HUMAN IgG SUBCLASS LIQUID REAGENT KITS

This product should only be used by suitably trained personnel for the purposes stated
in the Intended Use. Strict adherence to these instructions is essential at all times.
Results are likely to be invalid if parameters other than those stated in these
instructions are used.
HUMAN IgG SUBCLASS LIQUID
REAGENT KITS
(for use on the Siemens BN™II* Analyser)
For in-vitro diagnostic use only
Product Code: NK001.T, NK006.T, NK007.T,
NK008.T, NK009.T
Product manufactured by:
The Binding Site Group Ltd, 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, U.K.
www.bindingsite.co.uk
Telephone : +44 (0)121 456 9500
Fax : +44 (0)121 456 9749
e-mail: [email protected]
*BN™ is a trademark of Siemens Healthcare Diagnostics Inc.
The unopened kits should be stored at 2-8ºC, and can be used until the expiry date
given on the kit box label. Unopened antisera, calibrators, controls and the reaction
accelerator should be stored at 2-8C. Once opened they are stable for four weeks at
2-8C providing precautions to prevent evaporation are taken. Open vials should not be
left on the analyser when not in use. If reagents are left at room temperature for long
periods or repeatedly warmed/cooled this may lead to deterioration.
Over time unopened vials of antisera can develop a precipitate or turbidity which is not
caused by microbial contamination and does not affect the activity of the antisera. In
such cases the antiserum should be clarified by filtration through a disposable filter,
pore size 0.2µm or by centrifugation (10mins at approximately 15,000 x g).
7
8
INTENDED USE
8.1
SUMMARY AND EXPLANATION
The four IgG subclasses show considerable differences in their properties, including
ability to fix complement, to bind to macrophages and to pass through the placenta.
Abnormal levels of one or more subclass may be associated with certain conditions,
including anaphylaxis, autoimmune and gut diseases as well as hypo- and hypergammaglobulinaemia (ref. 1). In particular, reduced production of IgG2 in children may
be associated with recurrent infections (ref. 2). The subject has been reviewed (refs 3,
4). Behring‟s Nephelometer permits fully automatic, rapid quantitative measurement of
precipitation reactions for protein determination and can run all tests concurrently.
4.1
4.2
4.3
5
8.2
REAGENTS
Human IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 antiserum. These antibodies have been
adsorbed to be monospecific for the relevant subclass and are supplied in
stabilised liquid form. They contain 0.099% sodium azide, 0.1% E-amino-ncaproic acid (EACA), 1mM ethylenediamine-tetraacetic acid (EDTA), 0.5% BSA
and 0.01% benzamidine as preservatives.
Calibrators and controls. These consist of delipidated, pooled human serum
and are supplied in stabilised liquid form. They contain 0.099% sodium azide,
0.1% EACA and 0.01% benzamidine as preservatives. The concentration of
IgG subclasses given on the vial has been obtained by comparison with the
DA470k international reference material (refs 5, 6).
Reaction accelerator. Contains 0.099% sodium azide as a preservative.
WARNING: This product contains sodium azide and must be handled with caution;
suitable gloves and other protective clothing should be worn at all times when handling
this product. Do not ingest or allow contact with the skin (particularly broken skin or
open wounds) or mucous membranes. If contact does occur wash with a large volume
of water and seek urgent medical advice. Explosive metal azides may be formed on
prolonged contact of sodium azide with lead and copper plumbing; on disposal of
reagent, flush with a large volume of water to prevent azide build up.
Materials provided in „Combi‟ kit (NK001.T)
NK001.T
1 x 1.6mL
1 x 1.6mL
1 x 1.6mL
1 x 1.6mL
2 x 1mL
2 x 1mL
2 x 1mL
1 x 3mL
Materials provided in „single specificity‟ kits
(NK006.T, NK007.T, NK008.T, NK009.T)
NK006/7/8/9.T
4 x 1.6mL
2 x 1mL
3 x 1mL
3 x 1mL
2 x 3mL
8.3
Materials required but not provided
8.3.1
8.3.2
Equipment for collection and preparation of test samples e.g. sample tubes,
centrifuge etc.
A fully operational and equipped analyser.
8.4
Test procedure
8.4.1
8.4.2
Prepare the analyser as per the user manual.
We recommend that the IgG subclasses should be run separately to other
tests, since they require the use of a reaction accelerator put onto the
analyser as supplementary reagent.
The IgG subclass assay protocols are already defined in the analyser. The
IgG subclass calibrator should be put on the analyser as a Behring standard.
Any Behring reagents should therefore be taken off prior to IgG Subclass
analysis. Parameters are available in the appendix section of the insert.
8.4.3
8.5
To enter the calibrator value
8.5.1
It is likely that either „Prot. Standard PY, OR „Prot.Standard SL‟ have already
been defined as the IgG subclass calibrator for the assays. The user can
confirm this by clicking on to Definition and Standard. If the assay for the
corresponding standard has been defined, there is an “X” in the field at the
intersection of the assay and the standard. This must be the case in order to
proceed.
Click on Calibration and Standard lots. If a Behring lot number already
exists for the calibrator for IgG subclasses (see first vertical column in the
grid) there is no need to change it. If the user cannot see the assay
concerned scroll across the screen until it appears.
Click onto the intersection of the assay and the standard. (There may already
be a previous value here or an “X”.) Click on to the standard name, then click
onto “?”, the question mark icon. This will allow the user to enter the value
given on the IgG subclass calibrator label. Click on to the Save button.
CAUTION
All donors of human serum supplied in this kit have been serum tested and found
negative for hepatitis B surface antigen (HBsAg) and antibodies to human
immunodeficiency virus (HIV1 and HIV2) and hepatitis C virus. The assays used were
either cleared by the FDA (USA) or cleared for in vitro diagnostic use in the EU
(Directive 98/79/EC, Annex II); however, these tests cannot guarantee the absence of
infective agents. Proper handling and disposal methods should be established as for all
potentially infective material, including (but not limited to) users wearing suitable
protective equipment and clothing at all times. Only personnel fully trained in such
methods should be permitted to perform these procedures.
METHODOLOGY
COMPONENTS
Subclass Antisera
Human IgG Subclass Calibrator
Human IgG Subclass Control Serum
Human IgG Subclass Low Control
Reaction Accelerator (used as Supplementary
Reagent‟) for use with IgG2 and IgG4
PRINCIPLE OF THE ASSAY
The determination of soluble antigen concentration by nephelometric methods involves
the reaction with specific antiserum to form insoluble complexes. When light is passed
through the suspension formed a portion of the light is scattered forward and focused
onto a photodiode by an optical lens system. The amount of scattered light is directly
proportional to the specific protein concentration in the test sample. Concentrations are
automatically calculated by reference to a calibration curve stored within the instrument.
4
SPECIMEN COLLECTION AND PREPARATION
Components
Human IgG1 Antiserum
Human IgG2 Antiserum
Human IgG3 Antiserum
Human IgG4 Antiserum
Human IgG Subclass Calibrator
Human IgG Subclass Control Serum
Human IgG Subclass Low Control
Reaction Accelerator (used as „Supplementary
Reagent‟) for use with IgG2 and IgG4
In normal adults, IgG constitutes approximately 75% of the total serum immunoglobulin.
Within the IgG class, the usual order of concentration of the 4 subclasses is IgG1>
IgG2> IgG3> IgG4, but the actual concentration of each may vary markedly between
individuals.
3
STORAGE AND STABILITY
Blood samples should be collected by venepuncture, allowed to clot naturally and the
serum separated as soon as possible to prevent haemolysis. The serum may be stored
at 2-8°C for up to 8 days prior to assay, or for prolonged storage kept undiluted at
-20°C or below. Repeated freezing and thawing should be avoided. Microbially
contaminated, haemolysed and lipaemic serum and samples containing particulate
matter should not be used.
These kits are intended for quantifying human IgG subclasses 1, 2, 3 and/or 4
immunoglobulins in serum on the BNII. Measurement of these immunoglobulins aids in
the diagnosis of abnormal protein metabolism and the body‟s lack of ability to resist
infectious agents.
2
6
Use fresh or deep frozen serum samples.
FDA (USA) Information:
Analyte Name: Immunoglobulins IgG Subclass
Complexity Category: Moderate
1
Reagents from different batch numbers of kits are NOT interchangeable. If large
numbers of tests are performed care should be taken to ensure that all the reagents
are from the same batch.
8.5.2
8.5.3
8.6
To enter the reagent batch numbers
8.6.1
Click onto Calibration and Reagent and enter the 5 th and 6th numbers of the
barcode on the label for IgG1 -> IgG4 reagents by selecting each individually,
entering numbers and clicking on to the Save button. It is important that
these are entered since the analyser will check the batch number entered.
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 1 of 11
8.7
Running an assay
8.7.1
Request the calibration of all four subclasses, by clicking on to Calibration
and Reference Curve and selecting the assays from the list. After each
selection click on to the Measure button.
8.7.2
Place the reagents into the racks. Antiserum reagents should be placed into
lanes 1, 2, 3, 4 or 5, while the Reaction Accelerator bottle should be placed
into lane 3, 4 or 5 and is used as the „Supplementary reagent‟ for the IgG2
and IgG4 assays.
8.7.3
Place the calibrator on a rack in lanes 6-15.
8.7.4
In both cases the reaction accelerator rack and the calibrator rack will be
rejected since no barcode is detected. The dialog opens on the screen, and
the user must click onto the supplementary reagent/standard in the list box
and then click on to the corresponding position required in the displayed rack.
8.7.5
Reinsert the racks by taking them off the analyser and putting them back on
again. They should click into place.
Approx measuring range
(mg/L)
1310 – 42000
313 – 10000
175 – 5600
120 – 3840
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
9
6-8 years
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
8-10 years
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
10-12 years
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
12-14 years
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
14-18 years
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
Approx. sensitivity
(using 1:5 sample dilution)
66mg/L
78mg/L
44mg/L
30mg/L
QUALITY CONTROL
The IgG subclass concentration assigned to the controls provided are given on the
bottle labels. Results obtained during the running of assays should only be accepted if
control results are within ±15% of the value(s) stated.
10
10.1
LIMITATIONS OF THE PROCEDURE
10.3
10.4
10.5
11
6345
2126
521
349
9700
4320 – 10200
720 – 4300
127 – 853
19 – 932
5680 - 13600
46
46
46
46
46
6421
1980
620
323
10200
4230 – 10600
760 – 3550
173 – 1730
16 – 1150
5680 - 14900
54
54
54
54
54
6581
2486
583
409
10500
3420 – 11500
1000 – 4550
283 – 1250
37 – 1360
6640 – 14900
48
48
48
48
48
6057
2614
708
521
10100
3150 – 8550
640 – 4950
230 –1960
110 – 1570
5500 – 14400
Within-run precision
IgG1
Mean
CV%
IgG2
Mean
CV%
Serum 1
2709
2.36
1705
2.23
162
3.30
91.3
3.20
Serum 2
8657
2.95
3669
3.19
355
3.29
339
2.89
Serum 3
21007
3.98
8834
3.21
