Leucosis Bovina: No todo est á perdido
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Leucosis Bovina: No todo está perdido Laboratorio de Virus Adventicios Instituto de Virologia INTA Castelar [email protected] APROCAL 23 / 09 /2010 Rafaela Virus de la Leucosis Bovina=Infección Persistente Retroviridae Linfocitos B Provirus Glóbulos blancos, plaquetas (teñidas de violeta), un linfocito T (teñido de verde) y monocitos (teñidos de dorado) vistos a través de un microscopio electrónico. © 2000 Dennis Kunkel, Ph. D. 1. Respuesta serológica Persistente 2. Recuento de blancos normal (70%) o elevado 3. Carga proviral variable (1-50%) 4. Linfosarcoma (≤10%) FUNCIONAN LAS ESTRATEGIAS ACTUALES ? (AGUJA/JERINGA/GUANTE/etc) Diagnóstico 2010 (%) 94 100 100 100 95 100 94 97 94 99 95 92 99 94 96 86 99 95 93 100 94 91 100 93 96 85 95 67 100 94 ELISA P24 – INSTITUTO DE VIROLOGIA-INTA N=30, todos controlan iatrogenia Que hay que hacer ?: Cortar el ciclo epidemiológico de transmisión 1.Conocer la progresión desde el nacimiento 2. Evaluar fuentes de infección natural y puntos de control Conocer la progresión desde el nacimiento 100% 85,8% 90,7% rp24-ELISA positive animals (%) 80% 63,7% Terneras nacidas durante 2 meses de madres infectadas 60% 40% Seguimiento hasta 36 meses 20% 2006-2009 0% Total n = 802 Vacas n = 656 Vaquillonas n = 146 Calostrado-Leche en balde-60 días estaca 15-18m=IA, 27-30m: 1ºlactancia Animales infectados (%) Periparto y primer año 100 Consumo Calostro + leche 80 60 40 20 11,5% 10,2% 11,1% 11,1% 11,3% 3 meses 6 meses 9 meses 12 meses 0 1 semana 7/61 6/53 Nuevas Infecciones 7 0 0 0 Inmunidad calostral (%) Ac Virus 87 73 19 0 Ac p24 88 58 23 0 nacim 3meses 6 meses 9meses Correlación título/duración, Spaerman p= -0.77, p= -0.61 Animales infectados (%) Segundo año 100 IA 80 60 40 20 15.09%. 17% 19.23% 21,5% 0 15 meses 18 meses 21 meses 24 meses Nuevas Infecciones 2 1 2 2 Animales infectados (%) Tercer año 100 80 61.76% 60 40 40% 24%. 20 0 27 meses 30 meses 36 meses Edad 27 30 36 Tambo 3 15 (65% BLV) 31 Preñadas 47 35 (28% BLV) 3 NUEVAS INFECCIONES 1 5 7 11% nacen infectados Durante 12 meses no hay progresión de la infección (11%) A los 24 meses la infección se duplica (21%) La entrada al tambo es un punto crítico en la progresión de la infección (60%) 2- Evaluar fuentes de infección natural y puntos de control CARGA PROVIRAL : CANTIDAD DE PROVIRUS EN CELULAS DE SANGRE CIRCULANTE (CC + / CC -) A PCR tiempo real A ALTA >26 + 5% M MEDIA 2626-30 1-5% B BAJA 3030-36 0.050.05-1-% I INDETECTABLE >36 - 0.05% M B I CARGA PROVIRAL SANGRE PVL TOTAL (%) VACAS (n=38) VAQUILLONAS (n=10) A 29.1 26.3 40 M 31.2 34.2 20 B 20.8 21 20 I 18.7 18.4 20 correlacion recuento de blancos/carga proviral 11200 LP 3ºq copias provirus/ug DNA 1400000 1300000 1200000 1100000 1000000 900000 800000 700000 600000 500000 25% cc infectadas 400000 300000 200000 100000 5% cc infectadas 0 1% cc infectadas 0 2500 5000 7500 10000 12500 15000 17500 20000 22500 25000 blancos/ul sangre 22/48 ≤ 5% cc infectadas 19/48 ≤ 1% cc infectadas (39,5%) 27500 30000 32500 35000 37500 CARGA PROVIRAL CALOSTRO PVL TOTAL VACAS (n=38) VAQUILLONAS (n=10) A 0 0 0 M 0 0 0 B 74 75 66 I 26 25 34 50% calostros = nPCR + CARGA PROVIRAL Leche PVL TOTAL A 0 M 0 B 19 I 81 42% LECHES = nPCR + Cual es la razón de la progresión rápida ?? 