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MICROPROPAGACIÓN
MEDIOS DE CULTIVO CLÁSICOS
En función de su complejidad, los medios para el cultivo in vitro de tejidos vegetales pueden resultar
atemorizantes para el principiante. Con algunas variaciones, los medios más usados son los
siguientes: Murashige & Skoog (1962), White (1963), Gamborg (1968), Nitsch (1951) y Knop
(1865).
No obstante, la necesidad de utilizar medios bien definidos se aplica fundamentalmente a la
investigación científica. Para el horticultor o para el docente dicha necesidad es menor y, en muchos
casos, los medios alternativos son suficientes para obtener buenos resultados.
1.
MEDIO DE MURASHIGE & SKOOG
De acuerdo con el fabricante (Sigma), el medio basal de Murashige y Skoog M5524 contiene los
macro y micronutrientes de la fórmula clásica original. Puede ser complementado con vitaminas,
sacarosa, agar, auxinas (IAA) y citocininas de modo de generar un medio completo para el
crecimiento de los cultivos de tejidos vegetales.
La formulación demanda 4,3 g de polvo por litro de agua destilada, a la cual se agregan 10-50 g de
sacarosa y 6-8 g de agar bacteriológico.
Preparación (100ml)
1. Pesar 0,43 g de medio M&S y disolver en 90 ml de agua destilada.
2. Agregar 2,5 g de sacarosa o de azúcar cristal.
3. Agregar 0,7 g de agar bacteriológico y calentar hasta que se derrita (*).
4. Llevar a un volumen de 100 ml y mezclar bien.
5. Colocar en los frascos una capa de 2 cm de profundidad.
6. Cerrar los frascos y esterilizar en la olla a presión (20 a 25 minutos contados a partir del momento
en que la válvula deja escapar vapor).
(*) El agar se derrite cuando la temperatura pasa de 90ºC y solidifica cuando
la temperatura baja de 50ºC.
Guia 111
Maria Antonia Malajovich / Guias de atividades
Biotecnologia: ensino e divulgação
http://www.bteduc.bio.br
MICROPROPAGACIÓN / MEDIOS DE CULTIVO CLÁSICOS
2. VARIACIONES DEL MEDIO DE MURASHIGE & SKOOG
2.1. MEDIO DE M&S CON LA MITAD DE LA CONCENTRACIÓN
Por ser un medio rico en sales, el medio de M&S puede ser utilizado con la mitad de la concentración
anterior. En este caso la formulación requiere 0,27 g de medio M&S en 100 ml de agua destilada,
manteniendo las mismas cantidades de sacarosa o azúcar cristal y agar.
2.2. MEDIO DE M&S COMPLEMENTADO CON AGUA DE COCO
Extraer, mezclar y filtrar el agua de 3 cocos verdes. Después de separarla en alícuotas, guardarlas
en el congelador (freezer) hasta el momento de su uso.
Preparación del agua de coco
Extraer, mezclar y filtrar el agua de 3 cocos verdes. Después de separarla en alícuotas, guardarlas
en el congelador hasta el momento de su uso.
Preparación de medio M&S con agua de coco (100ml)
1. Pesar 0,43 g de medio M&S y disolver en 40 ml de agua destilada.
2. Agregar 2,5 g de sacarosa o de azúcar cristal.
3. Agregar 0,7 g de agar bacteriológico y calentar hasta que se derrita (*).
4. Llevar a un volumen de 50 ml y mezclar bien.
5. Agregar 50 ml de agua de coco y mezclar bien.
6. Colocar en los frascos una capa de 2 cm de profundidad.
7. Cerrar los frascos y esterilizar en la olla a presión (20 a 25 minutos contados a partir del momento
en que la válvula deja escapar vapor).
(*) El agar se derrite cuando la temperatura pasa de 90ºC y
solidifica cuando la temperatura baja de 50ºC.
Observación: Otras sustancias de origen vegetal interesantes son el agua de coco, la pulpa de banana
y los jugos de tomate, naranja, uva y ananá (piña).
BIBLIOGRAFÍA
MALAJOVICH M.A. e MANN V.S. Micropropagación. Guía 80: El laboratorio educacional y Guía 96:
Los medios de cultivo. http://www.bteduc.bio.br
Guía 111
María Antonia Malajovich / Guías de actividades
Biotecnología: enseñanza y divulgación
http://www.bteduc.bio.br