830
3.24
1011
1.73
12.2
Number
(n)
Mean
(mg/L)
Median
(mg/L)
95 percentile
range (mg/L)
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
30
30
30
30
6330
4528
790.7
280.0
6085
4541
706.4
215.3
3824 – 9286
2418 – 7003
218.2 – 1760.6
39.2 – 864.0
Paediatric ranges
These ranges were obtained by measuring the total IgG and subclass content of
paediatric serum samples from a Birmingham Hospital using Binding Site radial
immunodiffusion products. All concentrations are in mg/L.
N
39
39
39
39
39
Mean
5248
838
445
129
6640
95%ile range
1940 – 8420
225 – 3000
186 – 853
5 – 784
3270 – 12700
36
36
36
36
36
5495
1146
396
171
7770
3150 – 9450
360 – 2250
173 – 676
10 – 537
4680 – 12500
49
49
49
49
49
6149
1496
531
329
9280
3060 – 9450
605 – 3450
99 – 1221
18 – 1125
5320 - 13400
IgG4
Mean
CV%
Between-run precision
IgG1
IgG
subclasses
IgG3
Mean
CV%
Three serum preparations each containing different levels of IgG subclasses were
assayed on six separate occasions using kits from a single batch. All concentrations
are in mg/L.
IgG2
IgG3
IgG4
Mean
CV%
Mean
CV%
Mean
CV%
Mean
CV%
2811
3.56
1724
3.44
169
2.07
90.7
6.69
Serum 2
8478
2.99
3372
2.57
376
1.78
336
3.32
Serum 3
21480
4.02
3712
4.83
850
2.39
985
3.90
Serum 1
Adult normal ranges
0-2 years
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
2-4 years
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
4-6 years
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
32
32
32
32
32
Three serum preparations each containing different levels of IgG subclasses were
assayed. Each value given was calculated from 10 measurements made on the same
assay run. All concentrations are in mg/L.
EXPECTED VALUES
These ranges were obtained by measuring the subclass content of sera provided by
the Birmingham Blood Transfusion Service taken from healthy adult donors.
11.2
95%ile range
2880 – 9180
440 – 3750
155 – 853
4 – 992
4540 – 13600
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
12.1
The ranges provided below have been obtained from a limited number of British
samples and are intended for guidance purposes only. Wherever possible it is strongly
recommended that local ranges are generated.
11.1
Mean
5758
1754
437
331
8860
The following data was obtained in our laboratory using this product.
Nephelometric IgG Subclass assays have been shown to correlate well
versus Binding Site Single Dilution RID assays with a wide range of samples.
These kits are not suitable for the measurement of samples containing
rheumatoid factor, paraproteins, other circulating immune complexes (CIC) or
for lipaemic or haemolysed samples due to the unpredictable degree of nonspecific scatter these sample types may generate. Unexpected results should
be confirmed using an alternative assay method.
Customers are strongly recommended to run both controls with every batch
of samples being assayed. Should a control value be out of range when run
against a stored curve it is recommended that the assay be recalibrated.
Where control values fall outside the ±15% limit against calibration curves,
check the instrument and parameters before repeating the assay. If the
problem persists, refer to the supplier.
The results obtained from measuring IgG subclasses should not be used in
assessing atopy in allergic patients.
Diagnosis cannot be made and treatment must not be initiated on the basis of
IgG subclass measurements alone. Clinical history and other laboratory
findings must also be taken into account.
10.2
12
N
43
43
43
43
43
12.3
Between-batch precision
Different serum preparations each containing different levels of IgG subclass were
assayed using different batches of kits. The overall CV% of the results at each
concentration is given below. All concentrations are in mg/L.
IgG1
Mean
Serum 1
4411
(no. of Samples)
Serum 2
14191
(no. of Samples)
Serum 3
20190
(no. of Samples)
13
1.
2.
3.
4.
5.
6.
CV%
4.57
(11)
4.39
(11)
4.43
(11)
IgG2
Mean
504
4194
11530
CV%
3.93
(10)
4.93
(10)
5.07
(10)
IgG3
Mean
136
658
1463
CV%
4.70
(10)
6.33
(10)
4.92
(10)
IgG4
Mean
204
468
827
CV%
6.27
(11)
5.78
(10)
5.94
(11)
BIBLIOGRAPHY
Shakib, F & Stanworth D R (1980), Human IgG subclasses in health and
disease (Part II). La Ricerca Clin. Lab. 10, 561-580.
Shackleford, P G, Polmar, S H et al (1986), Spectrum of IgG2 subclass
deficiency in children with recurrent infections: Prospective study. J. Pediatr.
108, 647-653.
Hamilton, R H (1987), Human IgG subclass measurements in the clinical
laboratory. Clin. Chem. 33, 1707-1725.
Schur, P H (1987), IgG subclasses – a review. Annals of Allergy 58, 89-99.
Carr-Smith, H.D, Overton, J, Bradwell, A.R. (1997). IgG subclass value
assignment to the protein reference preparation CRM470. Clin. Chem. Vol.
43, No. 56, PS238.
Williams, D.R., Wilson, C.T., Carr-Smith, H.D. (2009). Assignment of IgG
Subclass Values to the Protein Reference Preparation DA470k. Clin. Chem.
Vol. 55, No. S6, PS C-90.
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 2 of 11
HUMAN IgG SUBKLASSEN KIT
Zur Verwendung auf dem Siemens BN™II
Nephelometer*
Nur zur in vitro Diagnostik
Bestell-Nr.: NK001.T, NK006.T,
NK007.T, NK008.T, NK009.T
In England hergestellt von:
The Binding Site Group Ltd, 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, U.K.
www.bindingsite.co.uk
Vertrieb in Deutschland und Österreich durch:
The Binding Site GmbH, Robert-Bosch-Straße 2A
D-68723 Schwetzingen, Deutschland
Telefon: +49 (0) 6202 92 62 0
Fax: +49 (0) 6202 92 62 222
e-mail: [email protected]
Die ungeöffneten Kits sind bei 2-8°C bis zum auf dem Außenetikett angegebenen
Verfallsdatum haltbar. Ungeöffnete Reagenzien, Kalibratoren, Kontrollen und
Reaktions-Accelerator bei 2-8°C lagern. Nach dem Öffnen sind sie 4 Wochen bei 2-8°C
stabil. Reagenzien so lagern, dass keine Verdunstung stattfinden kann. Offene
Flaschen nach Gebrauch nicht im Gerät stehen lassen. Längere Lagerung bei
Raumtemperatur und häufiger Wechsel zwischen Warm und Kalt führen zu einer
vorzeitigen Alterung und damit zum Verfall der Reagenzien.
Es kann bei den ungeöffneten Antiseren eine Trübung oder ein Präzipitat während der
Lagerung auftreten. Dies ist nicht auf mikrobiologische Kontaminationen zurückzuführen und beeinflusst nicht die Aktivität der Antiseren. In solchen Fällen das
Antiserum durch Filtration durch Einmal-Filter mit Porengröße von 0,2µm oder
Zentrifugation (10min. bei ca. 15000g) klären.
PROBENENTNAHME UND –VORBEREITUNG
Blutproben über Venenpunktur sammeln und auf natürliche Weise gerinnen lassen.
Serum so schnell wie möglich vom Gerinnsel trennen um eine Hämolyse zu vermeiden.
Die Seren können bei 2-8°C bis zu 8 Tagen vor dem Test gelagert werden. Für eine
längere Lagerung wird empfohlen die Seren unverdünnt bei mindestens -20°C
einzufrieren. Keine mikrobiell oder mit Partikeln verunreinigte Seren, oder hämolytische
oder lipämische Seren verwenden.
8
VERWENDUNGSZWECK
EINLEITUNG
Bei gesunden Erwachsenen stellt IgG ca. 75% des Gesamtimmunglobulins dar.
Innerhalb der IgG-Klasse nimmt die Konzentration in der Reihenfolge IgG1> IgG2>
IgG3> IgG4 ab, wobei der tatsächliche Gehalt individuell deutlich variieren kann.
Die vier IgG Subklassen zeigen deutliche Unterschiede in ihren Eigenschaften, wie z.B.
Fähigkeit zur Komplementbindung, Makrophagenbindung und Placentadurchlässigkeit.
Von der Norm abweichende Werte einer oder mehrerer Subklassen können mit
verschiedenen Erkrankungen in Verbindung gebracht werden, z.B. Autoimmunerkrankungen, Anaphylaxie, Darmerkrankungen, sowie Hypo- und Hypergammaglobulinämien (Ref. 1). Speziell bei Kindern kann sich eine verminderte IgG2-Produktion
durch wiederkehrende Infektionen bemerkbar machen (Ref. 2; Reviews: Ref. 3, 4). Das
Behring BNII erlaubt eine vollautomatische, schnelle und quantitative Bestimmung der
Präzipitationsreaktion zur Proteinbestimmung. Die vier IgG Subklassen können gleichzeitig
gemessen werden.
3
LAGERUNG UND STABILITÄT
Immer frisches oder tiefgefrorenes Serum verwenden.
Zur quantitativen Bestimmung von Human IgG Subklassen 1, 2, 3 und 4 im Serum auf
dem BNII. Die Bestimmung dieser Immunglobuline dient zur Unterstützung der
Diagnose eines abnormalen Proteinmetabolismus und das Unvermögen des Körpers
auf infektiöse Erreger zu reagieren.
2
6
7
*BN™ ist ein Warenzeichen von Siemens Healthcare Diagnostics Inc.
1
Reagenzien unterschiedlicher Chargen dürfen NICHT untereinander gemischt oder
gemeinsam verwendet werden. Bei großem Testdurchsatz muss darauf geachtet werden,
dass alle Reagenzien der gleichen Charge entstammen.
TESTPRINZIP
Die nephelometrische Bestimmung der Konzentration von löslichen Antigenen beruht
auf der Reaktion mit einem spezifischen Antiserum, wodurch unlösliche Komplexe
gebildet werden. Wird Licht durch die gebildete Suspension gestrahlt, wird nur ein Teil
des Lichts durchgelassen und mit Hilfe eines optischen Linsensystems auf eine
Photodiode fokusiert. Die Menge des Streulichts ist direkt proportional zur spezifischen
Proteinkonzentration in der zu testenden Probe. Die Antigenkonzentration wird
automatisch nach der Messung direkt an Hand einer im Gerät gespeicherten
Kalibrationskurve berechnet.
8.1
TESTDURCHFÜHRUNG
Gelieferte Materialien „Kombi‟ Kit‟ (NK001.T)
Komponenten
Human IgG1 Antiserum
Human IgG2 Antiserum
Human IgG3 Antiserum
Human IgG4 Antiserum
Human IgG Subclass Calibrator (Human IgG Subklassen-Kalibrator)
Human IgG Subclass Control Serum (Human IgG SubklassenKontrollserum)
Human IgG Subclass Low Control (Human IgG SubklassenKontrollserum „Low Level‟)
Reaction Accelerator (Reaktions-Accelerator zur Verwendung als
„Zusatzreagenz‟ bei IgG2 und IgG4)
8.2
NK001.T
1 x 1,6mL
1 x 1,6mL
1 x 1,6mL
1 x 1,6mL
2 x 1mL
2 x 1mL
2 x 1mL
1 x 3mL
Gelieferte Materialien, für die individuellen Kits
(NK006.T, NK007.T, NK008.T, NK009.T)
Komponenten
NK006/7/8/9.T
Subclass Antisera (Subklassen Antiseren)
4 x 1,6mL
Human IgG Subclass Calibrator (Human IgG Subklassen Kalibrator)
2 x 1mL
Human IgG Subclass Control Serum (Human IgG Subklassen
3 x 1mL
Kontrollserum)
Human IgG Subclass Low Control (Human IgG Subklassen
3 x 1mL
Kontrollserum „Low Level‟)
2 x 3mL
Reaction Accelerator (Reaktions-Accelerator-zur Verwendung als
„Zusatzreagenz‟ bei IgG2 und IgG4)
8.3
Benötigte, nicht im Kit Enthaltene Materialien
8.3.1
8.3.2
Laborausstattung zum Sammeln und Vorbereiten der Proben (Probenröhrchen, Zentrifugen usw.).
Einen voll ausgestatteten und funktionsfähigen Behring BNII.
Human IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 Antiseren. Diese Antiseren sind
monospezifisch für die jeweilige Subklasse und liegen als stabilisierte
Flüssigkeiten vor. Enthaltene Konservierungsmittel: 0,099% Natriumazid,
0,1% E-aminocapronsäure (EACA), 1mM Ethylendiamintetraessigsäure
(EDTA), 0,5% BSA und 0,01% Benzamidin.
8.4
Durchführung
8.4.1
8.4.2
4.2
Kalibratoren und Kontrollen. Sie werden aus delipidisiertum, gepooltem
Humanserum hergestellt und liegen als stabilisierte Flüssigkeiten vor.
Enthaltene Konservierungsmittel: 0,099% Natriumazid, 0,1% (EACA) und
0,01% Benzamidin. Der Wert von IgG Subklassen wurde durch Vergleich mit
mit dem internationalen DA470k-Referenzmaterial ermittelt (Ref. 5, 6).
8.4.3
Gerät wie im Handbuch beschrieben vorbereiten.
Es wird empfohlen, dass die IgG-Subklassen-Tests nicht mit anderen Tests
gleichzeitig gemessen werden, da für sie ein Reaktions-Accelerator anstatt
des Zusatzreagenz (SRP) verwendet wird.
Die IgG-Subklassen-Testparameter sind bereits im Gerät vorhanden. Den
IgG-Subklassen-Kalibrator anstatt des Dade-Behring-Standards in das Gerät
setzen. Daher alle Reagenzien von Dade-Behring vor der Messung der IgG
Subklassen aus dem Gerät nehmen.
