Extracción y separación de pigmentos vegetales

1º Grado de Ciencias del Mar
Laboratorio de Biología
PRÁCTICA 4
EXTRACCIÓN Y SEPARACIÓN DE PIGMENTOS VEGETALES
OBJETIVO
El propósito de este trabajo es el de extraer los pigmentos fotosintéticos y separarlos
mediante una técnica compleja de cromatografía.
INTRODUCCIÓN
La fotosíntesis (proceso que permite a los vegetales a adquirir la materia y la energía
que necesitan para desarrollar sus funciones vitales) se lleva a cabo por el aspecto en las
hojas y en los tallos jóvenes de pigmentos, capaces de captar la energía lumínica.
Entre los distintos métodos que existen para separar y adquirir esos pigmentos se
encuentra el de la cromatografía; una técnica que accede a la separación de las
sustancias de una mezcla, teniendo una afinidad diferente por el disolvente en el que se
encuentran; al introducir una tira de papel en esa mezcla, el disolvente arrastra con
distinta velocidad a los pigmentos según la solubilidad que tengan y los separa,
permitiendo identificarlos perfectamente según su color.
Los cloroplastos poseen una mezcla de pigmentos con diferentes tonalidades: clorofila
A (verde intenso), clorofila B (verde claro), caroteno (naranja) y xantofila (amarillo).
MATERIAL
- Mortero completo
- Gradilla
- Tubos de ensayo
- Tubos de recogida
- Embudo de cristal
- Alcohol 96º
- Agua destilada
- Benceno o tolueno (o gasolina)
- Papel de filtro
- Hojas verdes (geranio, espinaca...)
TÉCNICA DE PREPARACIÓN
1. Picar trozos pequeños de hojas limpias en el mortero (triturar sin golpear).
2. Añadir poco a poco alcohol y machacar hasta alcanzar un extracto de color verde más
o menos intenso, con una cantidad casi a llenar el mortero.
3. Preparar un tubo de ensayo con un embudo dentro y poner sobre la gradilla.
4. Colocar dentro del embudo un trozo cuadrado de papel de filtro ajustándolo al
embudo (doblándolo cuanto sea necesario)
5. Verter el extracto de alcohol sobre el embudo para filtrar y eliminar los restos de
hojas. Llenar ¼ o más del tubo. Si es mucha cantidad verter en otro tubo y dejar
filtrando para guardar extracto sobrante.
6. Derramar tolueno en otro tubo midiendo más o menos ¼ de tubo o menos.
7. Verter ahora el tolueno, despacito y resbalando la pared, en el tubo con extracto de
alcohol (no llenarlo porque aún hay que añadir producto).
8. Preparar un trozo de papel de secar para tapar el tubo con tu dedo gordo.
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9. Voltear varias veces el tubo disolviendo ambos productos (no agitar) hasta conseguir
una mezcla homogénea.
10. Añadir ¼ de tubo de agua destilada, resbalando la pared de tubo y observar.
11. Si no se obtiene una separación, girar despacio nuevamente el tubo.
12. Analizar lo observado y explicar el resultado.
12. Percibir el papel filtrado e interpretarlo.
ANÁLISIS DE LOS RESULTADOS
El resultado de esta práctica es obtener dos bandas de pigmentos en el tubo de ensayo.
Una verde (arriba) y una amarilla (debajo) por la diferente solubilidad de los pigmentos
en los productos, y la diferente solubilidad y densidad de los tres productos.
o En el tubo de ensayo, con las sustancias ya mezcladas y reposadas en la
gradilla durante unos minutos, se contemplará una separación de colores. Empezando
desde arriba, nos encontraremos con la clorofila y el tolueno de color verde. En segundo
lugar, en medio, la xantofila y el alcohol con un aspecto amarillento. Y por último, en la
base del tubo, hallaremos el agua emulsionada de color blanco.
Posteriormente, se observará las capas de pigmento sobre el papel de filtro, nombrando
los colores.
o En el papel del filtro, lo que se advierte son diferentes capas de pigmento.
Desde fuera hacia dentro, distinguiremos el color anaranjado del caroteno, el amarillo
de la xantofila y los verdes de la clorofila A y B (en este último, depende del ensayo de
cada uno. A ciertas personas le aparecerán el verde intenso antes y a otros el verde
claro).
Esta técnica de separación se basa en la diferente solubilidad de los pigmentos en el
alcohol. En primer lugar, al romper las células en el mortero, los pigmentos que se
hallaban encerrados en los cloroplastos dentro de ellas pasan al alcohol. En numerosas
ocasiones, uno de los pigmentos es más abundante, ocultando al resto. La separación se
produce en la hoja de papel de filtro, ya que el pigmento más soluble en el alcohol será
el que forme una banda coloreada en la parte superior del papel y el menos soluble en
alcohol será el último en ascender a través del papel.