MÉTODOS DE ESTUDIO PARASITOLOGÍA Y MICOLOGÍA

MÉTODOS DE ESTUDIO
PARASITOLOGÍA Y MICOLOGÍA
Dpto. Parasitología y Micología
CEFA
IMPORTANCIA
 Diagnosticar patologías propiciando su prevención y/o
detección precoz (enteroparasitosis).
 Promover el diagnóstico diferencial entre posibles
patologías, dando oportunidad de tratamiento específico
(infecciones: parasitarias, micóticas, bacterianas).
 Evaluación de una enfermedad ya instalada contribuyendo a
escoger la mejor conducta terapéutica (hidatodisis).
 Estimar actividad o recurrencia de una patología
(toxoplasmosis).
FASES DEL PROCESO DE
LABORATORIO
 PREANALITICA: es la que insume mayor tiempo, solicitud,
obtención, almacenamiento, transporte, recepción y la que
está sujeta a mayor porcentaje de errores.
 ANALITICA: corresponde a la realización del procedimiento
diagnóstico. Incluye validación de las técnicas, calibración de
equipos, ejecución de controles de calidad, etc.
 POSANALITICA: Cálculos, interpretación de resultados,
validación, emisión del informe.
METODOS DIRECTOS
Son aquellos que ponen en evidencia
el agente o sus formas evolutivas,
fragmentos, antígenos, ADN, etc
etc..
MÉTODOS DIRECTOS
O PARASITOLÓGICOS
 Son los que permiten visualizar directamente
parásitos u hongos en un material patológico, o
aislarlos del mismo.
 Los parásitos y hongos pueden ser vistos
estudiando el material “en fresco” o mediante
coloraciones u otros artificios.
MÉTODOS DIRECTOS
 Los materiales pueden ser tratados previamente, para
concentrar y/o mejorar la visualización de parásitos y
hongos en ellos.
EJEMPLOS
 Coproparasitario: incluye “limpieza” de la suspensión
de materias fecales y enriquecimiento por
centrifugación.
 Tratamiento de expectoraciones con soluciones
cáusticas (reblandece el mucus y “aclara” las
preparaciones).
MÉTODOS DIRECTOS
• El
EXAMEN EN FRESCO
material se coloca sobre una lámina
portaobjetos, montado en algún medio líquido o no,
cubierto con una laminilla, para su observación al
microscopio.
Los líquidos de montaje (solución salina fisiológica, hidróxido de
sodio o potasio 10-20%, lactofenol-azul algodón, lugol, glicerina
tamponada) facilitan la observación microscópica evitando
distorsiones de la luz, reblandeciendo el material y/o aumentando el
contraste de los objetos buscados.
EXAMEN EN FRESCO
Huevo de A.aegypti
Quistes de E.histolytica/dispar
C. neoformans
Larva S.stercoralis
COLORACIONES
COLORACIONES PANÓPTICAS:
PANÓPTICAS: Giemsa, May GrunwaldGrunwald-
Giemsa, hematoxilina eosina, otras coloraciones
hematológicas (frotis o cortes histológicos).
HE
Quiste tisular de T.gondii
Frotis. H. capsulatum
GIEMSA
Corte histológico. Candida spp.
Corte histológico. Gránulo actinomicótico.
Frotis. Pseudoquiste T. gondii.
COLORACIONES ESPECÍFICAS
Ziehl
Ziehl--Neelsen, Kinyoun
(ácido--alcohol resistencia)
(ácido
Tricrómica (protozoarios
entéricos, microsporidios).
 Gomori, methenamino plata
(pared de los hongos)
● Hematoxilina férrica
(membrana,
núcleos y otros
componentes de
protozoarios)..
protozoarios)
CULTIVOS I
MEDIOS GENERALES
 Sirven para el aislamiento primario de una
variedad de agentes
 Pueden ser modificados con el agregado o cambio
de algún componente para darle mayor
especificidad
EJEMPLOS
 Sabouraud, para hongos
 NNN, para protozoarios hemoflagelados
CULTIVOS II
MEDIOS SELECTIVOS
 Sirven para el aislamiento de un agente o
grupo de agentes determinados
 Tienen una formulación muy bien definida
EJEMPLOS
 DTM, para dermatofitos
 LIT: para tripanosomas
TÉCNICAS DE AISLAMIENTO
POR INOCULACIÓN
 En animales de experimentación.
 Excepcional (aunque es necesario frente a
determinados agentes de difícil identificación o
aislamiento por otros medios, ej: Toxoplasma
gondii en líquido amniótico)
 Exige seguir rigurosas normas de bioética,
bioseguridad y calidad operacional.