Die Testparameter sind in dem Anhang aufgelistet.
4.3
Reaktions-Accelerator. Enthaltene Konservierungsmittel: 0,099% Natriumazid.
8.5
Eingabe der Kalibratorwerte
8.5.1
Wahrscheinlich wurde bereits der „Prot. Standard PY‟ oder „Prot.Standard SL‟
als IgG-Subklassen-Kalibrator definiert. Zur Überprüfung die Funktion
Definition und Standard anklicken. Ist an den Kreuzungspunkten zwischen
einem der Standards und den Tests ein „X‟, so ist der Standard für diese
Tests definiert. Es muss sichergestellt werden, dass einer dieser beiden
Standards für die IgG Subklassen definiert ist.
Die Funktion Kalibrator und Standard lots anwählen. Ist bereits eine DadeBehring-Chargennummer für den Standard eingegeben (siehe 1. Vertikale
Spalte des Rasters), braucht diese nicht geändert werden. Sind die
gewünschten Tests nicht in der Liste zu sehen, dann die Liste am Bildschirm
durchgehen, bis sie erscheinen.
Auf den Kreuzungspunkt zwischen Standard und Test klicken. (Hier erscheint
entweder eine alte Kalibratorkonzentration oder ein „X‟.) Zuerst den
Standard-Namen und anschließend das Feld „?‟ anklicken. Jetzt können die
IgG-Subklassen-Konzentrationen, die auf dem Flaschenetikett angegeben
sind, eingegeben werden. Nach der Eingabe die Daten speichern.
4
4.1
5
REAGENZIEN
WARNUNGEN UND VORSICHTSMAßNAHMEN
Jede Einzelspende von humanem Serum wurde untersucht und bezüglich Antikörper gegen
das Human-Immunschwäche-Virus (HIV 1 & 2), das Hepatitis-C-Virus und gegen das
Hepatitis-B-Oberflächenantigen (HBsAG) als negativ befunden. Die hierfür verwendeten Tests
sind entweder von der FDA (USA) zugelassen oder für den Gebrauch in der in vitro Diagnostik
in der EU freigegeben (Directive 98/79/EC, Annex II). Es gibt aber zur Zeit keine absolut sicheren Testmethoden zum Auschluss dieser und anderer Infektionsträger. Umgangs- und
Entsorgungsmethoden sollten denen für potentiell infektiösem Material entsprechen (inklusive
dem Tragen entsprechender Schutzkleidung). Der Test sollte nur von entsprechend
geschultem Personal durchgeführt werden.
ACHTUNG: Dieses Produkt enthält Natriumazid und muss mit den entsprechenden Vorsichtsmaßnahmen behandelt werden. Das Tragen von Handschuhen und anderer Schutzkleidung
wird während des Umgangs mit diesem Produkt empfohlen. Verschlucken sowie Kontakt mit Haut
(v.a. bei Verletzungen) oder Schleimhäuten vermeiden. Nach Kontakt Hautstelle mit viel Wasser
abspülen und ärztlichen Rat einholen. Natriumazid kann mit Blei- oder Kupferrohren explosive
Metallazide bilden. Nach der Entsorgung mit ausreichender Menge Wasser, nachspülen um
Azidablagerungen zu vermeiden.
Dieser Test sollte nur für den angegebenen Verwendungszeck von entsprechend geschultem
Laborpersonal durchgeführt werden. Die Einhaltung der Arbeitsanleitung bei allen
Arbeitsschritten ist dringend notwendig. Bei Verwendung von abgeänderten Testparametern
kann die Richtigkeit der Ergebnisse nicht garantiert werden.
8.5.2
8.5.3
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 3 of 11
8.6
Eingabe der Chargen-Nummer der Reagenzien
8.6.1
Die Funktion Kalibration und anschließend Reagenzien anwählen und die
5. und 6. Zahl des Barcodes für jedes Reagenz eingeben und die Daten
speichern. Der Barcode befindet sich auf dem jeweiligen Flaschenetikett. Die
Eingabe dieser Daten ist wichtig, da das BNII die eingegebenen ChargenNummern überprüft.
8.7
Testdurchführung
8.7.1
Kalibrationskurve anfordern indem die Funktionen Kalibration und anschließend
Referenzkurven angewählt werden. Dann die gewünschten Tests aus der
Liste auswählen. Nach jeder Auswahl die Funktion Messung anklicken.
Reagenzien in die entsprechenden Schlitten setzen. Die Antiseren auf die
Bahnen 1, 2, 3, 4 oder 5 und das Zusatzreagenz auf die Bahn 3, 4 oder 5
setzen. Das Zusatzreagenz wird anstelle des „SRP‟-Reagenz für IgG2 und
IgG4 verwendet.
Den Kalibrator auf Bahn 6-15 plazieren.
Das Gerät wird sowohl den Schlitten mit dem Zusatzreagenz als auch den
Schlitten mit dem Kalibrator nicht akzeptieren, da keine Barcodes erkannt
werden. Auf dem Bildschirm wird ein Dialogfenster geöffnet. Hier das
Zusatzreagenz und den Kalibrator anklicken und anschließend die
entsprechende Position des gezeigten Schlittens anklicken.
Die Schlitten erneut in das Gerät einführen. Danach sollten die Reagenzien
akzeptiert werden.
8.7.2
8.7.3
8.7.4
8.7.5
Ungefährer Messbereich
(mg/L)
1310 – 42000
313 – 10000
175 – 5600
120 – 3840
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
9
4-6 Jahre
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
6-8 Jahre
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
8-10 Jahre
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
10-12 Jahre
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
12-14 Jahre
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
14-18 Jahre
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
Ungefähre. Sensitivität
(bei einer 1:5-Probenverdünnung)
66mg/L
78mg/L
44mg/L
30mg/L
QUALITÄTSKONTROLLE
Die IgG-Subklassen-Konzentrationen der Kontrollen sind auf dem jeweiligen
Flaschenetikett angegeben. Der von dem BNII gemessene Wert sollte maximal  15%
vom angegebenen Wert abweichen.
12
N
49
49
49
49
49
Mittelwert
6149
1496
531
329
9280
95%ile Bereich
3060 – 9450
605 – 3450
99 – 1221
18 – 1125
5320 - 13400
43
43
43
43
43
5758
1754
437
331
8860
2880 – 9180
440 – 3750
155 – 853
4 – 992
4540 – 13600
32
32
32
32
32
6345
2126
521
349
9700
4320 – 10200
720 – 4300
127 – 853
19 – 932
5680 - 13600
46
46
46
46
46
6421
1980
620
323
10200
4230 – 10600
760 – 3550
173 – 1730
16 – 1150
5680 - 14900
54
54
54
54
54
6581
2486
583
409
10500
3420 – 11500
1000 – 4550
283 – 1250
37 – 1360
6640 – 14900
48
48
48
48
48
6057
2614
708
521
10100
3150 – 8550
640 – 4950
230 –1960
110 – 1570
5500 – 14400
LEISTUNGSDATEN
Die nachfolgend aufgeführten Daten wurden mit diesem Kit im Labor von The Binding
Site erhalten.
10
10.1
10.2
10.3
10.4
10.5
11
GRENZEN DES TESTS
12.1
Die nephelometrische Bestimmung der IgG Subklassen korreliert bei einer
großen Probenzahl sehr gut zur Binding Site IgG Subklassen Single Dilution
RID Methode.
Dieser Kit ist nicht für die Bestimmung von lipämischen oder hämolysierten
Proben, oder Proben, die Rheumafaktoren, Paraproteine oder andere
zirkulierende Immunkomplexe enthalten, geeignet, da diese Proben einen
nicht vorhersagbaren Anteil an unspezifischen Streulicht erzeugen können.
Ungewöhnliche Ergebnisse sollten mit einer alternativen Methode überprüft
werden.
Es wird dringend empfohlen, dass beide Kontrollen bei jedem Testansatz
mitgeführt werden. Wird eine gespeicherte Kalibrationskurve verwendet und
liegt das Kopntrollergebnis außerhalb des Vertrauensbereichs, sollte der Test
neu kalibriert werden. Liegt die Kontrolle direkt nach der Kalibration
außerhalb des Vertrauensbereichs ( 15%), sollten die Testparameter und
das Gerät überprüft werden, bevor der Test wiederholt wird. Bleibt das
Problem bestehen, wenden Sie sich bitte an Ihre Lieferfirma.
Die IgG-Subklassen-Ergebnisse sollten nicht zur Diagnose einer Atopie bei
Allergie-Patienten verwendet werden.
Die Diagnose und Einleitung einer Therapie dürfen nicht ausschließlich auf
der IgG-Subklassen-Bestimmung basieren. Das klinische Bild und andere
serologische Befunde müssen ebenfalls berücksichtigt werden.
Serum 1
Serum 2
Serum 3
12.2
11.1 Erwachsene
Die unten aufgeführten Normalbereiche basieren auf der Untersuchung des
Subklassengehalt Seren vom Blood Transfusion Service in Birmingham.
Anzahl
(n)
30
30
30
30
Mittelwert
(mg/L)
6330
4528
790,7
280,0
Median
(mg/L)
6085
4541
706,4
215,3
95 Percentile
Bereich (mg/L)
3824 – 9286
2418 – 7003
218,2 – 1760,6
39,2 – 864,0
11.2 Kinder
Diese Werte wurden mittels Radialer Immundiffusion (The Binding Site „Single Dilution‟)
ermittelt. Die Seren der Kinder wurden in einem Krankenhaus von Birmingham
(England) gesammelt. Alle Angaben sind in mg/L.
12.3
N
39
39
39
39
39
Mittelwert
5248
838
445
129
6640
95%ile Bereich
1940 – 8420
225 – 3000
186 – 853
5 – 784
3270 – 12700
36
36
36
36
36
5495
1146
396
171
7770
3150 – 9450
360 – 2250
173 – 676
10 – 537
4680 – 12500
IgG3
Mittel
VK%
-wert
162
3,30
355
3,29
830
3,24
IgG4
Mittel
VK%
-wert
91,3
3,20
339
2,89
1011
1,73
IgG1
Mittel
VK%
-wert
2811
3,56
8478
2,99
21480
4,02
IgG2
Mittel
VK%
-wert
1724
3,44
3372
2,57
3712
4,83
IgG3
Mittel
VK%
-wert
169
2,07
376
1,78
850
2,39
IgG4
Mittel
VK%
-wert
90,7
6,69
336
3,32
985
3,90
Inter-Chargen-Variation
Verschiedene Serumpräparationen, die sehr unterschiedliche IgG-SubklassenKonzentrationen enthalten, wurden mit verschiedenen Reagenz-Chargen gemessen.
Der Variationskoefizient (VK) für die gemessene IgG-Subklassen-Konzentration jeder
Serumpräparation wurde bestimmt. Der mittlere VK wird in der nachfolgenden Tabelle
aufgelistet. Alle Konzentrationsangaben sind in mg/L.
IgG1
MittelVK%
wert
Serum 1
4,57
4411
(Anzahl der Proben)
(11)
Serum 2
4,39
14191
(Anzahl der Proben)
(11)
Serum 3
4,43
20190
(Anzahl der Proben)
(11)
13
1.
2.
0-2 Jahre
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
2-4 Jahre
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Total IgG
IgG2
Mittel
VK%
-wert
1705
2,23
3669
3,19
8834
3,21
Inter-Assay-Variation
Serum 1
Serum 2
Serum 3
Die unten aufgeführten Normalbereiche basieren auf der Untersuchung eines
gesunden Blutspenderkollektivs aus Großbritannien mit diesen Kits und dienen nur zur
Orientierung. Es wird empfohlen eigene Normalbereiche zu bestimmen.
IgG1
Mittel
VK%
-wert
2709
2,36
8657
2,95
21007
3,98
Drei verschiedene Serum-Präparationen, die unterschiedliche IgG-SubklassenKonzentrationen enthalten, wurden in sechs verschiedenen Ansätzen mit Kits von einer
Charge untersucht. Alle Konzentrationsangaben sind in mg/L.
ERWARTETE WERTE
IgG
Subklasse
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
Intra-Assay-Präzision
Drei verschiedene Serum-Präparationen, die unterschiedliche IgG-SubklassenKonzentrationen enthalten, wurden untersucht. Jeder Wert wurde aus 10
Bestimmungen, die in einem Ansatz gemessen wurden, ermittelt. Alle Konzentrationsangaben sind in mg/L.
3.
4.
5.
6.
IgG2
MittelVK%
wert
3,93
504
(10)
4,93
4194
(10)
5,07
11530
(10)
IgG3
MittelVK%
wert
4,70
136
(10)
6,33
658
(10)
4,92
1463
(10)
IgG4
MittelVK%
wert
6,27
204
(11)
5,78
468
(10)
5,94
827
(11)
REFERENZEN
Shakib, F & Stanworth D R (1980), Human IgG subclasses in health and
disease (Part II). La Ricerca Clin. Lab. 10, 561-580.
Shackleford, P G, Polmar, S H et al (1986), Spectrum of IgG2 subclass
deficiency in children with recurrent infections: Prospective study. J. Pediatr.
108, 647-653.
Hamilton, R H (1987), Human IgG subclass measurements in the clinical
laboratory. Clin. Chem. 33, 1707-1725.
Schur, P H (1987), IgG subclasses – a review. Annals of Allergy 58, 89-99.
Carr-Smith, H.D, Overton, J, Bradwell, A.R. (1997). IgG subclass value
assignment to the protein reference preparation CRM470. Clin. Chem. Vol.
43, No. 56, PS238.
Williams, D.R., Wilson, C.T., Carr-Smith, H.D. (2009). Assignment of IgG
Subclass Values to the Protein Reference Preparation DA470k. Clin. Chem.
Vol. 55, No. S6, PS C-90.
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 4 of 11
COFFRETS POUR LE DOSAGE DES SOUSCLASSES d‟IgG EN NEPHELEMETRIE (pour
une utilisation sur Siemens BN™II*)
Pour un usage en diagnostic in vitro
uniquement
Références : NK001.T, NK006.T,
NK007.T, NK008.T, NK009.T.
Produits fabriqués en Angleterre par la société :
The Binding Site Group Ltd, 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, U.K.
www.bindingsite.co.uk
Distribués en France par la société :
The Binding Site France
14 rue des Glairaux, BP226, 38522 Saint-Egrève Cedex.
Téléphone : 04.38.02.19.19
Fax : 04.38.02.19.20
