CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN ENSAYOS DE MIGRACIÓN ESPECÍFICA EN SIMULANTE E PARA ALIMENTOS SECOS (TENAX®) SECCION MONOMEROS Y ADITIVOS SERVICIO CONTAMINANTES Juana Bustos Centro Nacional de Alimentación AESAN Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 2 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN JUSTIFICACIÓN: BASE LEGAL Reglamento R l t (UE) Nº 10/2011 - Materiales M t i l y objetos bj t plásticos para contacto con alimentos REQUISITOS MATERIALES PLASTICOS DE COMPOSICIÓN • Lista de sustancias • Pureza / calidad técnica • Límites de migración -Global -Específica Específica • Otras restricciones GENERALES DE LOS MATERIALES PLASTICOS • PAAs: migración N.D. (0.01mg/kg alimento) • Metales pesados: límites máximos de migración (Ba Co Cu Fe Li Mn, (Ba,Co,Cu,Fe,Li, Mn Zn) Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 3 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN JUSTIFICACIÓN: BASE LEGAL RESTRICCIONES IMPUESTAS A LAS SUSTANCIAS ¾LIMITE MIGRACIÓN GLOBAL (LMG) Cantidad máxima permitida de sustancias no volátiles liberadas desde un material u objeto en simulantes alimentarios: ≤ 10 mg/dm² material. material (60 mg/kg simulante, materiales destinados a alimentos para lactantes /niños corta edad) ¾LIMITE MIGRACIÓN ESPECIFICA (LME; LME[T]): Cesión C ió máxima á i d sustancias de t i i di id l individuales o grupos de d sustancias, desde el material al alimento o simulante alimentario. (máximo: 60 mg/kg ) Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 4 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN JUSTIFICACIÓN: BASE LEGAL VERIFICACIÓN ANALÍTICA DE LOS LÍMITES MIGRACIÓN: MIGRACIÓN ENSAYO DE MIGRACIÓN ¾ SIMULACION EN EL LABORATORIO DEL CONTACTO MATERIAL-ALIMENTO, MATERIAL ALIMENTO, EN LAS PEORES CONDICIONES PREVISIBLES DE USO REAL (T, t) ¾ SE REALIZA EN: EN ALIMENTOS (ME) materiales en contacto materiales aún no en contacto SIMULANTES DE ALIMENTOS (MG, ME) - materiales aún no en contacto Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN JUSTIFICACIÓN: BASE LEGAL ¾SIMULANTES DE ALIMENTO ALIMENTO: Medios M di d ensayo convencionales de i l para demostrar d t l la conformidad de los materiales / objetos plásticos que aún no están en contacto con los alimentos. alimentos Representan p categorías g de alimentos TENAX ® Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 6 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN Simulantes de alimentos : Regl. 10/2011 (Anexo III) Control oficial: A partir 1 enero 2013 A Etanol 10% (v/v) Alimentos acuosos B 3% (p/v) ac acético Alimentos ácidos-pH<4.5 Alimentos alcohólicos ≤20% y alimentos li con cierto i carácter lipofílico Alimentos alcohólicos >20% y emulsiones grasa en aguaproductos lácteos C Etanol C: Et l all 20 % (v/v) ( / ) D1 Etanol al 50 % (v/v) (especificación en distribución AG) Alimentos con grasa libre superficial E: MPPO Alimentos secos (solo ME) D2 Aceite vegetal A,B,C alimentos hidrofílicos D1, D2 alimentos lipofílicos Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 7 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN SIMULANTE E REGLAMENTO (UE) Nº 10/2011: ¾Introduce el MPPO como simulante convencional para alimentos secos migración específica sólo ¾Introduce límites de migración de sustancias en alimentos secos Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 8 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN SIMULANTE E REGLAMENTO (UE) Nº 10/2011 10/2011, ANEXO III TENAX ® TENAX ® Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 9 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN SIMULANTE E poli(óxido li(ó id de d 2,6-difenil-p-fenileno) 2 6 dif il f il ) (MPPO) – TENAX ® ¾ POLIMERO DE ALTA POROSIDAD ¾ ELEVADA SUPERFICIE ESPECÍFICA: g gran capacidad de adsorción (volátiles) TENAX ® TENAX ® ¾ ESPECIFICACIONES simulante: − tamaño de partícula: 60-80 malla − poro 200 nm Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 