Método de la membrana filtrante para el análisis microbiológico del

• Introducción
• Objetivo
• Fundamento
Trabajo Práctico Nº 2
MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE
PARA EL ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO
DEL AGUA
• Materiales
• Procedimiento
• Resultados
• Conclusiones
• Actividades Adicionales
INTRODUCCIÓN
• Bibliografía
El agua es un factor importante en la producción de
los medicamentos, por lo tanto su calidad, es de suma importancia ya que es la materia prima más usada y además está presente en otros procesos relacionados con dicha producción, como por ejemplo en
los de limpieza y sanitarización. Es por ello que el
agua puede considerarse una fuente potencial de
contaminación bacteriana de los medicamentos.
En la industria farmacéutica se conocen cinco tipos
de agua: agua potable, agua suavizada, agua desionizada, agua destilada y agua producida por ósmosis
reversa. La calidad microbiológica de cualquier tipo,
dependerá del contenido microbiano del agua utilizada como materia prima, de los métodos de tratamientos a los que es sometida, y de los sistemas empleados para su almacenamiento y distribución.
Para garantizar la calidad microbiológica del agua, es
necesario realizar el control de la misma, utilizando
diferentes métodos, que nos permitan realizar la numeración o el recuento de bacterias aerobias mesófilas, mohos y levaduras, coliformes o la investigación
de microorganismos patógenos.
LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA – MÉTODO DE LA MEMBRANA FILTRANTE PARA EL
ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
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OBJETIVO
Al finalizar, el trabajo práctico, el estudiante estará en capacidad, mediante la consulta bibliográfica y la aplicación de las técnicas microbiológicas, de realizar el
control microbiológico del agua de proceso, utilizando la técnica de la Membrana
Filtrante.
FUNDAMENTO
Este método se fundamenta en determinar el número y tipo de microorganismos
presentes en una muestra de agua de proceso, por medio de la filtración de la
misma a través de una membrana filtrante con poros de tamaño adecuado (0,45
μm de diámetro), la consiguiente retención de los microorganismos sobre dicha
membrana y el cultivo de los mismos en diferentes agares de acuerdo al tipo de
microorganismo.
MATERIALES
Muestra de agua de proceso
Agua peptonada al 0,1 %
Placas estériles con medio ENDO
Placas estériles con agar Sabouraud
Placas estériles con agar Cetrimide
Placas estériles con agar MacConkey
Placas estériles con agar para Recuento en Placa (Agar Standard Methods)
Equipo de filtración (Millipore)
Membranas filtrantes estériles
Bomba de vacío
Pinzas estériles
Estufa
PROCEDIMIENTO
1. Colocar una membrana filtrante estéril, bajo condiciones asépticas, sobre el
centro del portafitro, usando pinzas estériles, con la superficie cuadriculada
hacia arriba.
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2. Ensamblar el equipo, colocando el dispositivo de filtración y asegurando con
una pinza.
3. Verter 100 mL de la muestra de agua, en el portafiltro y proceder a filtrar.
4. Lavar el embudo con aproximadamente 100 mL de agua peptonada al 0,1%.
5. Remover la parte superior del portafiltro, y con una pinza estéril transferir la
membrana a la placa de Petri que contiene el medio de cultivo correspondiente
al microorganismo que se va a identificar: Coliformes en agar endo, bacterias
aerobias mesófilas en agar para recuento en placas, mohos y levaduras en
agar Sabouraud y Pseudomonas aeruginosa en agar cetrimide.
6. Al colocar la membrana, evitar la formación de burbujas entre ésta y el medio
de cultivo.
7. Esperar aproximadamente 20 minutos, para permitir la adhesión de la membrana al medio.
8. Con excepción de las placas de agar Sabouraud, incubar las placas en forma
invertida, a las diferentes temperaturas y tiempos, de acuerdo al microorganismo investigado:
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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
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1. Coliformes:
2. Mohos y Levaduras:
3. Bacterias aerobias
mesófilas
4. Pseudomonas aeruginosa
Agar ENDO
Agar Sabouraud
Agar Recuento
en Placas
Agar cetrimide
Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h
Incubación 25ºC ± 2ºC x 5-7 días
Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h
Incubación 35ºC ± 2ºC x 24-48 h
RESULTADOS
Contar las colonias en las membranas. Expresar los resultados como unidades
formadoras de colonias (u.f.c.) por mL o por 100 mL de agua, considerando el volumen filtrado y el factor de dilución.
CARACTERÍSTICAS DE LOS MICROORGANISMOS RETENIDOS EN LAS
MEMBRANAS FILTRANTES, DE ACUERDO A LOS MEDIOS USADOS.
Bacterias aerobias mesófilas en agar para
recuento en placas.
Mohos y Levaduras en agar Sabouraud.
Coliformes en agar endo.
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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
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Pseudomonas aeruginosa en agar cetrimide
Anotar los resultados:
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CONCLUSIONES
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ACTIVIDADES ADICIONALES
1. Investigue el significado de agua de proceso.
2. Señale las diferencias que existen entre los métodos para el recuento de microorganismos citados en la guía.
3. Investigue para cada medio de cultivo usado en el presente ejercicio práctico,
su composición y las características que presentan los microorganismos en el medio de cultivo para su numeración.
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ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DEL AGUA
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BIBLIOGRAFÍA
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Prescott, L.M. y col. Microbiology. W.C. Brown Publishers. 4ª Edición. (1998).
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(1999).
http://www.bme.es/microkit/pic4sp.html
Prof. Norma De Castro
Prof. María Luisa De Curtis
Enero 2002
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