e-mail : [email protected]
*BN™ est marque déposée de Siemens Healthcare Diagnostics Inc.
(spécialement sur les zones abîmées) ou des muqueuses. S‟il y a contact, laver
abondamment avec de l‟eau et demander un avis médical. Des azides de métaux
explosifs peuvent se former par contact prolongé entre de l‟azide de sodium et les
tuyauteries en plomb et cuivre; pour éliminer les réactifs, rincer avec un large volume
d‟eau pour prévenir tout dégât.
Ce produit ne doit être utilisé que par du personnel entrainé. Le suivi de ces
instructions est essentiel. Les résultats seront considérés comme invalides si d‟autres
paramètres autres que ceux ci sont utilisés.
Les réactifs de différents lots NE SONT PAS interchangeables. Si un nombre important
de tests est réalisé, des précautions doivent être prises pour s‟assurer que les réactifs
utilisés sont issus du même lot.
6
Les coffrets non ouverts doivent être conservés entre 2-8°C et peuvent être utilisés
jusqu‟à la date de péremption indiquée sur l‟étiquette de la boîte. Une fois ouverts, les
composants du coffret peuvent être conservés à 2-8°C pendant 4 semaines à condition
que les précautions pour empêcher l‟évaporation soient prises. Il est recommandé de
ne pas laisser les flacons ouverts sur les néphélémètres en dehors de leur utilisation.
Si des réactifs sont laissés à température ambiante pendant de longues périodes ou
fréquemment changés de température (froid/chaud), leur altération risque d‟être plus rapide.
Au cours du temps, les flacons d'antisérums non ouverts peuvent développer un
précipité ou un trouble qui n'est pas lié à une contamination bactérienne et qui n'affecte
pas l'activité de l'antisérum. Dans de telles situations, l'antisérum doit être clarifié par
filtration à travers un filtre jetable ayant des pores de 0,2µm ou par centrifugation (10
minutes à 15000 x g approximativement).
7
1
PRÉSENTATION GÉNÉRALE
Chez les sujets adultes en bonne santé, l‟IgG représente environ 75% de la
concentration en Immunoglobulines sériques totales. Dans la classe des IgG, les
concentrations de chaque sous classe sont généralement dans l‟ordre IgG1 > IgG2 >
IgG3 > IgG4, bien que la concentration effective de chaque sous classe puisse varier
considérablement selon les individus.
Les quatre sous classes d‟IgG présentent des différences considérables dans leurs
propriétés, incluant la capacité de fixation du complément, de se lier aux macrophages
et de passer la barrière placentaire. Des taux inusuels d‟une ou plusieurs sous classes
peuvent être associés à certaines pathologies comme l‟anaphylaxie, les maladies
autoimmunes, digestives, les hypo et hypergammaglobulinémies (réf. 1). En particulier,
une diminution de synthèse de l‟IgG2 chez l‟enfant peut être associée à des infections
récurrentes (réf. 2). Cet aspect a été bien étudié (réfs 3 et 4). Le néphélémètre Behring
permet le dosage rapide des protéines spécifiques par néphélémétrie, et peut effectuer
simultanément le dosage des quatre sous-classes à partir du même tube. La mesure
quantitative des réactions de précipitation se fait de façon automatique, rapide et
reproductible.
3
PRINCIPE DU TEST
La détermination de la concentration en antigène soluble en néphélémétrie induit la
réaction avec un antisérum spécifique pour former des complexes insolubles. Lorsque
la lumière passe à travers la suspension, une partie de la lumière est dispersée et
dirigée vers une photodiode par un système de lentilles optiques. La quantité de
lumière dispersée mesurée est directement proportionnelle à la concentration en
protéine spécifique de l‟échantillon. Les concentrations sont automatiquement
calculées par rapport à la courbe étalon pré-établie.
4
4.1
4.2
4.3
5
PREPARATION ET COLLECTE DES ECHANTILLONS
Utiliser des sérums fraîchement prélevés ou congelés.
INDICATIONS
Ces coffrets sont destinés au dosage quantitatif des sous-classes d‟IgG, 1, 2, 3 et/ou 4
dans le sérum humain par néphélémétrie en utilisant les néphélémètres BNII. La
mesure de ces immunoglobulines apporte une aide dans le diagnostic du métabolisme
anormal des protéines et des problèmes de l‟organisme pour résister aux agents infectieux.
2
STOCKAGE ET STABILITÉ
RÉACTIFS
Antisérums IgG1, IgG2 IgG3, IgG4. Ces antisérums de mouton ont été
adsorbés de manière à être monospécifiques de la sous-classe désirée, et
sont fournis sous forme liquide et prêts à l‟emploi. Ils contiennent 0,099%
d‟azide de sodium, 0,1% d‟acide E-amino-n-caproïque (EACA), 1mM acide
éthylène diamine tétracétique (EDTA), 0,5% de BSA et 0,01% de benzamidine
comme conservateurs.
Calibrateurs et contrôles. Ils sont préparés à partir de pools de sérum
humains délipidés, et sont fournis sous forme liquide et stable. Ils contiennent
0,099% d‟azide de sodium, 0,1% d‟EACA et 0,01% de benzamidine comme
conservateurs. La concentration en sous-classes d‟IgG indiquée sur les
étiquettes des flacons ont été obtenues par comparaison avec la référence
internationale DA470k (réfs 5 et 6).
Réactif accélérateur. Il contient 0,099% d‟azide de sodium comme
conservateur.
Les échantillons de sang doivent être collectés par ponction veineuse, permettant une
coagulation naturelle. Le sérum doit être séparé dès que possible afin d‟éviter une
hémolyse. Le sérum peut être stocké à 2-8°C pendant 8 jours avant le test ou congelé
sans diluer (à -20°C ou à une température inférieure) pour une conservation plus
longue. Il est recommandé d‟éviter les congélations et les décongélations répétées.
Les échantillons contaminés par des bactéries, hémolysés, lipidiques ou contenant des
particules de matière ne doivent pas être utilisés.
8
8.1
ATTENTION: Ce produit contient de l‟azide de sodium et doit être manipulé avec
précaution; des gants appropriés et d‟autres vêtements de protection doivent être
portés lors de toutes manipulation. Ne pas ingérer ou avoir de contact avec la peau
Matériel fourni coffret „Combi‟ (NK001.T)
Composants
Human IgG1 Antiserum (antisérum anti-IgG1 humaines)
Human IgG2 Antiserum (antisérum anti-IgG2 humaines)
Human IgG3 Antiserum (antisérum anti-IgG3 humaines)
Human IgG4 Antiserum (antisérum anti-IgG4 humaines)
Human IgG Subclass Calibrator (calibrateur sous-classes IgG
humaines)
Human IgG Subclass Control Serum (contrôle sous-classes IgG
humaines)
Human IgG Subclass Low Control (contrôle bas sous-classes
IgG humaines)
Reaction Accelerator (réactif accélérateur (réactif supplémentaire
à utiliser avec IgG2 et IgG4)
8.2
NK001.T
1 x 1,6mL
1 x 1,6mL
1 x 1,6mL
1 x 1,6mL
2 x 1mL
2 x 1mL
2 x 1mL
1 x 3mL
Matériel fourni (NK006.T, NK007.T, NK008.T, NK009.T)
Composant
Subclass Antisera (antisérum sous classe appropriée)
Human IgG Subclass Calibrator (calibrateur sous-classe IgG
humaines)
Human IgG Subclass Low Control (contrôle bas sous-classe IgG
humaines)
Human IgG Subclass Control Serum (contrôle haut sous-classe
IgG humaines)
Reaction Accelerator (réactif accélérateur (réactif supplémentaire
à utiliser avec IgG2 et IgG4)
NK006/7/8/9.T
4 x 1,6mL
2 x 1mL
3 x 1mL
3 x 1mL
2 x 3mL
8.3
Matériel nécessaire et non fourni
8.3.1
8.3.2
Le matériel nécessaire à la préparation des échantillons (par exemple tubes,
centrifugeuse...).
Néphélémètre et accessoires.
8.4
Procédure
8.4.1
8.4.2
Préparer l‟analyseur pour une utilisation manuelle.
Nous recommandons de passer les sous-classes séparément des autres
paramètres parce que l‟analyse demande l‟utilisation d‟un réactif
supplémentaire : le réactif accélérateur.
Les protocoles sont définis par le néphélémètre. Le calibrateur doit être
déposé dans l‟appareil comme un standard Behring. Tous les réactifs
Behring doivent être retirés de l‟analyseur.
Les paramètres d’analyse sont donnés dans l’appendice.
8.4.3
PRÉCAUTIONS
Tous les sérums humains fournis dans ce coffret ont été testés et trouvés négatifs pour
l‟antigène de surface de l‟hépatite B (Ag HBs), pour le virus de l‟hépatite C et pour les
anticorps anti-virus de l‟immunodéficience humaine (HIV1 and HIV2). Les tests utilisés
ont soit été approuvés par la FDA (USA) ou accepté pour un usage en diagnostic in-vitro
par l‟union européenne (Directive 98/79/EC, Annexe II); néanmoins ces tests ne peuvent
garantir l‟absence d‟agents infectieux Tous les échantillons doivent donc être manipulés
comme des produits potentiellement infectieux. Seul un personnel qualifié dans la
manipulation d‟échantillons potentiellement infectieux est autorisé à utiliser ce coffret.
METHODOLOGIE
8.5
Entrer les valeurs du calibrateur
8.5.1
Il est possible que les « Prot. Standard PY » ou « Prot standard SL » soient
déjà définis comme calibrateurs des sous-classes d‟IgG. L‟utilisateur peut
confirmer en cliquant sur Definition et Standard. Si les essais pour ces
standards ont été définis, il y a une croix dans le champ d‟intersection. Il faut
passer par cette étape avant de poursuivre l‟analyse.
Cliquer sur Calibrateur et Standard lot. Si les numéros de lot sont déjà
entrés, il n‟est pas nécessaire de les modifier. Si l‟utilisateur ne voit pas
apparaître l‟analyse, il est nécessaire de la rechercher à l‟écran.
8.5.2
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 5 of 11
8.5.3
Cliquer sur l‟intersection des essais et des standards (une valeur peut déjà
être inscrite ou un « X »). Cliquer sur le nom du standard puis cliquer sur
« ? », l‟icône point d‟interrogation. Ceci permettra à l‟utilisateur de rentrer les
valeurs indiquées sur l‟étiquette du flacon du calibrateur. Sauvegarder les
valeurs entrées.
8.6
Entrer les numéros de lot
8.6.1
Cliquer sur Calibration et Réactifs puis entrer le 5ième et 6ième chiffre du
code barre des étiquettes des anti-IgG1, IgG2, IgG3 et IgG4. Sauvegarder
les chiffres entré. Il est important d‟entrer les numéros puisque l‟appareil
vérifie automatiquement les code barres.
8.7
Analyse
8.7.1
Demander la calibration des quatre sous-classes, en appuyant sur
Calibration et Courbe de référence et en sélectionnant l‟analyse à partir de
la liste. Après chaque sélection, cliquer sur le bouton de Mesure.
Placer les réactifs dans les racks. Les antisérums doivent être placés en
position 1,2,3,4 ou 5, alors que le flacon de réactif accélérateur doit être en 3,
4 ou 5ème position et utilisé comme réactif supplémentaire pour la
quantification des IgG2 et IgG4.
Placer le calibrateur sur le rack en position 6 à 15.
Dans les deux cas les racks du réactif accélérateur et du calibrateur vont être
rejetés puis qu‟aucun code barre sera détecté. La boîte de dialogue s‟ouvrira
et cliquer sur « réactif supplémentaire/standard » de la liste il est possible de
repérer la position exacte des réactifs.
Remettre les racks en les retirant puis e les repositionnant dans l‟analyseur.
8.7.2
8.7.3
8.7.4
8.7.5
Gamme de mesure
approximative (mg/L)
1310 – 42000
313 – 10000
175 – 5600
120 – 3840
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
9
4-6 ans
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG totales
6-8 ans
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG totales
8-10 ans
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG totales
10-12 ans
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG totales
12-14 ans
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG totales
14-18 ans
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG totales
Sensibilité approximative
(dilution 1:5)
66mg/L
78mg/L
44mg/L
30mg/L
12
10.1
10.3
10.4
10.5
11
VALEURS ATTENDUES
Adultes
Ces valeurs ont été obtenues en mesurant les sous-classes de sérums d‟adultes sains
fournis par le Birmingham Blood Transfusion Service.
Sous-classe IgG
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
11.2
43
43
43
43
43
5758
1754
437
331
8860
2880 – 9180