10 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN SIMULANTE E ¾ INCONVENIENTES: − Elevado precio. − Requiere limpieza antes del uso. uso − Dificultad en la manipulación. ¾ VENTAJAS: − Reutilizable (tras lavado) Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 11 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN PROCEDIMIENTO DE ENSAYO 9PREPARACIÓN DEL SIMULANTE 9ENSAYO DE MIGRACIÓN (exposición ( p material/simulante) 9 EXTRACCIÓN DEL SIMULANTE 9 DETERMINACIÓN INSTRUMENTAL DE ANALITOS Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 12 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN PREPARACIÓN DEL SIMULANTE LIMPIEZA: eliminación de sustancias adsorbidas 10 0 g de del s simulante u a te e en ca cartuchos tuc os pa para a So Soxhlet. et Reflujo continuo con acetona 6 horas (300 ml, mínimo 250 ml por 20 g simulante). Pasar el simulante a placas de vidrio (ej. 150x25 mm), extendiéndolo. Tapar y dejar 24h, agitar suavemente de vez en cuando. cuando Introducir las placas tapadas en estufa a 160 ºC, 6 horas. Almacenar en desecador hasta su uso uso. Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 13 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN ENSAYO DE MIGRACIÓN MUESTRAS TIPO FILM: OPTATIVO PREVIO AL ENSAYO: Identificación del material ((PP,, PE,, PVC, etc) por espectroscopía IR. Placas de ensayo: Petri de vidrio (60x20 mm) y aro de vidrio interior ((di 4 cm). ) Lavadas con disolvente adecuado. Cortar la muestra (3 replicados), diámetro aprox. igual al exterior del aro de vidrio. Manipulación con guantes de algodón!. Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 14 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN ENSAYO DE MIGRACIÓN IIntroducir t d i la l muestra t cortada t d en la l placa y colocar encima el aro de vidrio. Eliminar la electricidad estática del vidrio y pesar 1 g de simulante sobre la muestra de plástico. Blanco de ensayo: 1 g simulante, simulante sin muestra (film). Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 15 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN ENSAYO DE MIGRACIÓN Envolver las placas en papel de aluminio Estufa / climatizador: tiempo y temperatura de ensayo en función del uso real ((Reg. g ((UE)) 10/2011). ) Ej.: 10 días, 60ºC : cubre período de contacto > 6 meses a Tª ambiente o <, incluido calentamiento hasta 70ºC, 2h ó hasta 100ºC, 100ºC 15 minutos Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 16 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN EXTRACCIÓN DEL SIMULANTE Finalizada la fase de exposición, trasvasar el simulante desde la placa a un vial (40 mL), mL) con ayuda de un embudo. Añadir 20 mL del disolvente de extracción, t ió lavando l d ell embudo. b d Agitador orbital, 1 min, 700 rpm. Decantar el sobrenadante en otro vial. Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 17 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN EXTRACCIÓN DEL SIMULANTE Repetir extracción y combinar sobrenadantes. Concentrar el extracto si es necesario (bajo nitrógeno). Filtrar una alícuota (PTFE, 0.45 µm) en viales para el análisis instrumental st u e ta de las as susta sustancias. c as GC/ MS HPLC/ UV- FL LC/MS etc etc. Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 18 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN DETERMINACIÓN INSTRUMENTAL EJEMPLO 1) ANÁLISIS POR GC/MS ¾Analitos: BHT (cas 128-37-0) antioxidante BP (cas 119-61-9) filtro UV DIBP (cas 84-69-5) DEHA (cas 103-23-1) 103 23 1) DINCH (cas166412-78-8) plastificantes ¾Extracción del Tenax® : Disolvente de extracción: hexano ¾Curvas calibrado en matriz (simulante): patrones añadidos antes de extracción ¾Técnica: Cromatografía C o atog a a de gasesgases Espectrometría spect o et a de masas asas (GC (GC-MS) S) Uso de benzyl butyl phthalate (BBP) como patrón interno Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 19 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN DETERMINACIÓN INSTRUMENTAL ¾ Condiciones GC- MS C Columna: l HP 5MS 5% phenyl HP-5MS h l methyl siloxane. 