MEDIO DE TIOGLICOLATO USP Medio de cultivo Caldo Tioglicolato

MEDIO DE TIOGLICOLATO USP
Medio de cultivo Caldo Tioglicolato USP
INTRODUCCIÓN:
El medio de cultivo de Tioglicolato USP, es un Medio líquido que ha sido preparado por MEDIBAC
LAB específicamente para pruebas de control de esterilidad según la fórmula especifica de la US
Pharmacopoeia, principalmente para el cultivo de microorganismos de difícil crecimiento y
microorganismos de crecimiento rápido entre los que se incluyen bacterias aerobias, anaerobias y
micro aerofilos que pueden estar presentes en una amplia variedad de muestras. Este medio se
presenta en tubo de vidrio de 13 X 100 mm con tapa de polipropileno y banda termo encogible.
COMPONENTES:
1. 20 unidades por funda
2. Inserto
MATERIALES REQUERIDOS NO
SUMINISTRADOS:
1. Asas Bacteriológicas
2. Hisopos estériles desechables
3. Guantes estériles
4. Tapa bocas
5. Estufa a 37°C
6. Mechero de Bunsen
METODOLOGÍA
Principio del método: Este medio es utilizado principalmente para realizar pruebas de esterilidad de productos varios
tanto líquidos como sólidos biológicos o no. Este medio permite un buen crecimiento de microorganismos aerobios, micro
aerofilos y anaerobios por la adición de un agente reductor y pequeñas cantidades de agar.El medio base para su
preparación es obtenido comercialmente de una casa internacional productora y tiene la siguiente composición en gramos
por litro.
Extracto de levadura………… ………………….5.0 g
Digerido pancreático de caseína…………………15 g Dextrosa……………………………………………...5.5 g
Cloruro de Sodio………………………………….2.5 g
L-Cistina……………………………………………0.5 g
Resazurina de Sodio………………………………..0.001 g
Agar………………………………………………….0.75 g
Tioglicolato de Sodio…………………................0.5 g
La dextrosa, el digerido pancreático de caseína, el extracto de levaduras proveen los factores necesarios para el
crecimiento y la buena multiplicación bacteriana. La adición de una pequeña cantidad de agar favorece aun más la buena
recuperación de microorganismos anaerobios. El Tioglicolato de Sodio y la L-cistina actúan como agentes reductores y
neutraliza el efecto toxico de los preservativos mercuriales y de los peróxidos formados en el medio, promoviendo la
anaerobiosis y haciendo el medio muy utilizable en materiales que contengan metales pesados. La resazurina de sodio es
un indicador de los cambios de oxido-reducción del medio.
CRITERIOS DE DESEMPEÑO Y LIMITACIONES DEL MÉTODO
Este medio permite la recuperación de microorganismos aerobios y anaerobios. Los microorganismos aerobios tratan de
crecer hacia el nivel superior del medio donde la concentración de oxigeno es mayor, los microorganismos anaerobios
tienden a crecer hacia el fondo del tubo, los anaerobios facultativos dan un crecimiento en la totalidad del tubo y los micro
aerofilos crecen mejor por debajo del tercio superior del tubo. Las muestras procedentes de productos estériles no deben
mostrar ningún tipo de crecimiento. Para hacer una identificación del microorganismo recuperado, el laboratorio deberá
proceder con la metodología pertinente hasta obtener suidentificación.
PREPARACIÓN DE LOS REACTIVOS:
El Medio de Tioglicolato en tubo viene listo para ser utilizado.
CONDICIONES DE ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD
El Medio Tioglicolato debe conservarse en condiciones óptimas el medio y observarse muy cuidadosamente las condiciones
físicas del medio antes de utilizarlo.
De acuerdo al estudio (Condiciones de Almacenamiento de los Medios) realizados por Medibac Lab. Los medios de cultivos
preparados para su transportación tienen una tolerancia de hasta 24 horas con una temperatura de 2 a 35°C, una vez
llegado a su destino final el mismo debe ser almacenado a una temperatura de 4 a 8°C.
Nota: El producto debe evitar temperaturas inferiores a -0°C para evitar congelación del medio, lo que ocasionaría el
deterioro del mismo, y evitar temperaturas superiores a 35°C para que no produzca condensación interna en la placa lo que
podría afectar la fidelidad de los resultados.
Conservado en condiciones óptimas el medio es estable hasta la fecha de expiración señalada.
El usuario deberá por tanto tener en consideración los siguientes puntos.
-Aspecto del medio: Solución clara a ligeramente opalescente que contiene un anillo rosado de resazurina en la parte
superior del tubo que ocupa no más del 10% del volumen total de medio cuando el tubo está en posición vertical. El medio
no debe contener partículas en suspensión y la opalescencia presente en el medio es siempre debida al contenido de agar.