440 – 3750
155 – 853
4 – 992
4540 – 13600
32
32
32
32
32
6345
2126
521
349
9700
4320 – 10200
720 – 4300
127 – 853
19 – 932
5680 - 13600
46
46
46
46
46
6421
1980
620
323
10200
4230 – 10600
760 – 3550
173 – 1730
16 – 1150
5680 - 14900
54
54
54
54
54
6581
2486
583
409
10500
3420 – 11500
1000 – 4550
283 – 1250
37 – 1360
6640 – 14900
48
48
48
48
48
6057
2614
708
521
10100
3150 – 8550
640 – 4950
230 –1960
110 – 1570
5500 – 14400
Nombre
(n)
30
30
30
30
Moy.
(mg/L)
6330
4528
790,7
280,0
Médiane
(mg/L)
6085
4541
706,4
215,3
Gamme 95
percentile (mg/L)
3824 – 9286
2418 – 7003
218,2 – 1760,6
39,2 – 864,0
Enfants
Ces valeurs ont été obtenues en mesurant les IgG totales et les sous-classes en
utilisant des sérums pédiatriques provenant d‟un hôpital de Birmingham. Les résultats
ci-dessous ont été obtenus en utilisant des coffrets d‟immuno-diffusion radiale The
Binding Site. Toutes les concentrations sont en mg/L.
0-2 ans
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG totales
2-4 ans
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG totales
PERFORMANCES
Précision intra-essai
La précision intra-essai a été établie à partir de 3 sérums de concentrations différentes
mesurés 10 fois chacun. Les concentrations sont en mg/L.
Sérum 1
Sérum 2
Sérum 3
12.2
N
39
39
39
39
39
Moyenne
5248
838
445
129
6640
Gamme 95 percentile
1940 – 8420
225 – 3000
186 – 853
5 – 784
3270 – 12700
36
36
36
36
36
5495
1146
396
171
7770
3150 – 9450
360 – 2250
173 – 676
10 – 537
4680 – 12500
IgG1
Moy.
CV%
2709
2,36
8657
2,95
2100
3,98
7
IgG2
Moy.
CV%
1705
2,23
3669
3,19
8834
3,21
IgG3
Moy.
CV%
162
3,30
355
3,29
830
3,24
IgG4
Moy.
CV%
91,3
3,20
339
2,89
1011
1,73
Précision inter-essai
La précision inter-essai a été établie à partir de 3 sérums mesurés au cours de 6
essais distincts utilisant des coffrets d‟un seul lot. Les concentrations sont en mg/L.
Sérum 1
Sérum 2
Sérum 3
Les valeurs ci-dessous ont été obtenues à partir d‟une population limitée de sujets
sains britanniques. Elles sont données à titre indicatif. Il est fortement conseillé à
chaque laboratoire d‟établir ses propres normes.
11.1
Gamme 95 percentile
3060 – 9450
605 – 3450
99 – 1221
18 – 1125
5320 – 13400
Les résultats suivants ont été obtenus dans les laboratoires de la société The Binding
Site en utilisant un coffret BNII.
12.1
LIMITES DE LA METHODE
Il existe une bonne corrélation entre les dosages néphélémétriques et les
dosages en immuno-diffusion radiale.
Ces coffrets ne sont pas utilisables pour mesurer des échantillons
hémolysés, lipidiques contenant du facteur rhumatoïde, des paraprotéines ou
des complexes immuns circulants, a cause du degré de lumière diffractée
non spécifique que ces échantillons peuvent générer. Les résultats
inattendus doivent être confirmés en utilisant une autre méthode.
Il est fortement recommandé aux utilisateurs de passer les deux contrôles
lors de chaque série. Si une valeur obtenue à partir d‟une courbe de
calibration enregistrée est en dehors des valeurs attendues, la calibration doit
être refaite. Si les valeurs des contrôles présentent une variation supérieure à
±15% par rapport aux valeurs attendues, vérifier l‟instrument et le paramétrage
avant de répéter l‟essai. Si le problème persiste, contacter le fournisseur.
Les résultats du dosage des sous-classes ne doivent pas être utilisés chez
les sujets allergiques lors de maladies atopiques.
Un diagnostic ne peut pas être fait et un traitement ne doit pas être
commencé uniquement sur la base du dosage des sous classes d‟IgG.
L‟histoire clinique du patient ainsi que d‟autres tests doivent également être
pris en considération.
10.2
Moyenne
6149
1496
531
329
9280
CONTROLE DE QUALITÉ
Les concentrations des contrôles sont indiquées sur l‟étiquette du flacon. Les résultats
seront corrects si la valeur obtenue diffère au maximum de 15% par rapport à la valeur
cible.
10
N
49
49
49
49
49
12.3
IgG1
Moy.
CV%
2811
3,56
8478
2,99
2148
4,02
0
IgG2
Moy.
CV%
1724
3,44
3372
2,57
3712
4,83
IgG3
Moy.
CV%
169
2,07
376
1,78
850
2,39
IgG4
Moy.
CV%
90.7
6,69
336
3,32
985
3,90
Précision inter-lot
Plusieurs sérums contenant différentes concentrations d‟IgG ont été quantifiés en
utilisant différents lots de coffrets. Les coefficients de variation (CV) de la mesure des
concentrations en sous-classes pour chaque préparation ont été calculés. Le CV global
est donné ci-dessous (toutes les concentrations sont en mg/L).
IgG1
Moy.
Sérum 1
(nombre de lots)
Sérum 2
(nombre de lots)
Sérum 3
(nombre de lots)
13
1.
2.
3.
4.
5.
6.
4411
14191
20190
CV%
4,57
(11)
4,39
(11)
4,43
(11)
IgG2
Moy.
504
4194
11530
CV%
3,93
(10)
4,93
(10)
5,07
(10)
IgG3
Moy.
136
658
1463
CV%
4,70
(10)
6,33
(10)
4,92
(10)
IgG4
Moy.
204
468
827
CV%
6,27
(11)
5,78
(10)
5,94
(11)
BIBLIOGRAPHIE
Shakib, F & Stanworth D R (1980), Human IgG subclasses in health and
disease (Part II). La Ricerca Clin. Lab. 10, 561-580.
Shackleford, P G, Polmar, S H et al (1986), Spectrum of IgG2 subclass
deficiency in children with recurrent infections: Prospective study. J. Pediatr.
108, 647-653.
Hamilton, R H (1987), Human IgG subclass measurements in the clinical
laboratory. Clin. Chem. 33, 1707-1725.
Schur, P H (1987), IgG subclasses – a review. Annals of Allergy 58, 89-99.
Carr-Smith, H.D, Overton, J, Bradwell, A.R. (1997). IgG subclass value
assignment to the protein reference preparation CRM470. Clin. Chem. Vol.
43, No. 56, PS238.
Williams, D.R., Wilson, C.T., Carr-Smith, H.D. (2009). Assignment of IgG
Subclass Values to the Protein Reference Preparation DA470k. Clin. Chem.
Vol. 55, No. S6, PS C-90.
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 6 of 11
KITS DE REACTIVOS LÍQUIDOS PARA
SUBCLASES IgG HUMANA
(para uso en el Siemens BN™II*)
El presente producto debe ser utilizado por personal especializado. Se recomienda
observar estrictamente el procedimiento indicado. No se garantizan resultados válidos
obtenidos utilizando parámetros diferentes que los indicados.
Los reactivos de diferentes lotes NO son intercambiables. En caso de realizar un
número elevado de tests, averigüe que todos los reactivos sean del mismo lote.
6
Para diagnóstico in-vitro únicamente
Códigos: NK001.T, NK006.T, NK007.T, NK008.T,
NK009.T
Producto fabricado por:
The Binding Site Group Ltd, 8 Calthorpe Road, Edgbaston, Birmingham, B15 1QT, U.K.
www.bindingsite.co.uk
The Binding Site Spain S.L.U.
C/ Balmes 243 4º 3ª, 08006 Barcelona
Teléfono 902027750
Fax: 902027752
e-mail: [email protected]
web: www.bindingsite.es
1
El kit debe conservarse a 2-8°C, y puede utilizarse hasta la fecha de caducidad
indicada en la etiqueta. Los antisueros, calibradores, controles y el acelerador de
reacción no abiertos deben conservarse a 2-8°C. Una vez abiertos, son estables
durante 4 semanas a 2-8°C siempre que se evite la evaporación y contaminación. Los
viales abiertos no deben dejarse en el analizador cuando no se estés utilizando. Si los
reactivos se dejan a temperatura ambiente durante periodos prolongados o si se
enfrían y atemperan repetidamente, puede provocar su deterioro.
Los viales de antisuero no abierto pueden, con el tiempo, desarrollar un precipitado o
turbidez que no está originada por contaminación microbiana y que no afecta a la
actividad del antisuero. En estos casos el antisuero ha de aclararse por filtración a
través de un filtro desechable de 0,2µm de poro o por centrifugación (unos 10 minutos
a 15,000xg).
7
*BN™ es una marca de Siemens Healthcare Diagnostics Inc.
UTILIZACIÓN
Las muestras de sangre se han de obtener por punción en vena, dejar que coagule de
modo natural y separar el suero lo antes posible para prevenir la hemólisis. El suero se
conserva a 2-8ºC hasta 8 días, o se congela sin diluir a -20ºC para periodos más
largos. Evitar la congelación repetida de las muestras. No deben utilizarse muestras
hemolizadas, lipémicas, con contaminación microbiana o muestras que contengan
partículas.
8
8.1
RESUMEN Y EXPLICACIÓN
La IgG en adultos normales supone aproximadamente el 75% de las inmunoglobulinas
séricas totales. Dentro de la clase IgG, el orden habitual de concentración de las 4
subclases es IgG1>IgG2>IgG3>IgG4, aunque la concentración real puede variar
mucho entre individuos.
Las 4 subclases IgG muestran propiedades considerablemente distintas, incluyendo la
capacidad de fijación del complemento, unión a macrófagos y paso a través de la
placenta. Niveles anormales de una o más subclases pueden estar asociados con
ciertas condiciones, incluyendo anafilaxis, enfermedades autoinmunes e intestinales
así como hipo- o hiper-gammaglobulinemia (ref 1). Concretamente, una producción
disminuida de IgG2 en niños puede estar asociada con infecciones recurrentes (ref. 2).
Este tema ha sido revisado (refs 3 y 4). El nefelómetro de Behring permite una
automatización completa, la cuantificación rápida de reacciones de precipitación para
la determinación de proteínas y pueden realizar todos los ensayos al mismo tiempo.
3
PRINCIPIO
La determinación de la concentración de antígenos solubles por métodos
nefelométricos supone la reacción con un antisuero específico, con lo que se forman
complejos insolubles. Cuando la luz pasa a través de la suspensión una parte de la luz
se dispersa y enfoca a un fotodiodo por medio de un sistema de lentes ópticas. La
cantidad de luz dispersa es directamente proporcional a la concentración de la
proteína específica en la muestra. Las concentraciones se calculan automáticamente
en referencia a una curva de calibración almacenada en el instrumento.
4
4.1
REACTIVOS
Antisueros IgG1, IgG2, IgG3, IgG4 humana. Son monoespecíficos para la
subclase correspondiente y se suministran en forma líquida estabilizada.
Contienen: azida sódica 0,099%, ácido E-amino-N-caproico (EACA) 0,1%,
ácido etilendiaminotetraacético (EDTA) 0,1%, BSA 0,5% y benzamidina 0,01%
como conservantes.
4.2
Calibradores y controles. Preparados a partir de una mezcla estabilizada y
libre de lípidos de suero humano, se suministran en forma líquida estabilizada.
Conservantes: azida sódica 0,099%, EACA 0,1% y benzaminida 0,01%. La
concentración de las subclases IgG indicada en la etiqueta se ha obtenido
por comparación con el material de referencia DA470k (refs. 5 y 6).
4.3
Acelerador de reacción. Conservante: azida sódica 0,099%.
5
OBTENCIÓN Y PREPARACIÓN DE LAS MUESTRAS
Utilice muestras de suero frescas o ultra congeladas.
Este kit está preparado para la cuantificación de las subclases IgG 1, 2, 3 y/o 4
humanas en suero en el analizador BNII. La medida de estas inmunoglobulinas ayuda
en el diagnóstico del metabolismo anormal de proteínas y la incapacidad del
organismo en su resistencia frente a agentes infecciosos.
2
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD
AVISO: Este kit contiene azida sódica debe manipularse con precaución; use guantes
y vestuario protector adecuado en todo momento al manipular este producto. No
trague ni permita el contacto con la piel o las mucosas (especialmente si hay heridas).
En caso de contacto, lave con abundante agua y consulte a un médico. Con el plomo y
el cobre pueden formarse azidas metálicas explosivas. Cuando se elimine el reactivo,
lave con mucha agua los recipientes para evitar la acumulación de azida.
Material suministrado en el kit “Combi” (NK001.T)
Componentes
Human IgG1 Antiserum (Antisuero IgG1 Humana)
Human IgG2 Antiserum (Antisuero IgG2 Humana)
Human IgG3 Antiserum (Antisuero IgG3 Humana)
Human IgG4 Antiserum (Antisuero IgG4 Humana)
Human IgG Subclass Calibrator (Calibrador IgG Subclase Humana)
Human IgG Subclass Control Serum (Suero control IgG Subclase
Humana)
Human IgG Subclass Low Control (Control Bajo IgG Subclase
Humana)