DETECCIÓN DE OTROS
COMPONENTES PARASITARIOS
Mediante diversas técnicas también se
puede evidenciar:
 Antígenos.
 Ácidos nucleicos.
 Otras moléculas.
TÉCNICAS INMUNOLÓGICAS
DIRECTAS
DETECCIÓN DE ANTÍGENOS
ÁCIDOS NUCLEICOS
MÉTODOS INDIRECTOS
INMUNOLÓGICOS
Son los que permiten suponer la presencia
de parásitos u hongos en el organismo,
mediante el estudio de la respuesta del
hospedero (producción de Anticuerpos
específicos, reacciones de hipersensibilidad
tardía, producción de linfoquinas, etc.).
TÉCNICAS DE PRECIPITACIÓN
EN GEL DE AGAR
TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN
• Aglutinación directa:
Suspensiones de parásitos enteros
son enfrentadas a sueros de pacientes.
Los Ac (Y) presentes aglutinan los
parásitos, formando acúmulos
consistentes.
Y
Y
•Aglutinación de partículas
(látex, betonita, carbón,etc.):
Suspensiones de partículas inertes, con
su superficie cubiertas de Ag
parasitarios, son enfrentadas a sueros
de pacientes. Los Ac presentes
aglutinan estas partículas, formando
acúmulos consistentes.
Y
Y
Y
TÉCNICAS DE AGLUTINACIÓN
TÉCNICAS DE MARCADO
DE LA REACCIÓN AgAg-Ac
TÉCNICAS DE MARCADO
DE LA REACCIÓN AgAg-Ac
SEGÚN LA FINALIDAD
DEL ESTUDIO
 Técnicas de screening: utilizadas para estudio
de grandes poblaciones.
 Técnicas confirmatorias: utilizadas para
confirmar un diagnóstico en forma específica.
CLASIFICACIÓN
Técnicas Inmunológicas
1. CUALITATIVOS: positivos o negativos
2. CUANTITATIVOS: miden la concentración
del Ac a estudiar.
CUANTITATIVOS
TÍTULOS: máxima dilución del suero problema qu
arroja un resultado positivo (Ej: 1/16; 1/128; 1/2048)
UNIDADES PREDETERMINADAS: cuando el valor
obtenido como resultado es comparado a un patrón
predeterminado de densidad óptica, fluorescencia ,
luminiscencia o concentración conocida de Ac
específicos, que expresa el “punto de corte” de la
técnica (cutoff o valor límite que diferencia positivos y
negativos) (Ej: UI/ml; Index Value; MIU/ml; OD; etc.)
COMPORTAMIENTO DE LAS
TÉCNICAS SEROLÓGICAS I
DESDE EL PUNTO DE VISTA ANALÍTICO
 SENSIBILIDAD: expresa la capacidad de la técnica para
detectar las menores concentraciones posibles de los
anticuerpos (o antígenos) buscados.
 ESPECIFICIDAD: expresa la capacidad de esa técnica
para diferenciar los anticuerpos específicos (o antígenos)
buscados de otros presentes en el material en estudio.
estudio.
COMPORTAMIENTO DE LAS
TÉCNICAS SEROLÓGICAS II
DESDE EL PUNTO DE VISTA CLÍNICO
 SENSIBILIDAD: expresa la capacidad de la
misma para diagnosticar casos positivos en el
conjunto de personas estudiadas.
 ESPECIFICIDAD: expresa, la capacidad de
determinar resultados verdaderos.
AUTOMATIZACIÓN
 Existen equipos electrónicos, que permiten la automatización de
los procedimientos y el análisis computacional de los resultados.
 La lectura y medida de la [ AcsAcs-Ag ] se hace mediante
colorímetros, fluorómetros, fotómetros, etc.,
 Facilitando la padronización y reproducibilidad de las técnicas,
mayor precisión y registro de resultados, mejor cuantificación y
valoración de los mismos.
 Disminuye los errores y permite un mejor control de calidad.
EJEMPLO
Cono fase sólida y pipeteo
Tira
Buffer lavado
Muestra Diluyente
Conjugado
REACCION INMUNOLOGICA
Substrato
photodiodo
REACCION ENZIMATICA
CUIDADOS PARTICULARES
• ETAPA PREANALÍTICA: registro de datos,
recolección, preparación y conservación de la
muestra...
• ETAPA ANALÍTICA: manejo de la muestra,
bioseguridad, calidad operacional, control de
calidad interno y externo...
• ETAPA POSTANALÍTICA: registro,
interpretación y validación de los resultados,
expresión de los resultados, expresión de los
valores de referencia...
PREGUNTAS?