Genética Molecular Seminario de Regulación en Procariontes

Genética Molecular
Seminario de Regulación en Procariontes
1.- Considere un operón con el orden: represor, operador, promotor y los
cistrones a, b y c. El represor se une al operador. Cuando un inductor i es
añadido, el represor se inactiva y se sintetiza un mRNA policistrónico.
Normalmente se sintetizan cantidades iguales de A, B y C. Estos productos son
necesarios para la utlización de i como fuente de carbono. Se aísla un mutante
que forma pequeñas colonias en un medio agarizado con i como única fuente de
carbono. Debido a que usted está interesado en las proteínas de los mutantes
"leaky", estudie este fenómeno midiendo la actividad de las proteínas A y B
por pruebas bioquímicas estandar en presencia y ausencia de i. Encuentre lo
siguiente en relación a su actividad:
A
B
i presente
10% de lo normal
Algo mayor de lo normal
i ausente
No hay actividad
Normal
Para estudiar esto decide mapear la mutación realizando una prueba de
dominancia, chequeando la secuencia de aminoácidos de A mediante un mapa
peptídico y probando para C. Un colega le dice que no derroche su tiempo, ya
que le puede decir el resultado de cada prueba , además está seguro que la
actividad de C estará cercana a lo normal, ¿Qué predice su colega?
2.- Un operón involucrado en la utilización del azúcar X es regulado por un gen
llamado b. Cuando X es añadido a las células se sintetiza una Xasa que de otra
forma no es sintetizada. Si el gen b es delecionado (b) no se puede sintetizar la
X asa. El diploide b+ b es inducible. Los mutantes puntuales de b son de dos
tipos, tipo b1 que nunca hacen X asa y b2 que es constitutivo. Los diploides
parciales b+b1 y b + b2 son inducibles y constitutivos respectivamente. Cuál es
el modo probable de acción de la proteína codificada por el gen b?
3.- Explique por qué cuando E. coli crece en presencia de Glucosa e IPTG los
niveles de la enzima -galactosidasa son más bajos que cuando crece solamente
en presencia de IPTG
4.- Qué tipo(s) de mutación(es) podrían traer como consecuencia los siguientes
resultados:
a) El mutante en i (is) es dominante sobre i+, en los diploides parciales
b) Un mutante de E.coli sintetiza grandes cantidades de B-galactosidasa tanto
en presencia como en ausencia del inductor. Un diploide parcial formado a
partir de ese mutante y (1+ o+z+) también sintetiza grandes cantidades de Bgalactosidasa en presencia o ausencia del inductor.
c) De un cultivo de tipo salvaje se aísla un mutante incapaz de crecer en
medios con galactosa, lactosa, arabinosa y otras fuentes de carbono. En ese
mutante el nivel de AMPc es normal.
5.- Diga, Cuál será el comportamiento de los siguientes diploides parciales del
operón lactosa y por qué?
a)
b)
c)
d)
e)
f)
i+z - y +/i - z+ y +
i+z+ y+/i- oc z - y+
i - p - z+/ i- z i+ z - y+/i - oc z - y+
i+z+ y -/ i - z - y+
i- z+ y - / i- z+ y+
Teniendo en cuenta que:
i- Represor mutado en el sitio de reconocimiento del operador, no se puede unir al
operador
oc Operador mutado, no se une al represor
p- Promotor mutado, no se une a RNApol, ni a CAP
Bibliografía. Freifelder
Pag 540-562