2004; 556/91P.
4) CLSI/NCCLS: Clinical and laboratory Standards Institute / National Committee for Clinical Laboratory
Standards
5) CA-SFM: Comité de l’Antibiogramme de la Société Française de Microbiologie
Bio-Rad
3, boulevard Raymond Poincaré
92430 Marnes-la-Coquette France
Tel. : +33 (0) 1 47 95 60 00
Fax : +33 (0) 1 47 41 91 33
05/2005
3