Inserto CR2003 - Medica-Tec

Prueba de Flujo Lateral CrAg
Para la detección del antígeno criptocócico – REF CR2003
PROCEDIMIENTO BÁSICO CUALITATIVO
1. Agregar 1 gota de diluyente de muestra LF al tubo
2. Agregar 40 µL de muestra de paciente al tubo
3. Insertar la tira como se observa en la figura.
4. Esperar durante 10 minutos.
5. Prueba / Control / Positivo / Negativo
La Criptococosis es causada por las dos
complejo
Cryptococcus
Si el especies
CrAg estádel
presente
en la
muestra, e
Cryptococcus Gatti) (4). Los individuos con
deficiencias
en la inmunidad marcado
celular son
complejo
antígeno-anticuerpo
co
La Prueba de Flujo Lateral CrAg es un sistema
infecciónde(6).
prueba
La Criptococosis
inmunocromatográfica
es una de hasta
las
para
infecciones
que
la detección
interactúa
máscualitativa
comunes
con la Línea
oen los
de pacien
Prueb
semicuantitativa de los antígenos polisacáridos
capsulares
del complejo
especies
Cryptococcus
La detección del
antígeno criptocócico
(CrAg)
El de
complejo
en
suero
antígeno-anticuerpo
y en
LCR ha sidomarcado
ampliam
(Cryptococcus neoformans y Cryptococcus
Gatti) en suero
y en líquido
céfalo raquídeo
sensibilidad
y especificidad
(1-3).
forme(LCR).
una Línea de Prueba visible.
La Prueba de Flujo Lateral CrAg es un ensayo de laboratorio con carácterCon
prescriptivo
un adecuado
que flujo
favorece
y reactividad
el
de lo
diagnóstico de la Criptococosis.
Principios biológicos
negativa, hará que el anticuerpo control con
Los anticuerpos inmovilizados en la Línea
Explicación
La Prueba de Flujo Lateral CrAg es un ensayo
formarán
inmunocromatográfico
una Línea de Control
sandwich.
visible. La
L
muestra se agregan en un reservorio apropiado,
Control). como
Los resultados
un tubo dede
ensayo,
pruebas
en nega
dond
flujo lateral. La prueba utiliza la acción capilar
control,delalaprueba
muestra,
no es
para
válida.
capturar anticue
conjugados con oro coloidal, y anticuerpos control conjugados con oro depositados
Uso pretendido
Materiales provistos
Al manejar muestras de pacientes, deben
Lastomarse
muestras
medidas
en tránsito
adecuadas
deben manteners
para prev
infecciosos potencialmente presentes en la muestra.
A. Diluyente de muestra LF (2,5 ml, REF
Al manipular
GLF025): los
Solución
reactivos
salina
en este
tamponada
kit, utilizar
Procedimiento
conguantes
glicina, siempre,
contienedado
agentes
que algunos re
bloqueantes y un conservante.
0,095% (w/w) de azida de sodio. La azida de sodio nunca debe desecharse por el
B. Tiras de prueba CrAg LF (50 tiras enquímico
un recipiente
puededesecante,
reaccionarREF
con LFCR50).
el plomoProcedimiento
o el cobre de las
cualitativo
cañerías y formar azid
C. Control positivo CrAg (1 ml, REF CB1020):
explosivas.
Solución
Los excesos
salina tamponada
de los reactivos
con deben
glicina desecharse
salpicada con
en un
antígeno
recipiente de resi
criptocócico.
1. Agregar 1 gota de diluyente de muestra
D. Inserto del envase.
Estabilidad y conservación
de microtitulación, tubo de ensayo, etc.).
2. Agregar 40 µL de muestra al recipiente.
Materiales no provistos
Todos los reactivos incluidos en este kit deben
3. Sumergir
conservarse
el extremo
a temperatura
blanco de una
ambiente
Tira d
de vencimiento que figura en las etiquetas
4.de
Esperar
los mismos.
durante 10 minutos.
A. Pipetas (40 µL y 80 µL).
5. Leer y registrar los resultados inmediatam
B. Timer
Recolección de muestras y
C. Tubos microcentrífugos descartables,preparación
tubos de ensayo, o una placa de microtitulación.
Precauciones
Para resultados óptimos, debe utilizarse suero no hemolizado estéril o LCR
procesamiento de las muestras, pueden conservarse a 2º-8º C hasta por 72 horas.
Es necesaria una estandarización específica
Las para
muestras
mantener
pueden
la altaconservarse
calidad de materiales
por períodos
y reactivos.
más extensos a <-20º C, s
Toda modificación de los procedimientos descongeladas
aquí descriptos,y queda
vueltasbajo
a congelar
responsabilidad
reiteradas
del
veces.
usuario.
