ADN ESTRUCTURA CROMOSOMAS Y GENOMAS
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ADN ESTRUCTURA CROMOSOMAS Y GENOMAS v Los cromosomas son los portadores de los elementos hereditarios v Los cromosomas están compuestos de ADN y proteínas v Cada cromosoma está formado por una molécula de ADN Breve Historia… Cepa R inocua Frederick Griffith, 1928 Streptococcus pneumoniae S: cubierta de polisacáridos PRESENTE R: cubierta de polisacáridos AUSENTE Cepa S letal Oswald Avery, Colin MacLeod, and Maclyn McCarty, 1943. P32 S35 DNA: P32 proteínas: S35 Alfred Hershey & Martha Chase, 1952. El ADN es la molécula de la herencia La naturaleza hereditaria de cada organismo está definida por su genoma, el cuál consiste de largas secuencias de ácidos nucléicos que proporcionan la información necesaria para construir al organismo. Las bases nitrogenadas Los DESOXIRIBONUCLEÓTIDOS Nucleósido Nucleótido Reglas de Chargaff • La cantidad de adenina es la misma que la de timina: A=T • La cantidad de guanina equivale a la de citosina: G=C • La cantidad de bases púricas es la misma que las bases pirimídicas: A+G=T+C Pero la cantidad de A+T ≠ G+C Existe complementariedad entre bases nitrogenadas Estructura del ADN Rosalind Franklin y Maurice Wilkins James Watson y Francis Crick Surco menor Surco menor Surco mayor Surco mayor 5’ PO4- 3’ OH Complementariedad: Cadenas anti-paralelas A Extremo 5’: PO4Extremo 3’: OH T G C Bases nitrogenadas: interior Fosfatos: exterior La estructura del ADN permite responder dos preguntas claves en la Genética: 1. ¿Cómo se puede determinar la información de una función biológica en una forma química? 2. ¿Cómo se puede copiar la información a generaciones sucesivas? Propiedades del ADN Desnaturalización y Re-naturalización El contenido de GC influye en las propiedades del ADN, especialmente sobre la temperatura de desnaturalización y alineamiento % GC Tm Purificación de ADN 2. Romper células 1. Concentrar células Source Lysis Methods Lysozyme - degrades polysaccharide cell walls SDS - detergent for cell Bacteria membranes Freeze/Thaw several times French Press Osmotic Organelles Sonication Detergent Osmotic Animal Cells Sonication Detergent Plant Cells Several enzymes to break down cell walls Mechanical grinding 4. Precipitar ADN • • • Etanol Isopropanol Butanol 3. Eliminar proteínas Si quieres extraer ADN en casa, consulta: http://learn.genetics.utah.edu/content/labs/extraction/howto/ Concentración y calidad del ADN A260 / A280 Ratio < 1.8 1.8 < Ratio < 1.9 Ratio > 2 Absorbance peak or shoulder at 270 nm Nucleic Acid Form Double -stranded DNA Single-stranded DNA RNA Quality Contains protein contamination no contamination DNA may contain RNA Phenol contamination NA Concentration at 1 A260 50 µg/ml 37 µg/ml 40 µg/ml Separación y visualización de fragmentos de ADN Gel de Agarosa 0.8% - 2.5% Bromuro de etidio: Agente intercalante entre las bases nitrogenadas que fluoresce a la luz UV Bibliografía: Alberts “Molecular Biology of the Cell” 4ª o 5ª Ed. (2002, 2008) Lehninger “Principles of Biochemistry” 3ª, 4ª o 5ª Ed. (2000, 2004, 2008) Lodish “Molecular Cell Biology” 4ª, 5ª o 6ª Ed. (1999, 2003, 2007) http://learn.genetics.utah.edu/ http://www.youtube.com/watch?v=mHak9EZjySs Continuará ….