Reaction Accelerator (Acelerador de Reacción, utilizado como
“Reactivo Suplementario” para uso con IgG2 e IgG4)
8.2
NK001.T
1 x 1,6mL
1 x 1,6mL
1 x 1,6mL
1 x 1,6mL
2 x 1mL
2 x 1mL
2 x 1mL
1 x 3mL
Material suministrado en los kits monoespecíficos
(NK006.T, NK007.T, NK008.T, NK009.T)
Componentes
Subclass Antisera (Antisueros de subclases)
Human IgG Subclass Calibrator (Calibrador IgG Subclase Humana)
Human IgG Subclass Control Serum (Suero Control IgG Subclase
Humana)
Human IgG Subclass Low Control (Control Bajo IgG Subclase
Humana)
Reaction Accelerator (Acelerador de Reacción, utilizado como
“Reactivo Suplementario”) para uso con IgG2 e IgG4)
NK006/7/8/9.T
4 x 1,6mL
2 x 1mL
3 x 1mL
3 x 1mL
2 x 3mL
8.3
Materiales necesarios pero no suministrados
8.3.1
8.3.2
Materiales necesarios para la preparación de las muestras, como tubos para
la recolección de la sangre, pipetas, centrífuga, etc.
Analizador automático funcional y equipado.
8.4
Procedimiento de ensayo
8.4.1
8.4.2
Prepare el analizador como indica el manual de usuario.
Recomendamos que las subclases IgG se ensayen por separado a otros
tests, ya que requieren la utilización de un acelerador de reacción colocado
en el analizador como reactivo suplementario.
Los protocolos para el ensayo de las subclases IgG se encuentran ya
definidos en el analizador. El calibrador de subclase IgG se ha de colocar en
el analizador como un estándar de Behring. Por tanto, cualquier reactivo
Behring se ha de quitar del instrumento antes del análisis de la subclase IgG.
Los parámetros están disponibles en la sección apéndice del folleto
interior.
8.4.3
PRECAUCIONES
Los sueros humanos suministrados en el kit han sido sometidos a screening para
donantes, resultando negativos a la presencia del antígeno de superficie de la
hepatitis B y a la presencia de los anticuerpos de la ante los virus HIV1, HIV2 y HCV.
Las técnicas usadas están aprobadas por la FDA (USA) o para el diagnóstico in vitro
por la UE (Directiva 98/79/EC, Anexo II). Sin embargo los sobredichos ensayos no
garantizan la ausencia de agentes infecciosos. Por lo tanto, deben tratarse los
reactivos como potencialmente infecciosos. Tanto la manipulación como los métodos
de eliminación de desechos deberán realizarse conforme a la normativa de materiales
infecciosos y solo personal adecuadamente instruido deberá efectuar el test.
METODOLOGÍA
8.5
Para introducir el valor del calibrador
8.5.1
Es probable que „Prot. Standard PY, OR „Prot.Standard SY‟ hayan sido ya
definidos como el calibrador de subclase IgG para los ensayos. El usuario
puede confirmarlo haciendo click en Definition y Standard. Si se ha definido
el ensayo para el estándar correspondiente, hay una “X” en el campo de la
intersección del ensayo y el estándar. Debe ser así para proceder.
Haga click en Calibrator y Standard lots. Si ya existe un número de lote
Behring para el calibrador para subclases IgG (vea la primera columna
vertical en la cuadrícula) no hay que cambiarlo. Si el usuario no puede ver el
ensayo, desplácese a través de la pantalla hasta que aparezca.
Haga click en la intersección del ensayo y el estándar. (Debe haber un valor
previo o una “X”). Haga click sobre el nombre del patrón, luego click en “?”, el
icono de pregunta. Esto permitirá al usuario entrar el valor de la etiqueta del
calibrador de subclase IgG. Pulse el botón Save.
8.5.2
8.5.3
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 7 of 11
8.6
Para introducir los números de lote de los reactivos
8.6.1
Haga click en Calibration y Reagent e introduzca los numerous 5º y 6º del
código de barras de la etiqueta para los reactivos IgG1 -> IgG4
seleccionándolos individualmente y haciendo click en el botón Save. Es
importante que se introduzcan ya que en analizador comprobará el número
de lote introducido.
8.7
Realización de un ensayo
8.7.1
Solicite la calibración para las cuatro subclases haciendo click en
Calibration y Reference Curve y seleccionando los ensayos de la lista. Tras
cada selección haga click en el botón Measure.
Coloque los reactivos en los racks. Los reactivos antisuero han de colocarse
en las filas 1, 2, 3, 4 o 5, mientras que la botella de Acelerador de Reacción
ha de colocarse en la fila 3, 4 o 5 y se utiliza como “Supplementary reagent”
para los ensayos IgG2 e IgG4.
Coloque el calibrador en un rack en las filas 6-15.
En ambos casos el rack de acelerador de reacción y el rack de calibrador
serán rechazados ya que no detecta código de barras. Se abre el diálogo en
la pantalla y el usuario debe hacer click en el supplementary
reagent/standard en la lista y después hacer click en la correspondiente
posición requerida del rack mostrado.
Recoloque los racks quitándolos primero del analizador y volviendo a
colocarlos otra vez.
8.7.2
8.7.3
8.7.4
8.7.5
Rango de medida aproximado
(mg/L)
1310 – 42000
313 – 10000
175 – 5600
120 – 3840
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
9
4-6 años
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG total
6-8 años
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG total
8-10 años
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG total
10-12 años
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG total
12-14 años
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG total
14-18 años
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG total
Sensibilidad aproximada
(con una dilución de muestra 1:5)
66mg/L
78mg/L
44mg/L
30mg/L
CONTROL DE CALIDAD
Las concentraciones de subclases IgG asignadas a los controles suministrados se
indican en las etiquetas de los viales. Los valores obtenidos para el control suministrado
deben estar dentro de ±15% del valor de concentración indicado en la etiqueta.
10
10.1
10.2
10.3
10.4
10.5
Rango 95 percentil
3060 – 9450
605 – 3450
99 – 1221
18 – 1125
5320 - 13400
43
43
43
43
43
5758
1754
437
331
8860
2880 – 9180
440 – 3750
155 – 853
4 – 992
4540 – 13600
32
32
32
32
32
6345
2126
521
349
9700
4320 – 10200
720 – 4300
127 – 853
19 – 932
5680 - 13600
46
46
46
46
46
6421
1980
620
323
10200
4230 – 10600
760 – 3550
173 – 1730
16 – 1150
5680 - 14900
54
54
54
54
54
6581
2486
583
409
10500
3420 – 11500
1000 – 4550
283 – 1250
37 – 1360
6640 – 14900
48
48
48
48
48
6057
2614
708
521
10100
3150 – 8550
640 – 4950
230 –1960
110 – 1570
5500 – 14400
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Se obtuvieron los siguientes datos en nuestro laboratorio utilizando este producto.
Se ha comprobado que los ensayos nefelométricos de subclases IgG
correlacionan bien con los ensayos RID de dilución única de Binding Site,
con un amplio número de muestras.
Estos kits no son adecuados para la medida de muestras con niveles
elevados de factores reumatoides, paraproteinas, complejos inmuno
circulantes (CICs), o para muestras hemolizadas o lipémicas, debido al
impredecible grado de dispersión inespecífica que pueden generar estas
muestras. Resultados inesperados deben confirmarse mediante un método
alternativo.
Se recomienda a los clientes que ensayen ambos controles con cada lote de
muestras ensayadas. Si un valor de control queda fuera de rango cuando se
ensaya frente a una curva almacenada, el ensayo debe recalibrarse. Si
quedan fuera de los límites aceptables en un ±15% frente a la nueva curva
de calibración, se ha de comprobar el instrumento y los parámetros antes de
repetir el ensayo. Si los problemas continúan, póngase en contacto con su
proveedor.
Los resultados de la medida de subclases IgG no deben utilizarse para
evaluar atopia en pacientes alérgicos.
No debe realizarse el diagnóstico ni iniciarse un tratamiento basándose
únicamente en la medida de las subclases IgG, deben tenerse en cuenta
también la historia clínica y resultados de otras pruebas de laboratorio.
12.1
Rangos normales, adultos
Estos rangos se obtuvieron midiendo las subclases en sueros proporcionados por el
Birmingham Blood Transfusion Service, de donantes adultos sanos.
Precisión intra-ensayo
Se ensayaron 3 preparaciones de suero con niveles distintos de subclases IgG. Cada
uno de los valores mostrados se calculó a partir de 10 medidas realizadas en el mismo
ensayo. Todas las concentraciones están en mg/L.
IgG1
Media
CV%
2709
2,36
8657
2,95
21007
3,98
Suero 1
Suero 2
Suero 3
12.2
Suero 1
Suero 2
Suero 3
12.3
IgG1
Media
CV%
2811
3,56
8478
2,99
21480
4,02
IgG1
Media
CV%
Mediana
(mg/L)
Rango 95 percentil
(mg/L)
Suero 1
(nº. de muestras)
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
30
30
30
30
6330
4528
790,7
280,0
6085
4541
706,4
215,3
3824 – 9286
2418 – 7003
218,2 – 1760,6
39,2 – 864,0
Suero 2
(nº. de muestras)
Suero 3
(nº. de muestras)
13
Rangos pediátricos
Media
5248
838
445
129
6640
Rango 95 percentil
1940 – 8420
225 – 3000
186 – 853
5 – 784
3270 – 12700
36
36
36
36
36
5495
1146
396
171
7770
3150 – 9450
360 – 2250
173 – 676
10 – 537
4680 – 12500
IgG2
Media
CV%
1724
3,44
3372
2,57
3712
4,83
IgG3
Media
CV%
169
2,07
376
1,78
850
2,39
IgG4
Media
CV%
90,7
6,69
336
3,32
985
3,90
Se ensayaron diferentes preparaciones de suero cada una con niveles distintos de
subclases IgG, utilizando kits de lotes diferentes. A continuación se muestra el %CV
global de los resultados para cada concentración. Todas las concentraciones se
expresan en mg/L.
Media
(mg/L)
N
39
39
39
39
39
IgG4
Media
CV%
91,3
3,20
339
2,89
1011
1,73
Precisión inter-lote
Número
(n)
0-2 años
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG total
2-4 años
IgG1
IgG2
IgG3
IgG4
IgG total
IgG3
Media
CV%
162
3,30
355
3,29
830
3,24
Precisión inter-ensayo
Subclase
IgG
Estos rangos se obtuvieron midiendo la IgG total y las subclases en muestras de suero
pediátricas del Birmingham Hospital, utilizando productos de inmunodifusión radial de
Binding Site. Las concentraciones se expresan en mg/L.
IgG2
Media
CV%
1705
2,23
3669
3,19
8834
3,21
Se ensayaron 3 preparaciones de suero con niveles distintos de subclases IgG en seis
ensayos separados utilizando kits del mismo lote. Las concentraciones se indican en
mg/L.
VALORES ESPERADOS
Los valores indicados a continuación se obtuvieron a partir de un número limitado de
muestras inglesas y se ofrecen únicamente como una guía. Es muy recomendable que
cada laboratorio establezca sus propios rangos de normalidad.
11.2
Media
6149
1496
531
329
9280
LIMITACIONES DEL MÉTODO
11
11.1
12
N
49
49
49
49
49
1.
2.
3.
4.
5.
6.
4411
14191
20190
4,57
(11)
4,39
(11)
4,43
(11)
IgG2
Media
CV%
504
4194
11530
3,93
(10)
4,93
(10)
5,07
(10)
IgG3
Media
CV%
136
658
1463
4,70
(10)
6,33
(10)
4,92
(10)
IgG4
Media
CV%
204
468
827
6,27
(11)
5,78
(10)
5,94
(11)
BIBLIOGRAFÍA
Shakib, F & Stanworth D R (1980), Human IgG subclasses in health and
disease (Part II). La Ricerca Clin. Lab. 10, 561-580.
Shackleford, P G, Polmar, S H et al (1986), Spectrum of IgG2 subclass
deficiency in children with recurrent infections: Prospective study. J. Pediatr.
108, 647-653.
Hamilton, R H (1987), Human IgG subclass measurements in the clinical
laboratory. Clin. Chem. 33, 1707-1725.
Schur, P H (1987), IgG subclasses – a review. Annals of Allergy 58, 89-99.
Carr-Smith, H.D, Overton, J, Bradwell, A.R. (1997). IgG subclass value
assignment to the protein reference preparation CRM470. Clin. Chem. Vol.
43, No. 56, PS238.
Williams, D.R., Wilson, C.T., Carr-Smith, H.D. (2009). Assignment of IgG
Subclass Values to the Protein Reference Preparation DA470k. Clin. Chem.
Vol. 55, No. S6, PS C-90.
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 8 of 11
APPENDIX / ANHANG / APPENDICE / APÉNDICE
IgG1 Parameters / IgG1 Testparameter / Paramètres IgG1 / Parámetros IgG1
[ IgG1
Identification for Host
Version
Derived from assay
Sample Type
[
]
[ 1.0
]
[ 0
]
[ Serum ]