1
Zygomycetes
La Prueba de Flujo Lateral CrAg fue Candida
evaluadakrusei
para reactividad cruzada contr
pacientes con una variedad de patologíasAnticuerpo
diferentes.antinuclear
Los resultados
positivo
de esta evalua
glabrata
1. Colocar 10 tubos microcentrífugos o tubos
tablade
a continuación.
ensayo en una gradilla apropiada Candida
y etiquetarlos
del 1 al 10 (1:5 a
1:2560). Quizás se requieran diluciones adicionales si la muestra es positiva en Virus
1:2560.
Hepatitis A
Cladosporium trichoides
2. Agregar 4 gotas de diluyente de muestra
LF (REF GLF025)
al tubo%Nº1.
Patología
Cantidad
3. Agregar 2 gotas de diluyente de muestra LF a cada uno
etiquetado Virus
2-10. Hepatitis C
de de los tubos
Positivas
Neisseria meningitidis
4. Agregar 40 µL de muestra al tubo Nº 1 y mezclar bien.muestras
Staphylococcus
aureus
5. Transferir 80 µL de muestra del tubo
Nº 1 al tubo Nº 2 5y mezclar
bien.
con este procedimiento
de
Peniciliosis
0%
(0/5)Continuar
Salmonella
typhi
dilución hasta llegar al tubo Nº Esporotricosis
10.
6
0 % (0/6)
Streptococcus
6. Sumergir el extremo blanco de unaHAMA
Tira de Prueba CrAg 5LF en la0muestra
uno de lospneumoniae
10 tubos.
% (0/5) en cada
Mycobacterium
tuberculosis
7. Esperar durante 10 minutos.
Sífilis
10
0
%
8. Leer y registrar los resultados inmediatamente (ver LECTURA DE(0/10)
LA PRUEBA).
Efecto gancho en altas dosis
Rubeola
5
0 % (0/5)
Lectura de la prueba
Micoplasmosis
10
0
%
Si bien no es frecuente, las concentracio
(0/10)
Leer las reacciones inmediatamente.Toxoplasmosis
La presencia de dos 7
líneas (Prueba
y Control),
pueden
independientemente
dar como resultado
delíneas
la
de prue
0 % (0/7)
intensidad de la línea de prueba, indica
un
resultado
positivo.
negativo.
Si
se
sospecha,
por
tanto,
que
CMV
10
0
%
negativos,
debe
utilizarse
el
procedimiento
(0/10)
Para el procedimiento de titulación semicuantitativo, el título del paciente debe informarse
negativos.como la dilución más
Blastomicosis
10
0
%
alta que arroja un resultado positivo.
(0/10)
Valores esperados y
características de rendimiento
específicas
Procedimiento de
semicuantitativo
titulación
La Prueba de Flujo Lateral CrAg se eval
fueron enviadas a un laboratorio en Esta
muestras fueron analizadas usando la P
criptocócico en látex Immy (REF CR100
criptocócico .
Los resultados de estas comparaciones pu
Comparación del método por
aglutinación con látex
Suero y LCR
Immy LA
Coccidiomicosis
% no aparece, los resultados
Una sola Línea de Control indica resultado
negativo. Si 10
la línea0de control
PossonNeg
(0/10)
inválidos y la prueba debe repetirse.
Ensayo
Pos 121 2
Histoplasmosis
10
0
% CrAg LFA
Neg 0
116
(0/10)
Control de calidad
Candidiasis
10
0
% Suero y LCR
Calculado 95%
(0/10)
CI
Un control positivo (Control PositivoAspergillus
CrAg REF GM
CBO020) 10
puede evaluarse
1 gota de
diluyente de
10
% agregando
100%
97% %Concordancia
muestra LF (REF GLF025) seguido +
de 1 gota de Control Positivo CrAg
tubo. Un control negativo
(1/10)en unpositiva
(121/121)puede
100%
evaluarse agregando 2 gotas de diluyente
en%
un%Concordancia
tubo. Insertar una Tira
de
Prueba
Factorde muestra LF (REF
10 GLF025)
0
98%
94% CrAg LF en los tubos y leerla luego de
10 minutos. Dos líneas (Prueba
y Control)
indican un resultado
positivo, 99.5%
y
reumatoide
(0/10)
(116/118)
negativa
una línea (Control), un resultado negativo.
99.2%
97%
%Concordancia
(237/239)
99.8%
total
Interpretación de los
Por otra parte, se evaluó la reactividad cruzada analizando los filtrados de cultivo d
resultados
rango de concentraciones utilizando la Prueba
de Flujo Lateral
CrAg. con
En concentra
Comparación
del método
antígenos de Paracoccidioides brasiliensis
cierta reactividad cruzada
el demostraron
ensayo EIA Meridian
Para que la prueba sea válida, la Línea de Control debe estar presente. La presencia de dos bandas (una banda
de control y una banda en la zona de la prueba)
indica
un resultado
Antígenos
de los
siguientespositivo.
organismos
fueron
probados y no mostraron
reactividad
Suero
y LCR
EIA Mridian
Aspergillus terreus
Pos Neg
Limitaciones del
Aspergillus fumigatus
Ensayo
Pos 116 7
procedimiento
Aspergillus nige Aspergillus flavus
CrAg LFA
Neg 0
116
El análisis de las muestras de suero hemolizadas
puede
darevaluó
resultados
negativos falsos
debido
al fuerte
color deorganismos
Esta prueba
no se
para reactividad
cruzada
contra
los siguientes
Suero
& LCR
Calculado
fondo de la tira. Esta prueba no fue evaluada para potencial interferencia relativa
al pretratamiento
de la muestra95%
CI
con 2-mercaptoetanol.
