(Microsoft PowerPoint - 04-OSNA C\301DIZ MAYO 2013.ppt)

IMPORTANCIA DE LA EVALUACIÓN DE LA EXPRESIÓN
DE CK19 EN BIOPSIAS DE CÁNCER DE MAMA EN
PACIENTES SOMETIDAS A ESTUDIO DEL GANGLIO
CENTINELA MEDIANTE OSNA
Dr. Felip Vilardell
Hospital Universitari Arnau de Vilanova, Lleida
Congreso SEAP
Cádiz, 24/ Mayo/ 2013
INTRODUCCIÓN
El análisis del ganglio centinela (GC) mediante técnica de
“One Step Nucleic Acid Amplification” (OSNA) es un
procedimiento molecular cada vez más usado para el
estadiaje intraoperatorio de la axila en pacientes con
cáncer de mama.
Se basa en la amplificación y cuantificación de RNAm de
citoqueratina 19 (CK19).
Casi todos los carcinomas de mama expresan esta
proteína, pero se ha reportado pérdida de su expresión
en un 6% de casos.
EXPRESIÓN DE CITOQUERATINAS
EN CÁNCER DE MAMA
Mayo, año 2000
CLASIFICACIÓN
MOLECULAR
DEL CÁNCER DE MAMA
(microarrays de cDNA):
- Luminal A y B
- Her-2
- “Basal-like”
FENOTIPO LUMINAL vs BASAL
ONCOLOGY. Vol. 22 No. 11
NATIONAL BREAST CANCER AWARENESS MONTH
Understanding and Treating Triple-Negative Breast Cancer
By CAREY ANDERS, MD
Assistant Professor
INMUNOFENOTIPOS DEL
CÁNCER DE MAMA
Luminal A: ER + o PR +, Her-2 –
Luminal B: ER + o PR +, Her-2 +
Fenotipo Her-2: ER - y PR -, Her-2/neu +
Fenotipo Triple-negativo: ER -, PR -, Her-2 –
– “Basal-like”: Asociado a expresión de EGFR y p53
– No Basal
El método OSNA amplifica el RNA mensajero de la citoqueratina 19
mediante un procedimiento isotérmico, específico y sensible denominado
RT-LAMP (Reverse Transcription Loop-Mediated Isothermal Amplification).
El progreso de la amplificación se monitoriza a tiempo real.
OSNA EN ESTADIAJE AXILAR DEL
CÁNCER DE MAMA
Mediante OSNA se determina la carga
tumoral total (TTL) (número de copias de
mRNA de CK19).
Los valores de corte son los determinados por
Tsujimoto et al. en 2007, a partir de un
estudio sobre 106 ganglios linfáticos.
OSNA EN ESTADIAJE AXILAR
DEL CÁNCER DE MAMA
< 250 copias mRNA CK19 µL:
Células aisladas
250 – 5000 copias mRNA CK19 µL: micrometástasis
(máx. 2 mm)
> 5000 copias mRNA CK19 µL:
macrometástasis
Tsujimoto et al; 2007
INTRODUCCIÓN (2)
En nuestro centro, el análisis del GC mediante OSNA se complementa
con improntas citológicas.
De 450 casos de carcinoma de mama estadiados mediante OSNA e
impronta durante un periodo de 2 años, en un caso se objetivó una
metástasis en la impronta del GC que no fue detectada mediante OSNA:
– A partir de ese caso se ha comprobado sistemáticamente el nivel de
expresión de CK19 en todas las biopsias diagnósticas de cáncer de mama.
– Si la CK19 es negativa en la biopsia, el análisis del GC se realiza mediante
técnicas patológicas convencionales.
En este estudio hemos valorado la frecuencia y el perfil molecular de los
carcinomas de mama CK19 negativos en tres series de casos. A la vez
hemos buscado una posible correlación entre el nivel de expresión de
CK19 en el carcinoma primario y el número de copias de RNAm de CK19
hallado en el GC.
OBJETIVOS
1. Determinar la frecuencia de carcinomas CK19 en cada uno de los cuatro inmunofenotipos del
cáncer de mama.
2. Valorar si la evaluación de CK19 en la biopsia
puede ayudar en la decisión de usar OSNA u otras
metodologías patológicas convencionales para el
estudio del GC.