Fecha: 06/04/2015 Rev.01
-Volumen del medio: Para el tubo de medio de cultivo ofrecido por MEDIBAC LAB el volumen de medio debe ser como
mínimo de 17cc.
-Integridad de la tapa y de la banda
Termoencogible: Utilice únicamente los medios perfectamente sellados y que presenten la banda termo encogible intacta.
-Identificación del medio: Verifique el número de lote del medio utilizado, fecha de producción y fecha de expiración, no
utilice medios expirados.
Nota: Si más de la tercera parte del medio ha adquirido una coloración rosada, las condiciones anaeróbicas del medio
pueden restaurarse por calentamiento por una sola vez en baño de María a temperatura de ebullición por diez minutos
hasta observar que la tonalidad rosada desaparece; y puede utilizarlo inmediatamente que el medio este a temperatura
ambiente, cuando el anillo rosado ha recuperado su porcentaje normal en el medio.
PROCEDIMIENTO:
1. Tomar la muestra del sitio requerido para el estudio. En el caso de líquidos ó muestras enviados al laboratorio manipular
la muestraen condiciones de estricta asepsia y antisepsia, tomando todas las precaucionesde bioseguridad.
2. Las muestras tomadas con escobillón deben utilizar un escobillón estéril humedecido en solución salina estéril o
humedecido con el mismo medio; Inocular la muestra con el escobillón en el tubo que contiene el medio Tioglicolato
asegurándose de realizar una suspensión homogénea en el mismo.
3. Para muestras liquidas utilizar asa bacteriológica.
4. Para material particulado o biopsias de tejido sembrar directamente la muestra introduciéndola en el medio.
5. Para otro tipo de muestras debe seguir el protocolo correspondiente.
6. Para la respectiva identificación seguir los protocolos microbiológicos correspondientes.
7. Se recomienda realizar una prueba de esterilidad por cada proceso, incubando un tubo no sembrado, el cual deberá
mostrar no crecimiento.
INTERPRETACIÓN DE RESULTADOSANALITICOS:
Cualquier tipo de crecimiento microbiano en el Medio Tioglicolato se evidenciara por turbidez del medio, e indica que la
muestra procesada está contaminada.
CONTROL DE CALIDAD:
El caldo Tioglicolato tiene un estricto control de calidad durante el proceso de producción y al producto terminado que
incluye el cumplimiento de especificaciones tales como: Aspecto del medio, Estabilidad del medio de cultivo por siete días,
Volumen, Apariencia física, Presencia del anillo de resazurina, Verificación de pH
ASPECTOS FISICOS DEL MEDIO
Apariencia
Medio liquido de color ambar palido ligeramente opalescente con anillo
de resarzurina de color rosado en la parte superior del tubo.
Ambar palido ligeramente opalescente
Color del medio solido
pH
Consistencia
6,98 - 7,2
El medio debe ser limpido y puede presentar algunas particulas
pequeñas en suspension de color rojo oscuro, propias de la presencia de
resarzurina en el medio. La transparencia no es total debido a la
presencia de agar.
CUMPLE
CUMPLE
7,1
CUMPLE
5ml de caldo en tubo de ensayo.
5 ml
Tubo de vidrio borosilicato 16X100 mm (9ml) NO ADITIVE, con tapa de
polipropileno.
CUMPLE
Volumen del medio
Caracterisitcas del tubo
ESTADO
El tubo debe estar sellado con banda termoencogible y completamente
Cierre hermetico del tubo
cerrado.
El desempeño del medio se controla mediante el cultivo de cepas control ATCC de:
Staphylococcus aureus 25923
Enterococcus faecalis 29212.
Sreptococcus pyogenes 19615
Salmonella typhi 14028
Candida albicans 10231
CUMPLE
VALOR DE REFERENCIA:
En este medio de cultivo deben crecer toda clase de microorganismos tales como bacterias gram-positivas y gramnegativas aerobias, anaerobias y hongos.
PRECAUCIONES Y ADVERTENCIAS:
Se debe observar estrictas medidas de asepsia y antisepsia. Desechar todos los elementos utilizados en recipientes con
solución de Hipoclorito de Sodio al 2.5%. Los cultivos una vez leídos deben esterilizarse en autoclave y luego desecharse
en solución de hipoclorito de Na al 2.5% para que este desecho líquido sea recogido por una compañía especializada en
desechos biológicos. El tubo de vidrio puede lavarse y esterilizarse para ser reutilizado.
Laboratorio Fabricante: Medibac
Química Responsable: Dra. Juana Cedeño Vélez.
Fecha: 06/04/2015 Rev.01