3 
4 
5 
Transfer arm
[Left  ] Washing Program no.
Probe cleaning intensity [0
] Probe rinsing intensity
Assay name (with assay selection)
Abbreviation
Transfer step 2.
No. of Transfer Steps
1 
2 
]
Assay Name
[Human IgG1 Antiserum]
Position in List
[
Behring Assay Code [ 51
System liquid [ Buffer]
]
]
Allow multiple lots
Mini-batch
Do not interrupt preparation
[
[0
1]
]
Volume [µL] [ 70] Dispensing program no.
[1]
[ Reagent] [Reagent ] [IgG1
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
] Volume [µL] [ 40] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
[2]
[1]
[1]
[1]
Destination Mixing
] [0.600]
[1]


[ sec
Dispensing program no.
Preincubation
Minimum
[ 0 ] Maximum
Start measurement after this transfer step
[0]
Measurement

Prereaction
Start prereaction
[ 0.0
Factor
[ 1.0
Initial measurement [ sec ] [ 7.5
Number of averaging points [ 4
VlinIntegral
Start evaluation
[ sec ] [ 0.0
Upper preeval. rate
[ 0.0
Stop evaluation
[ sec ] [ 0.0
Lower preeval. rate
[ 0.0
Integral area
[ 0

IgG2 Parameters / IgG2 Testparameter / Paramètres IgG2 / Parámetros IgG2
[ Fixed time ]
[ 0.00
] mg/L
Method
Lower Measuring Range Limit
Assay name (with assay selection)
] Stop prereaction
[ sec ] [ 0.0
] Constant to be added
[ 0.0
] Last measurement [ sec ] [ 360
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
Polynomial regress.
Min. search window
Preeval. Window
Min. regression time
Upper max. eval. offset
[
[
[
[
[
3
0.0
0.0
0.0
0.0
Abbreviation
[ IgG2
Identification for Host
Version
Derived from assay
Sample Type
[
]
[ 1.0
]
[ 0
]
[ Serum ]



Variable start of eval.
]
Assay Name
[Human IgG2 Antiserum]
Position in List
[
Behring Assay Code [ 52
]
]
Allow multiple lots
Mini-batch
Do not interrupt preparation
Measurement
Remeasurement


Lower remeasurement limit [ 0.000 ]
limit
[ 0.000 ]
Max. no. of remeas.
[ 1
]
If result within limits remeasure in
Take
Remeasurement in
Method
Lower Measuring Range Limit
higher dilution
lower dilution
Upper remeasurement

Prereaction
Start prereaction
[ 0.0
Factor
[ 1.0
Initial measurement [ sec ] [ 7.5
Number of averaging points [ 4
VlinIntegral
Start evaluation
[ sec ] [ 0.0
Upper preeval. rate
[ 0.0
Stop evaluation
[ sec ] [ 0.0
Lower preeval. rate
[ 0.0
Integral area
[ 0
[ Same dilution ]
[ Lowest result  ]
Result
Unit
No. of digits after decimal point
Conversion factor from mg/L to IU/L
Conversion factor from mg/L to U/L
Conversion factor from mg/L to mol
[
[
[
[
[
[ Fixed time ]
[ 0.00
] mg/L
mg/L  ]
0
]
1.000000 ]
1.000000 ]
1.000000 ]

] Stop prereaction
[ sec ] [ 0.0
] Constant to be added
[ 0.0
] Last measurement [ sec ] [ 720
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
Polynomial regress.
Min. search window
Preeval. Window
Min. regression time
Upper max. eval. offset
[
[
[
[
[
3
0.0
0.0
0.0
0.0
Variable start of eval.
Remeasurement
Sample dilution


Lower remeasurement limit [ 0.000 ]
limit
[ 0.000 ]
Max. no. of remeas.
[ 1
]
If result within limits remeasure in
Take
Remeasurement in
[ 1:100  ]
[ 1:5
 ]
Sample dilution
Minimum dilution
Turbidity check
Turbidity threshold
[800 ] Bit Turbidity factor [ 15 ] %
Upper limit of turbidity check [1800 ] Bit
If you do not wish the turbidity check to be performed, set all values to 0.
higher dilution
lower dilution
Upper remeasurement
[ Same dilution ]
[ Lowest result  ]
Result
Unit
No. of digits after decimal point
Conversion factor from mg/L to IU/L
Conversion factor from mg/L to U/L
Conversion factor from mg/L to mol
Washing
Cuvette contamination
[10000 ] Dilution probe contamination [0]
Cuvette washing intensity [100000] Dilution probe rinsing intensity [0]
[
[
[
[
[
mg/L 
0
1.000000
1.000000
1.000000
]
]
]
]
]
Technical parameters
Sample dilution
Transfer step 1.
Sample dilution
Minimum dilution
No. of Transfer Steps
1 
2 
3 
4 
[ 1:20
[ 1:5
 ]
 ]
5 
Turbidity check
Transfer arm
[Right  ] Washing Program no.
Probe cleaning intensity [1000000] Probe rinsing intensity
System liquid [ Buffer  ]
Volume [µL] [ 70] Dispensing program no.
[ Sample ] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
Destination Mixing