30m x 250 µm, 0.25 µm Horno: 70°C (1 min); 20°C/min → 250 ºC; 10°C/min → 320°C(6 ( min)) Temperatura Inyector: 280ºC Modo Inyección: splitless Volumen Inyección: 1 µl Flujo: 1.3 ml/min Adquisición: SIM Analito Target Ion Qualifier Ion BHT 205 1 205.1 220 2 220.2 BP 104.9 182.0 DEHA 129 0 129.0 147 0 147.0 DIBP 148.9 223.0 DINCH 155 0 155.0 127 0 127.0 BBP 91.0 149.0 Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 20 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN DETERMINACIÓN INSTRUMENTAL SEPARACIÓN Ó CROMATOGRÁFICA Á ntens. x10 6 BBP 1.2 1.0 0.8 0.6 DEHA BHT 0.4 0.2 DINCH DiBP BP 0.0 6 8 10 12 14 16 matriz: simulante E Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 Time [min] 21 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN DETERMINACIÓN INSTRUMENTAL EJEMPLO 2) ANÁLISIS POR HPLC/UV ¾Analitos: BP (cas 119-61-9) DPBD* (cas 886-65-7) UVITEX ob ( (cas 7128 7128-64-5) 64 5) filtro UV blanqueantes ópticos p * No incluido en la lista positiva ¾Curvas de calibrado en el simulante. ¾Extracción del Tenax® : Disolvente de extracción: acetonitrilo ¾Técnica: Cromatografía de líquidos con detector ultravioleta (HPLC-UV) Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN DETERMINACIÓN INSTRUMENTAL Condiciones HPLC- UV Columna: LUNA C18(2), 50 x 3 mm, 2.5 µm, 30 ºC Fase móvil: A: agua B: ACN/0.1%AcOH Gradiente Tiempo (min) 0 10 15 16 % FM A % FM B 35 5 5 35 65 95 95 65 Analito λ (nm) λ (nm) BP 280 DPBD 230 UVITEX OB 230 Flujo fase móvil: 0.6 ml/min Volumen Inyección: 5 µl Tiempo de análisis: 20 min Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 22 23 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN DETERMINACIÓN INSTRUMENTAL SEPARACIÓN Ó CROMATOGRÁFICA Á BP matriz: simulante E Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 24 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN VALIDACIÓN BASADA EN RESULTADOS DE: precisión exactitud y precisión E. Intercomparación (EURL): Determinación en el SIMULANTE: - 5 ANALITOS BHT BP DiBP DEHA DINCH MIGRACIÓN film polietileno en el simulante (10 días, 60ºC) y determinación en el SIMULANTE: - 3 ANALITOS BP DPBD UVITEX ob - 3 NIVELES concentración - 4 REPLICADOS por nivel - extracción con hexano Técnica : GC/MS (ejemplo 1) - 3 SERIES - 5 REPLICADOS por serie - extracción con ACN Técnica :HPLC/UV (ejemplo 2) Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 25 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN VALIDACIÓN ENSAYO INTERCOMPARACION validación método (EURL) ANALITO BHT BP DiBP DEHA DINCH mg/kg asignado Resultado medio CV % repet. z-score 1.63 1.74 5,8 0.092 3.4175 6.1 -0.235 0.205 0.29 2.8 0.708 0.4867 0.475 5.3 -0.136 1.06875 1.4 0.829 0.2521 0.24 7.6 0.708 1.6463 1.35 7.9 -0.778 1.075 8.4 0.212 0.7928 0.5925 13.8 -0.723 17.4297 17.295 1.5 -0.054 0.054 32.8325 2.6 -0.187 2.8681 3.0575 10.3 0.229 45.3443 39.5425 5.2 -0.739 73.3 13.4 -1 1.258 258 10.755 2.6 0.692 3.47 0.9583 0.9769 33.4127 90.4588 8.976 n=4 n=4 n=4 n=4 n=4 - Extracción: E t ió SIMULANTE E (Tenax®) 5 ANALITOS, 3 NIVELES CONCENTR. - GC/MS Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 26 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN VALIDACIÓN MIGRACION BP, BP DPBD, DPBD UVITEX ob desde FILM PE al SIMULANTE / EXTRACCION SIMULANTE Y ANALISIS POR HPLC/UV Resultados migración (10 días días, 60ºC) 60 C) / HPLC-UV ANALITO resultado medio migración mg/kg simulante (S/V = 6) CV % repet. CV % Reprod. BP 2.710 4,5 16,7 0.948 6.3 7.2 0.170 16.1 29.7 DPBD Uvitex ob 3 SERIES d n= 5 de replicados Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013 CENTRO NACIONAL DE ALIMENTACIÓN SECCIÓN DE MONÓMEROS Y ADITIVOS Juana Bustos [email protected] jbustos@msssi es Mª Luisa Lomo Patricia Martín Marian Puga Carmen Tejedor Luisa Tello Jornadas de Referencia- Análisis de Alimentos – CNA, 6 junio 2013