Método de descapsulación de nauplios de Artemia sp. para la

Método de descapsulación de nauplios
391
Método de descapsulación de
nauplios de Artemia sp. para la
alimentación de camarones peneidos
Cecilia Vanegas Pérez y Cecilia Robles Mendoza
Campo de aplicación
Este procedimiento complementario se recomienda para la obtención de
nauplios de Artemia sp. que pueden emplearse como alimento para el cultivo
y mantenimiento de camarones peneidos y otras especies marinas.
Material
Probeta de 500 mL, vasos de precipitados de 500 mL, agitador de vidrio, pipeta serológica de 1 mL (recomendable con graduación de 1/100), bombilla
para pipeta, contenedor plástico con ventana de malla planctónica (100 µL),
contenedor transparente de incubación de 2 L, manguera para acuario, llave
de paso pequeña para acuario y plástico negro grueso.
391
392 Ensayos toxicológicos
Equipo
Lámpara de luz blanca o foco de 40 watts y bomba de aireación.
Reactivos
Hipoclorito de sodio comercial (6% de cloro libre) y agua de mar natural,
artificial o reconstituída.
Organismos
Quistes de Artemia sp.
Procedimiento
Se describe el procedimiento para la descapsulación de 1 g de quistes de Artemia sp. Se recomienda utilizar cepas de Artemia que garanticen un porcentaje
de descapsulación del 90%.
Descapsulación de quistes
Diluir el hipoclorito de sodio comercial con agua de la llave, en una proporción de 1:2. Colocar 1 g de quistes de Artemia sp. por cada 100 mL de la
solución diluida de hipoclorito de sodio y agitar constantemente hasta que la
tonalidad de los quistes cambie de café a anaranjado intenso. Dependiendo
de la cepa de Artemia el cambio de tonalidad ocurre entre 5 y 10 minutos.
Transferir inmediatamente los quistes en un contenedor con una ventana de
malla planctónica (para retener los quistes) y enjuagar con agua de la llave
durante mínimo 1 hora para eliminar el cloro (figura F.1A).
Incubación
Colocar los quistes perfectamente enjuagados en el contenedor de incubación
con 500 mL de agua de mar a 34 ups o agua de mar previamente filtrada.
Mantener los organismos durante 24 a 48 horas a una temperatura de 28 °C,
luz y aireación constante (figura F.1B). La aglutinación de los quistes altera
la eclosión por lo cual es importante mantenerlos en constante movimiento
con aireación desde la base del contenedor de incubación.
Método de descapsulación de nauplios
393
Recolección de nauplios
Para la separación de nauplios y quistes se recomienda bloquear la aireación cerrando la llave de paso y cubrir completamente el contenedor de incubación con
plástico negro, dejando únicamente una pequeña apertura en la parte superior.
Colocar junto a la apertura un foco o lámpara de 40 watts durante al menos 1 hora.
Debido al fototactismo positivo de los organismos, los nauplios se concentrarán en
la parte superior y los quistes precipitados estarán en el fondo del contenedor.
Colectar el precipitado con los quistes sin eclosionar. En otro recipiente
colectar los nauplios eclosionados. Debido a la alta densidad de los nauplios
es probable el incremento de los compuestos de excreción (principalmente
amonio), tanto en el agua como en los nauplios. Estos compuestos pueden a
su vez ejercer un efecto tóxico en las postlarvas de los camarones peneidos.
Por lo tanto, se recomienda enjuagar a los nauplios con agua de mar, concentrarlos en una densidad máxima de 1500 a 1800 nauplios/mL y mantenerlos
en refrigeración hasta su uso. Se recomienda alimentar a las postlarvas de los
camarones peneidos con quistes de Artemia eclosionados el mismo día.
Conteo de nauplios
Colocar a los organismos colectados en un vaso de precipitado de volumen
conocido con agua de mar. Agitar suavemente para que la distribución de los
Figura F.1. Dispositivos para la obtención de nauplios de Artemia sp. A) Para el lavado de
quistes y B) Para la incubación de nauplios. a) ventana de malla planctónica, b) contenedor
de incubación, c) llave de paso y d) soporte
A
B
394 Ensayos toxicológicos
organismos sea homogénea y con una pipeta serológica tomar 1 mL del medio
con nauplios. Debido a que la distribución de los organismos en la pipeta es
irregular, se recomienda contar los nauplios que se encuentren en 0.1 mL de la
parte inicial, media y final de la pipeta. Realizar al menos 10 conteos, obtener
el promedio de organismos en 0.1 mL y extrapolar la densidad a 1 mL.