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Thermo Scientific™ Richard-Allan Scientific Chromaview® – Tinción Avanzada
Tinción de Ácido Periódico Schiff con Azul de Alcián a pH 2,5
Instrucciones de uso
Análisis técnico
Resultados
Microtomía
Realice cortes de parafina de 4 a 6 micrones.
Fijación
Formol al 10%, Pen-Fix de Thermo Scientific o Carnoy. Evitar fijadores que contengan glutaraldehído para
evitar la tinción no específica del fondo.
Control de calidad
Debe utilizarse un corte de riñón o mucina que contenga tejido (como intestino delgado).
Sustancias mucosas ácidas: Azul
Polisacáridos neutros: Magenta
Otras sustancias y mezclas de los elementos mencionados arriba pueden aparecer púrpuras. El color puede
variar de púrpura azulado a violeta.
Núcleos: Azul si se realiza una tinción de contraste opcional con hematoxilina 7211
Procedimiento técnico
Protocolo de tinción estándar
1. Desparafinar e hidratar con agua desionizada.
2. Colocar los portaobjetos en solución de tinción de Azul de Alcián a pH 2,5 durante 30 minutos, a temperatura ambiente.
3. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
4. Colocar los cortes en una solución de Ácido Periódico durante 5 minutos, a temperatura ambiente.
5. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
6. Teñir los cortes en reactivo de Schiff durante 15 minutos.
7. Enjuagar los cortes con agua corriente tibia durante 10 minutos.
8. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
9. Tinción nuclear opcional:
a. Hematoxilina 7211 durante 1 minuto.
b. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
c. Teñir los cortes en un reactivo azul durante 1 minuto.
d. Enjuagar los cortes con agua corriente durante 1 minuto.
10. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
11. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno.
12. Limpiar los cortes con tres cambios de reactivo de limpieza durante 1 minuto cada uno y proceder al
montaje.
Protocolo de tinción con microondas
1. Desparafinar e hidratar con agua desionizada.
2. Colocar los cortes en un recipiente Coplin plástico que contenga solución de tinción de azul de alcián a pH
2,5.
3. Colocar en el microondas durante 25 segundos al 80% de potencia para alcanzar 60 °C.
4. Incubar los cortes durante un minuto más en solución de Azul de Alcián calentada.
5. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
6. Colocar los cortes en una solución de Ácido Periódico durante 5 minutos, a temperatura ambiente.
7. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
8. Colocar los cortes en un recipiente Coplin plástico que contenga reactivo de Schiff.
9. Colocar en el microondas durante 25 segundos al 80% para alcanzar 60 °C.
10. Retirar los cortes del microondas y agitar la solución para equiparar la temperatura.
11. Permitir que los cortes permanezcan en la solución tibia durante 5 minutos más.
12. Enjuagar con agua corriente tibia durante 10 minutos.
13. Tinción nuclear opcional:
a. Hematoxilina 7211 durante 1 minuto.
b. Enjuagar los cortes con varios cambios de agua desionizada.
c.Teñir los cortes en un reactivo azul durante 1 minuto.
d. Enjuagar los cortes con agua corriente durante 1 minuto.
14. Enjuagar con agua desionizada.
15. Deshidratar los cortes con dos cambios de alcohol absoluto durante 1 minuto cada uno.
16. Limpiar los cortes con tres cambios de reactivo de limpieza durante 1 minuto cada uno y proceder al
montaje.
Análisis
Se recomienda enfáticamente almacenar el reactivo de Schiff bien tapado a 2-8 °C en el refrigerador de
laboratorio; esto asegura una estabilidad más duradera. Si se almacena inadecuadamente, el reactivo de Schiff
puede formar un precipitado blanco. En la mayoría de los casos, pequeñas cantidades de precipitado blanco no
serán un impedimento para la tinción. Sin embargo, cantidades mayores de precipitado blanco pueden tener
como consecuencia una reacción débil de la tinción con Schiff. Todos los reactivos de tinción deben almacenarse
en un refrigerador a 2-8 °C. Los reactivos de tinción de Azul de Alcián/Ácido Periódico Schiff son solo para uso
“In Vitro”. Algunos de los reactivos utilizados en este kit se consideran tóxicos. Consulte las Hojas de datos de
seguridad de los materiales para conocer la Información de salud y seguridad. Todos los reactivos son estables y
no deben formar precipitados de aplicarse los parámetros de almacenamiento recomendados. Para obtener los
mejores resultados, se recomienda que el Ácido Periódico y el reactivo de Schiff se desechen después de su uso.
La solución de tinción de Azul de Alcián a pH 2,5 puede volver a filtrarse y usarse. Los reactivos usados para la
técnica de microondas deben desecharse después de su uso. Todos los colorantes utilizados en estas formulaciones están certificados por la Biological Stain Commission.
Comentarios técnicos
Permita el tiempo adecuado para lograr una desparafinización y rehidratación completas de los cortes antes de
la tinción. La rehidratación incompleta puede dar lugar a una tinción deficiente con solución de tinción de azul de
alcián a pH 2,5. Las frecuencias de microondas varían según el modelo. Puede ser necesario ajustar los niveles
de potencia o los tiempos para lograr los resultados deseados. La solución de tinción de azul de alcián a pH 2,5
puede usarse independientemente para la detección de sustancias mucosas carboxílicas y sulfatadas.
Probable modo de acción
El Azul de Alcián reacciona a compuestos que contienen grupos aniónicos como sustancias mucosas ácidas y
mucinas ácidas. Con pH 2,5, las sustancias mucosas ácidas, tanto carboxílicas como sulfatadas, se tiñen de azul.
El Ácido Periódico se usa para oxidar el tejido, a fin de formar grupos aldehídos que son mostrados por el reactivo
de Schiff. El glicógeno y las sustancias mucosas neutras, así como las membranas basales, serán teñidos de
magenta por el reactivo de Schiff. El enjuague con agua corriente desarrolla e intensifica los tonos magenta del
reactivo de Schiff. Puede utilizarse una tinción de contraste para proporcionar detalle nuclear. Se recomienda la
hematoxilina 7211. Sin embargo, la tinción de Rojo Nuclear Rápido Kernechtrot puede utilizarse si se desea una
tinción de rojo nuclear.
Referencias
1. Bancroft, J.D. y Stevens, A. Theory and Practice of Histological Techniques. Churchill Livingstone, New York, NY,
1977.
2. Sheehan, D.C. y Hrapchak, B.B. Theory and Practice of Histotechnology, 2nd Edition. Mosby, St. Louis, MO,
1980.
3. Thompson, C.C. Selected Histochemical and Histopathological Methods. Springfield, IL, 1966.
4. Lillie, R.D., H.J. Conn’s Biological Stains. Williams & Wilkins, Baltimore, MD, 1972.
5. Carson, F.L. Histotechnology: Self-Instructional Text, 2nd Edition. ASCP Press, Chicago, 1997.
Información para pedidos
Producto
Tamaño
Cant. Kit de Azul de Alcián/Ácido Periódico Schiff
1 Kit
1
87023
Solución de tinción de azul de alcián a pH2,5 500 ml
1
88043
Solución de ácido periódico (0,5%)
500 ml
1
88016
Reactivo de Schiff
500 ml
1
88017
Hematoxilina 7211 (no incluida en el kit) 1 pinta
4/cs.
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Ref.
7211