ASO-Látex

ASO-Látex
Ensayo de aglutinación en porta sin dilución previa de la muestra.
Sólo para uso «in vitro».
Conservar de 2 a 8 °C.
INTRODUCCIÓN
La estreptolisina O es un factor hemolítico producido por la mayoría de las
cepas de los estreptococos beta-hemolíticos del grupo A. La antiestreptolisina O
(ASO) es un anticuerpo neutralizante específico producido después de la infección con estos microorganismos. La ASO aparece en el suero de una semana a un
mes después de una infección por estreptococos.
El ensayo de ASO es útil para el diagnóstico de fiebre reumática y gromerulonefritis.
APLICACIÓN PROPUESTA
Se emplea para la determinación de ASO en suero humano.
MATERIAL NECESARIO
Micropipetas.
INTERPRETACIÓN
Examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación inmediatamente después de retirar el porta.
-La presencia de aglutinación indica un nivel de ASO igual o superior a 200 UI/
mL en la muestra.
-La ausencia de aglutinación indica un nivel de ASO inferior a 200 UI/mL en la
muestra.
Método semicuantitativo
1. Realizar diluciones dobles de la muestra en solución salina 9g/L.
2. Proceder para cada dilución como en la prueba cualitativa.
CÁLCULOS
La concentración aproximada de ASO en la muestra del paciente se obtiene
aplicando la siguiente fórmula:
200 x Título de ASO = UI/mL
En el método semicuantitativo se define el título como la dilución mayor que da
resultado positivo.
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
El método se fundamenta en una reacción de aglutinación de una suspensión de
partículas de látex de poliestireno sensibilizadas con estreptolisina O estabilizada.
La aglutinación es visible en una concentración de ASO en suero igual o superior
a 200 UI/mL.
CONTROL DE CALIDAD
Se recomienda utilizar el control positivo y negativo para controlar la funcionalidad
del reactivo de látex, así como modelo de comparación para la interpretación de
los resultados.
CONTENIDO
R1 Látex
Tapa blanca
VALORES DE REFERENCIA
Hasta 200 UI/mL
Es recomendable que cada laboratorio establezca sus propios valores de referencia.
Partículas de látex sensibilizadas con Esptreptolisina
O en tampón borato50 mmol/L.
Contiene azida sódica 0,95 g/L
R2 Control positivo Concentración de ASO > 200 UI/mL. Suero humano.
Tapa roja
Contiene azida sódica 0,95 g/L
R3 Control negativo Concentración de ASO: 0 UI/mL. Suero de conejo
Tapa azul
Contiene azida sódica 0,95 g/L.
Portas para látex Cód. 1200101: 8 x 6 portas
Cód. 1200102: 16 x 6 portas
Palillo
Cód. 1200101: 1 paquete x 25
Cód. 1200102: 2 paquetes x 25
CALIBRACIÓN
La sensibilidad del reactivo de látex está estandarizada frente al 1-er Patrón
Internacional de ASO de la OMS [Anti-Streptolysin O, Human ref: 97/662].
PREPARACIÓN Y ESTABILIDAD
El R1 Látex es una suspensión de partículas de látex, debe homogeneizarse, con
una suave agitación, antes de ser utilizado.
Los goteadores dispensan una gota de volumen aproximado de 50 μ L, que es
el idóneo para una buena sensibilidad.
Los reactivos se deben conservar de 2 a 8 ºC, no deben congelarse. En estas
condiciones los componentes mantendrán su funcionalidad hasta la fecha de
vencimiento señalada en la etiqueta.
MUESTRA
Utilizar suero. Los sueros, conservados de 2 a 8 ºC, mantienen su actividad
durante 7 días. Para períodos de tiempo más largos se recomienda congelarlos a
–20 º C.
No utilizar sueros hemolizados. No utilizar sueros altamente lipémicos pues
podrían dar una aglutinación no específica.
TÉCNICA
Método cualitativo
1. Atemperar los reactivos y las muestras a temperatura ambiente. La sensibilidad del ensayo disminuye a temperaturas bajas.
2. Depositar 50 μL de la muestra a ensayar y una gota de cada uno de los
controles positivo y negativo, sobre círculos distintos de un porta.
3. Homogenizar suavemente el R1 Látex antes de usar. Depositar una gota (50
μL) junto a cada una de las gotas anteriores.
4.- Mezclar las dos gotas con un palillo y extenderlas por todo el círculo. Emplear
palillos distintos para cada muestra y usarlos por ambos extremos.
5.-Colocar el porta en el agitador rotatorio (80-100 RPM) y observar la
aparición o ausencia de aglutinación exactamente al cabo de 2 minutos. El
exceso del tiempo de reacción podría dar lugar a resultados falsos positivos. En
caso de no tener el agitador rotatorio la agitación se puede hacer manual en forma
rotatoria y lentamente.
CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
-Límite de detección: 200 UI/mL.
-Valor de prozona: negativo hasta 1500 UI/mL.
-Sensibilidad 98 %.
-Especificidad 97 %.
-No interfieren:
Bilirrubina hasta 342 μmol/L.
Hemoglobina desde 0,63 hasta 10 g/L.
Lípidos desde 0,63 hasta 10 g/L.
Factor reumatoide desde 37,5 hasta 300 UI/mL.
LIMITACIONES DEL MÉTODO
-La artritis reumatoide, escarlatina, amigdalitis, infecciones estreptocócicas diversas y algunos portadores sanos pueden dar resultados falsamente positivos.
-Infecciones recientes y niños con edades comprendidas entre 6 meses y dos
años, pueden dar lugar a resultados falsamente negativos.
-Una determinación aislada no da información suficiente acerca del estado actual
de la enfermedad. En casos dudosos y con el propósito de seguir la enfermedad,
se recomienda repetir la prueba a intervalos quincenales durante 4 ó 6 semanas.
-El diagnóstico clínico no debe realizarse únicamente con los resultados de un
único ensayo, sino que debe considerarse al mismo tiempo los datos clínicos del
paciente.
PRECAUCIONES
El control positivo es un suero humano. Aunque no se ha detectado la
presencia de antígeno HBs, VHC, ni anticuerpos anti-HIV, deben ser manipulados con la misma precaución que un suero muestra, como potencialmente
infeccioso.
Contiene pequeñas cantidades de azida sódica. Evítese el contacto con la piel
dañada y las mucosas.
No congelar.
BIBLIOGRAFÍA
1. Haffejee. Quarterly Journal of Medicine 1992. New series 84; 305: 641-658.
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6. Klein GC. Applied Microbiology 1971; 21: 999-1001.
7. Young DS. Effects of drugs on clinical laboratory tests, 4th ed. AACC Press.
PRESENTACIÓN
Cód.: 1200101
Cód.: 1200102
48 Determ.
96 Determ.
Emisión 03/ Marzo 2004
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NP 7752