Candida dubliniensis
97%
%Concordancia 100%
Pneumocystis carinii
(116/116)
positiva
100%
Candida tropicales
Análisis de reactividad
89%
%Concordancia 94%
Trichosporon beigelii
(116/123)
cruzada
negativa
Candida parapsidosis
2
97%
%Concordancia
total
97%
(232/239)
94%
99%
Concentración
0,50 ng/mL
0,75 ng/mL
1,00 ng/mL
1,25 ng/mL
#
Positivo
0
0
4
12
% Positivo
Negativo
Bajo
Positivo
Moderado
Positivo
2/30
100%
30/30
100%
30/30
0/30
100%
30/30
100%
30/30
0/15
100%
15/15
100%
15/15
2/75
100%
75/75
100%
75/75
0% (0/24)
0% (0/24)
17% (4/24)
50%
Comparación del método
Panel de Sitio
Sitio 2 Sitio 3 General
(12/24)
LCR
1
% Pos % Pos % Pos
semicuantitativo
1,50 ng/mL
21
88%
%
(21/24)
Pos
1,75LCR
ng/mLy 62 sueros)
24
100% analizadas utilizando
Por otra parte, 79 de estas muestras (17
fueron
el procedimiento
de
Negati
0%
0%
0%
0%
(24/24)
titulación semicuantitativo tanto en la Prueba
de
Flujo
Lateral
CrAg
como
en
el
Sistema
de
detección
de
antígeno
vo
0/30
0/30
0/15
0/75
2,00 ng/mL
24
100%
criptocócico en látex Immy
Alto
10%
0%
0%
4%
(24/24)
Negati
0/30
0/15
3/75
2,50 ng/mL
24 arrojó un
100%
(REF CR1003). El análisis de regresión lineal
de los datos
valor R 2 de
0,890. 3/30
vo
(24/24)
Bajo
100%
100%
100%
100%
3,00 ng/mL
24
100%
Límite de detección
positivo
30/30
30/30
15/15
75/75
(24/24)
Moderado
100%
100%
100%
100%
La Prueba de Flujo Lateral CrAg se evaluó para reproducibilidad y precisión
positivo
30/30)
(30/30)criptocócico
(15/15) (75/75)
Para establecer el límite de detección, se llevó a cabo un experimento C5-C95
diluyendo
antígeno
salpi
con antígeno criptocócico para producir un panel consistente en una muestra neg
purificado en diluyente de muestra LF (REF
GLF025),
y analizando
24 réplicas
por concentración
la dos veces
positiva
baja y una
muestra positiva
moderada.
Este panel fueusando
evaluado
Prueba de Flujo Lateral CrAg. Los resultados
de
esta
prueba
se
demuestran
en
la
siguiente
tabla:
total de 5 operadores durante un período de 5 días a fin de determinar la reprod
intra-ensayo. Los resultados de este estudio figuran en la siguiente tabla:
Intervalo
C5 – C95
1.0 -1.5ng/ml
Reproducibilidad y precisión
Panel de
suero
Negativo
Alto
Sitio
1
%
Pos
0%
0/30
7%
Sitio
2
%
Pos
0%
0/30
0%
Sitio
3
%
Pos
0%
0/15
0%
General
% Pos
0%
0/75
3%
Referencias
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Doering, T. L. 2009. Annu. Rev. Microbial. 63:223-247.
Goodman, J. S., L. Kaufman, and M. G. Koening. 1971.. N. Engl. J. Med. 285:434-436.
Kozel, T. R. 1995. Trends Microbial. 3:295-299.
Lin, X. and J. Heitman. 2006. T. Annu. Rev. Microbial. 60:69-105.
Park, B. J., K. A. Wannemuehler, B. J. Marston, N. Govender, P. G. Pappas, and T. M. Chiller. 2009.. AIDS
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Zhou, Q. and W. J. Murphy. 2006. Immunol. Res. 35:191-208.
Immuno-Mycologies, Inc.
2700 Technology Place
Norman
OK
73071
EE.UU.
(405)
360-4669/(800)
654-3639
Fax: (405) 364-1058
E-mail: [email protected]
Web: www.immy.com
CE
EC REP
MDSS
Schiffgraben 41
30175
Hannover,
Alemania
Conservar a
20º-25º C
Número de lote
Fabricado por
Código
Fecha de
vencimiento
Para uso diagnóstico
in vitro
3
De Conformidad con
las normativas
europeas
Contenido suficiente
para < n > ensayos
Proteger de
la humedad
4