3. Determinar si existe correlación entre el nivel de
expresión de CK19 en el tumor primario y el número
de copias de mRNA de CK19 detectadas en el GC
mediante OSNA .
MATERIAL Y MÉTODOS
Tres series de casos:
– Serie prospectiva de 197 biopsias consecutivas de
cáncer de mama, incluyendo 182 carcinomas ductales
NOS, 6 carcinomas lobulillares y 9 pertenecientes a otros
subtipos histológicos.
– Serie retrospectiva de 41 carcinomas de mama con
fenotipo triple negativo resecados quirúrgicamente.
– Serie retrospectiva de 68 pacientes, cuyos GCs
fueron positivos para metástasis mediante técnicas
convencionales realizadas con anterioridad a la
implantación del OSNA.
MATERIAL Y MÉTODOS (2)
Se realizó estudio del GC mediante OSNA e improntas en
111 pacientes de la primera serie.
Se determinó el inmunofenotipo y la expresión de
CK19 en las tres series de tumores mediante inmunotinción
de ER, PR, Ki-67, HER2 y CK19 (Dako ®).
– Los tumores con fenotipo triple negativo fueron
caracterizados como “tipo basal” o “no basal” mediante
inmunotinción para CK5/6 y EGFR (Dako ®).
Para los análisis estadísticos se utilizó un software SPSS.
Las correlaciones clínico-patológicas fueron analizadas
mediante tablas de contingencia y el test de X2.
RESULTADOS
Serie prospectiva: Se verificó CK19 en 197 de 202 casos:
– Se halló pérdida de expresión de CK19 en 6 (3,5%) casos:
2 (3,5%) carcinomas de mama con fenotipo luminal A
3 (2,9%) carcinomas con fenotipo luminal B
1 (4,2%) carcinomas triple negativos.
No se halló pérdida de expresión de CK19 en ningún carcinoma Her-2.
– En un caso de carcinoma luminal CK19 - :
Se detectó mediante criosección una macrometástasis de 9 mm en el
GC, en la que mediante inmunotinción posterior para CK19 se
observaron células aisladas CK19 +.
Una inmunotinción posterior de CK19 sobre secciones de la pieza
quirúrgica del correspondiente tumor primario mostró algunas clonas
CK19+ no representadas en la biopsia diagnóstica.
a)
b)
c)
d)
e)
a) CK19 en un carcinoma de mama luminal A en el que se observan escasos grupos celulares con
expresión de dicha citoqueratina
b) y c) Ganglio centinela correspondiente en el que se observa una macrometástasis de 9 mm de
diámetro máximo (H&E y CKAE1/AE3, magnificación original 40 y 100 respectivamente
d) y e) Inmunotinción de CK19 del mismo ganglio centinela en la que se observan escasos grupos
celulares metastásicos con expresión de CK19 (magnificación original 40 y 100 respectivamente).
RESULTADOS (2)
Serie retrospectiva de 41 carcinomas triple
negativos: ningún tumor CK19 -.
Serie retrospectiva de 68 pacientes GC +
diagnosticados con anterioridad al OSNA:
– Un caso con macrometástasis en el GC que fue
CK19 -, así como el correspondiente tumor
primario.
Pruebas de Pearson y de Spearman:
La correlación entre la expresión de CK19 en los carcinomas primarios y el número de
copias de RNAm de CK19 en los correspondientes ganglios centinelas es cercana a
cero, y no resulta estadísticamente significativa en ningún caso.
CONCLUSIONES
Puede hallarse pérdida de expresión de CK19 en
aproximadamente un 3,5% de carcinomas de mama,
incluyendo tumores con fenotipo luminal.
Se halló un caso con expresión heterogénea de CK19 en el
tumor primario, en el que solamente escasas células de la
macrometástasis en el GC eran CK19+. El estudio del GC
hubiera resultado impreciso, probablemente células
aisladas, si se hubiera optado por la técnica OSNA en ese
caso.
Un caso con macrometástasis en el GC en la serie
retrospectiva anterior a la técnica OSNA, en la que tanto la
metástasis como el tumor primario fueron CK19 -.
CONCLUSIONES
La expresión de CK19 debe ser valorada
sistemáticamente en todos los carcinomas
de mama para decidir el método de
estadiaje axilar más adecuado.