1- latencia y reactivación periparto 2-transmisión por leche vía ascendente 3- transmisión por contacto Puntos de control temprano Al nacimiento Al año Generar un rodeo de baja carga proviral 1. Segregació Segregación selectiva 2. Vacuna atenuada: fase experimental Vacuna atenuada : ?????? GENES REGULATORIOS GENES ESTRUCTURALES TAX POL LTR REX GAG ENV R3 LTR G4 PROVIRUS PARTICULA VIRAL Gillet et al, 2007, Retrovirology 4:18 CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO 1- clonado provirus salvaje env BLV pol tax/rex R LT 8476 LT R gag Infeccioso en bovinos y ovinos Produce enfermedad en ovinos 0 Plasmido ampR Ori Willems et al, (1992) Virology 189: 775-777 Willems et al (1993) Journal of Virology 67: 4078-4085. CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO 2- modificación provirus salvaje POL LTR GAG ENV TAX REX LTR R3 G4 Proviral load 100 80 60 pBLV DX es infeccioso pero replica con menor eficiencia en ovinos 40 Willems et al, 1994 PNAS 20 *** 0 BLV DX pBLV DX no es patogenico en ovinos Florins et al, 2007, J. Virol. CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO 3- modificación provirus salvaje POL LTR GAG ENV TAX REX LTR R3 G4 env BLV 6073 reduce replicacion viral in vitro Willems et al, 1995, Journal of Virology CONSTRUCCION PROVIRUS MODIFICADO 4- doble mutante LTR GAG POL TAX ENV REXLTR R3 G4 ENV TAX REXLTR pBLVDX pBLV6073 pBLV6073DX 6073 6614 pol 6997 Variante vacunal env HindIII tax/rex gag R LT LT R LTR GAG POL ENV TAX REXLTR R3 /G4 LTR GAG POL 8476 (3000bp) SP 0 6 pSP64 (650bp) (450bp) HindIII R amp Ori pBLV6073DX es una potencial vacuna Ensayo#1 Ensayo controlado a box (2009-INTA) Autorizacion CONABIA y SENASA n=3 (doble mutante )+ cepa salvaje (3) + centinelas (3) - pBLV6073DX es infeccioso en bovinos (3/3) -Baja carga proviral (indetectable 3/3) -Respuesta inmune persistente -No se transmite a centinelas en contacto pBLV6073DX es una potencial vacuna Ensayo#2 Ensayo controlado a campo (2010-2011 INTA) Autorizacion CONABIA y SENASA n=10 (doble mutante) + salvaje (5) +centinelas (35) + infectados naturales (10) - se transmite al ternero? -se transmite a centinelas por contacto? -Genera inmunidad calostral? -Cinètica de carga proviral y expresiòn viral -Protege frente al desafìo natural pBLV6073DX es una potencial vacuna Ensayo#3 Ensayo controlado a campo en condiciones productivas (2012) Autorizacion CONABIA y SENASA n=10 (doble mutante) + + infectados naturales + centinelas SE BUSCAN VOLUNTARIOS Infectar para proteger ? Irene Alvarez Dr. Luis Calvinho Proyecto INTA AESA 203992 Geronimo Gutierrez Dr Mario Poli Proyecto MinCYT PAE Cintia Gonzalez Dr Luc Willems Proyecto CONICET-FNRS DS932 Romina Politzki Luciana Caviglia Cecilia Martinez Mariela Gammella Victoria Tomassini Dra. M. J Dus Santos Gracias [email protected]
