ALTERNATIVAS BIOTECNOLÓGICAS PARA EL USO DE HONGOS ENTOMOPATÓGENOS EN EL CONTROL BIOLÓGICO DE LA BROCA DEL CAFÉ HYPOTHENEMUS HAMPEI (COLEÓPTERA: SCOLYTIDAE) Resumen ejecutivo Este proyecto giró en torno a cuatro metas generales de trabajo, que se llevaron a cabo en tres etapas en las cuales se dividió la investigación: a) aislamiento, evaluación y selección de hongos para el control de la broca del café, usando medios selectivos de M. Anisopliae, Paecilomyces sp, y B. bassiana; b) selección de hongos entomopatógenos con alto poder virulento contra la broca del café, determinando actividad de proteasa, quitinasa y lepasa; c) generación de cepas de hongos potencialmente superiores a las silvestres, mediante la transformación mediada por Agrobacterium tumefacines y esferoplastos; d) determinación de la pureza, viabilidad y patogenicidad de fórmulas comerciales de micoinsecticidas; e) mejoramiento genético de la o las cepas seleccionadas; f) evaluación del bagacillo de caña como matriz de esporulación de hongos entomopatógenos; g) evaluación del efecto del control cultural, temperatura y humedad en la dinámica de infestación de la broca del café; h) diseño de un programa de manejo integrado de la broca del café; i) establecimiento de un laboratorio para la producción rural de micoinsecticidas en el municipio de Cuetzalan del Progreso, Puebla, y j) realización de pruebas piloto de producción de micoinsecticidas. La investigadora evaluó el porcentaje de infestación por broca en la zona de estudio con el fin de establecer el experimento de infección con los diferentes hongos a evaluar, con lo cual logró identificar a la cepa Bb26 como la de mayor eficiencia en términos de control de niveles de infestación y permanencia en campo. Se tiene pensado producir masivamente la cepa en el laboratorio que ya está establecido. Para la selección y evaluación del hongo, aisló los hongos entomopatógenos; evaluó en placa la actividad insecticida de cepas aisladas; identificó las cepas y llevó a cabo bioensayos en laboratorio. El mejoramiento genético de los hongos entomopatógenos consistió en el diseño y síntesis de oligos específicos para las reacciones de PCR y la construcción de vectores de expresión. Demanda o problemática que atiende El uso indiscriminado de insecticidas orgánicos sintéticos ha traído como consecuencia la selección de individuos resistentes, el surgimiento de nuevas plagas y la contaminación ambiental y humana. Esta investigación aplicada responde al imperativo de buscar métodos alternativos para el control de plagas, mediante el uso de enemigos naturales de la broca del café, tales como los hongos entomopatógenos. Resultados obtenidos y/o descripción. Características de la tecnología generada Los resultados obtenidos fueron los siguientes: a) Se cuenta con una colección de hongos entomopatógenos; b) se cuenta con protocolos de metodologías de conservación, mantenimiento, propagación de hongos y métodos para la determinación de la calidad de micoinsecticidas comerciales; c) se tienen diferentes vectores de expresión de una proteasa, los cuales pueden ser empleados para mejorar potencialmente cepas de hongos entomopatógenos, que puedan ser usados no sólo en el control de la broca, sino de plagas de cultivos de importancia económica; d) se estableció un laboratorio para la producción rural de micoinsecticida en el municipio de Cuetzalan del Progreso; e) se cuenta con la cepa Beauveria bassiana, que presenta alta eficiencia para el control de la broca, bajo las condiciones ambientales que prevalecen en la región, y se estima que podría ser producida masivamente y usada en la formulación del micoinsecticida; f) se realizó una propuesta para el manejo integrado de la broca. En cuanto al mejoramiento genético de hongo, las construcciones génicas que se hicieron permitirán contar con cepas que puedan expresar de manera controlada niveles altos de la proteasa, por lo que se espera que éstas serán más eficientes en el control de la broca del café. Otro resultado fue el diseño de un laboratorio y de métodos para la producción rural de micoinsecticidas: en colaboración con la cooperativa TOSEPAN y la Universidad Autónoma Chapingo se realizó el estudio de factibilidad para la construcción del laboratorio, cuya superficie es de 48 m 2, con una capacidad de producción de 2,000 dosis del micoinsecticida. Impactos El conocimiento generado significa un avance del conocimiento científico. Con la producción de dosis de micoinsecticida se beneficiará a 600 productores de café orgánico y a mil productores convencionales, todos ellos miembros de la cooperativa TOSEPAN, cuya membrecía asciende a más de cinco mil socios. Además, al contar con un plan de manejo integrado de la broca, así como con un producto de calidad que sea productivo en la región, impactará en la producción de café y en el sostenimiento de las fuentes de trabajo generadas por tal actividad. Costos estimados de la aplicación de los resultados y/o tecnología generada No se puede establecer un costo relativo a la aplicación de la tecnología generada, pero con el establecimiento del manejo integrado del cultivo de café, y con el funcionamiento del laboratorio, en un futuro cercano por lo menos la cooperativa TOSEPAN conseguirá una producción del 100% de café orgánico, lo que redundará en la mejoría de los ingresos por concepto de ventas. Lo anterior reviste particular importancia para garantizar el suministro de micoinsecticida de buena calidad y al menor precio posible. Ámbito de aplicación Si bien este proyecto fue desarrollado en la sierra norte del estado de Puebla, en el municipio de Cuetzalan del Progreso, el nuevo conocimiento que la investigadora generó referente a hongos patógenos de la broca tiene aplicación en las entidades federativas en donde se cultiva el café, ya sea orgánico o por medios convencionales, especialmente en zonas altas y húmedas. Información adicional o comentario Esta investigación generó nuevo conocimiento sobre hongos patógenos de la broca, ya que la investigadora identificó cepas de géneros no reportados con anterioridad, las cuales presentaron actividad patogénica contra la broca. En la región no se había realizado antes ningún estudio de dinámica de infestación por broca, así que el conocimiento generado contribuyó no sólo al conocimiento del comportamiento poblacional de la plaga en la región, sino también a la capacitación de los productores. Clave del proyecto: SAGARPA 2002-C01-1014 Sistema Producto y/o línea estratégica de atención. Sistema Producto Café. Sanidad vegetal. Investigadora: doctora MARTHA BIBBINS MARTÍNEZ Institución: Centro de Investigación en Biotecnología Aplicada (CIBA-IPN), Unidad Tlaxcala.