[ sec
[
1]
[10000000 ]
] Volume [µL]
] Volume [µL]
] Volume [µL]
] Volume [µL]
]
[25] Dispensing program no.
[ 0] Dispensing program no.
[ 0] Dispensing program no.
[ 0] Dispensing program no.
[4]
[2]
[1]
[1]
[1]
Turbidity threshold
[800 ] Bit Turbidity factor [ 15 ] %
Upper limit of turbidity check [1800 ] Bit
If you do not wish the turbidity check to be performed, set all values to 0.
Washing
Cuvette contamination
[10000 ] Dilution probe contamination [0]
Cuvette washing intensity [100000] Dilution probe rinsing intensity [0]
[ 0.0] Dispensing program no. [7]
Preincubation
Minimum
[ 0 ] Maximum
Start measurement after this transfer step
[0]
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 9 of 11
Technical parameters
Turbidity check
Transfer step 1.
Turbidity threshold
[800 ] Bit Turbidity factor [ 15 ] %
Upper limit of turbidity check [1800 ] Bit
If you do not wish the turbidity check to be performed, set all values to 0.
No. of Transfer Steps
1 
2 
3 
4 
5 
Washing
Transfer arm
[Right  ] Washing Program no.
Probe cleaning intensity [1000000] Probe rinsing intensity
System liquid [ Buffer]
[
1]
[10000000 ]
Volume [µL] [ 70] Dispensing program no. [4]
[ Reagent] [Reagent ] [ACC
[ Sample ] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
] Volume [µL] [ 10] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 25] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
Destination Mixing
] [0.000]


Cuvette contamination
[10000 ] Dilution probe contamination [0]
Cuvette washing intensity [100000] Dilution probe rinsing intensity [0]
[ sec
[2]
[2]
[1]
[1]
Dispensing program no. [7]
Preincubation
Minimum
[ 0 ] Maximum
Start measurement after this transfer step
[0]
Technical parameters
Transfer step 1.
No. of Transfer Steps
1 
2 
3 
No. of Transfer Steps
1 
2 
3 
4 
5 
Transfer arm
[Left  ] Washing Program no.
Probe cleaning intensity [0
] Probe rinsing intensity
[
[0
1]
]
Volume [µL] [ 70] Dispensing program no.
[1]
[ Reagent] [Reagent ] [IgG2
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
] Volume [µL] [ 40] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
[2]
[1]
[1]
[1]
Destination Mixing
] [0.600]
[1]


[ sec
[
1]
[10000000 ]
Volume [µL] [ 70] Dispensing program no.
[ Sample ] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
Destination Mixing
System liquid [ Buffer]
5 
Transfer arm
[Right  ] Washing Program no.
Probe cleaning intensity [1000000 ] Probe rinsing intensity
System liquid [ Buffer  ]
Transfer step 2.
4 
] Volume [µL]
] Volume [µL]
] Volume [µL]
] Volume [µL]
]
[25] Dispensing program no.
[ 0] Dispensing program no.
[ 0] Dispensing program no.
[ 0] Dispensing program no.
[4]
[2]
[1]
[1]
[1]
[ 0.0] Dispensing program no. [7]
Preincubation
Minimum
[ 0 ] Maximum
Start measurement after this transfer step
[0]
Transfer step 2.


[ sec
Dispensing program no.
Preincubation
Minimum
[ 0 ] Maximum
Start measurement after this transfer step
[0]
No. of Transfer Steps
1 
2 
3 
4 
5 
Transfer arm
[Left  ] Washing Program no.
Probe cleaning intensity [0
] Probe rinsing intensity
[
[0
1]
]
IgG3 Parameters / IgG3 Testparameter / Paramètres IgG3 / Parámetros IgG3
System liquid [ Buffer]
Volume [µL] [ 70] Dispensing program no.
[1]
[ Reagent] [Reagent ] [IgG3
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
] Volume [µL] [ 40] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
[2]
[1]
[1]
[1]
Destination Mixing
] [0.600]
[1]
Assay name (with assay selection)
Abbreviation
[ IgG3
]
Assay Name
[Human IgG3 Antiserum]
Identification for Host [
]
Position in List
[
Version
[ 1.0
]
Behring Assay Code [ 64
Derived from assay [ 0
]
Sample Type
[ Serum ]
]
]





Allow multiple lots
Mini-batch
Do not interrupt preparation
Abbreviation
] Stop prereaction
[ sec ] [ 0.0
] Constant to be added
[ 0.0
] Last measurement [ sec ] [ 360
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
Polynomial regress.
Min. search window
Preeval. Window
Min. regression time
Upper max. eval. offset
Remeasurement


Lower remeasurement limit [ 0.000 ]
limit
[ 0.000 ]
Max. no. of remeas.
[ 1
]
If result within limits remeasure in
Take
Remeasurement in
higher dilution
lower dilution
Upper remeasurement
[ Same dilution ]
[ Lowest result  ]
Result
Unit
No. of digits after decimal point
Conversion factor from mg/L to IU/L
Conversion factor from mg/L to U/L
Conversion factor from mg/L to mol
[
[
[
[
[
3
0.0
0.0
0.0
0.0
[ IgG4
]
Assay Name
[Human IgG4 Antiserum]
Identification for Host [
]
Position in List
[
Version
[ 1.0
]
Behring Assay Code [ 0
Derived from assay [ 0
]
Sample Type
[ Serum ]



[
[
[
[
[
mg/L 
1
1.000000
1.000000
1.000000
]
]
]
]
]
Sample dilution
[ 1:20
[ 1:5
 ]
 ]
]
]
Allow multiple lots
Mini-batch
Do not interrupt preparation
Measurement
Method
Lower Measuring Range Limit
Variable start of eval.
Sample dilution
Minimum dilution
[0]
Assay name (with assay selection)
[ Fixed time ]
[ 0.00
] mg/L

Prereaction
Start prereaction
[ 0.0
Factor
[ 1.0
Initial measurement [ sec ] [ 7.5
Number of averaging points [ 4
VlinIntegral
Start evaluation
[ sec ] [ 0.0
Upper preeval. rate
[ 0.0
Stop evaluation
[ sec ] [ 0.0
Lower preeval. rate
[ 0.0
Integral area
[ 0

Dispensing program no.
IgG4 Parameters / IgG4 Testparameter / Paramètres IgG4 / Parámetros IgG4
Measurement
Method
Lower Measuring Range Limit
[ sec
Preincubation
Minimum
[ 0 ] Maximum
Start measurement after this transfer step

Prereaction
Start prereaction
[ 0.0
Factor
[ 1.0
Initial measurement [ sec ] [ 7.5
Number of averaging points [ 4
VlinIntegral
Start evaluation
[ sec ] [ 0.0
Upper preeval. rate
[ 0.0
Stop evaluation
[ sec ] [ 0.0
Lower preeval. rate
[ 0.0
Integral area
[ 0

[ Fixed time ]
[ 0.00
] mg/L
] Stop prereaction
[ sec ] [ 0.0
] Constant to be added
[ 0.0
] Last measurement [ sec ] [ 720
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
]
Polynomial regress.
Min. search window
Preeval. Window
Min. regression time
Upper max. eval. offset
Variable start of eval.
Remeasurement


Lower remeasurement limit [ 0.000 ]
limit
[ 0.000 ]
Max. no. of remeas.
[ 1
]
If result within limits remeasure in
Take
Remeasurement in
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 10 of 11
higher dilution
lower dilution
Upper remeasurement
[ Same dilution ]
[ Lowest result  ]
[
[
[
[
[
3
0.0
0.0
0.0
0.0
Result
Double-click on the field with an X at the intersection of the calibrator name and IgG4
and check the details below:
Unit
No. of digits after decimal point
Conversion factor from mg/L to IU/L
Conversion factor from mg/L to U/L
Conversion factor from mg/L to mol
[
[
[
[
[
mg/L 
1
1.000000
1.000000
1.000000
]
]
]
]
]
Points on curve
Start dilution
Identification
Value
Permitted deviation
[6
]
[ 1:2.5 ]
[
]
[0
]
[ 10
]
Sample dilution
Sample dilution
Minimum dilution
[ 1:20
[ 1:5
 ]
 ]
Turbidity check
Turbidity threshold
[800 ] Bit Turbidity factor [ 15 ] %
Upper limit of turbidity check [1800 ] Bit
If you do not wish the turbidity check to be performed, set all values to 0.
Washing
Cuvette contamination
[10000 ] Dilution probe contamination [0]
Cuvette washing intensity [100000] Dilution probe rinsing intensity [0]
Technical parameters
Transfer step 1
No. of Transfer Steps
1 
2 
3 
4 
5 
Transfer arm
[Right  ] Washing Program no.
Probe cleaning intensity [1000000] Probe rinsing intensity
[
1]
[10000000 ]
System liquid [ Buffer]
Volume [µL]
[ Reagent] [Reagent ] [ACC
[ Sample ] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
] Volume [µL] [ 10] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 25] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
Destination Mixing
] [0.000]


[ sec
[ 70] Dispensing program no. [4]
[2]
[2]
[1]
[1]
Dispensing program no. [7]
Preincubation
Minimum
[ 0 ] Maximum
Start measurement after this transfer step
[0]
Transfer step 2.
No. of Transfer Steps
1 
2 
3 
4 
5 
Transfer arm
[Left  ] Washing Program no.
Probe cleaning intensity [ 0
] Probe rinsing intensity
System liquid [ Buffer]
[
[
1
0
]
]
Volume [µL] [ 70] Dispensing program no.
[1]
[ Reagent] [Reagent ] [IgG4
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
[
] [Reagent ] [
] Volume [µL] [ 40] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
] Volume [µL] [ 0] Dispensing program no.
[2]
[1]
[1]
[1]
Destination Mixing
] [0.600]
[1]


[ sec
Dispensing program no.
Preincubation
Minimum
[ 0 ] Maximum
Start measurement after this transfer step
[0]
TO ENTER THE CALIBRATOR VALUES/ EINGABE DER KALIBRATORWERTE/
ENTRER LES VALEURS DU CALIBRATEUR / PARA INTRODUCIR LOS VALORES
DEL CALIBRADORES:
Double-click on the field with an X at the intersection of the calibrator name and IgG1
and check the details below:
Points on curve
Start dilution
Identification
Value
Permitted deviation
[6
[ 1:20
[
[0
[ 10
]
]
]
]
]
 with zero calibrator
 Extrapolation
bits
%
Double-click on the field with an X at the intersection of the calibrator name and IgG2
and check the details below:
Points on curve
Start dilution
Identification
Value
Permitted deviation
[6
[ 1:10
[
[0
[ 10
]
]
]
]
]
 with zero calibrator
 Extrapolation
bits
%
Double-click on the field with an X at the intersection of the calibrator name and IgG3
and check the details below:
Points on curve
Start dilution
Identification
Value
Permitted deviation
[6
]
[ 1:2.5 ]
[
]
[0
]
[ 10
]
 with zero calibrator
 Extrapolation
bits
%
Insert Code: SIN024, Version: 10th August 2011, Page 11 of 11
 with zero calibrator
 Extrapolation
bits
%