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XVI Cursos de Otoño de la Universidad de Cádiz en Jerez
“Innovación en la Industria Agroalimentaria Andaluza”
Jerez de la Frontera, 20 Septiembre 2011
Aceite de Oliva y Salud
Mª Raquel Mateos Briz
Científico Titular (CSIC)
Instituto de Ciencia y Tecnología de Alimentos y Nutrición (ICTAN)
C/ José Antonio Novais, 10, 28040 Madrid.
[email protected]
Aceite de Oliva, producto milenario y mediterráneo
DIETA MEDITERRÁNEA
Sabio conjunto de alimentos, reunidos durante siglos, que ofrecen
beneficios para la salud.
Aceite de Oliva, eje de la dieta mediterránea
Efecto de los factores agronómicos y tecnológicos sobre la
CALIDAD y la COMPOSICIÓN del aceite
Efecto de los factores agronómicos y tecnológicos sobre la
CALIDAD y la COMPOSICIÓN del aceite
Efecto de los factores agronómicos y tecnológicos sobre la
CALIDAD y la COMPOSICIÓN del aceite
Efecto de los factores agronómicos y tecnológicos sobre la
CALIDAD y la COMPOSICIÓN del aceite
TIPOS DE ACEITE DE OLIVA
TIPOS DE ACEITE DE OLIVA: COMERCIALIZACIÓN
Aceite
Aceite de
de Oliva
Oliva
VIRGEN
VIRGEN EXTRA
EXTRA
(Acidez
(Acidez hasta
hasta 0.8º)
0.8º)
Aceite
Aceite de
de Oliva
Oliva
VIRGEN
VIRGEN
(Acidez
(Acidez hasta
hasta 2º)
2º)
Aceite
Aceite de
de Oliva
Oliva
(hasta
(hasta 1º)
1º)
Aceite
Aceite de
de Orujo
Orujo
(hasta
(hasta 1º)
1º)
REGLAMENTO (CEE) Nº 2568/91 de la comisión de 11 de julio de 1991
Relativo a las características de los aceites de oliva y de los aceites de orujo de
oliva y sobre sus métodos de análisis (DO L 248 de 5.9.1991, p.1)
¡ Consume Aceite de Oliva Virgen Extra!
COMPOSICIÓN DEL ACEITE DE OLIVA
FDA: FOOD AND DRUG ADMINISTRATION
http://www.fda.gov/
¿Qué hace la FDA?
La FDA es responsable de:
1. Proteger la salud pública mediante la regulación de los
medicamentos de uso humano y veterinario, vacunas y otros
productos biológicos, dispositivos médicos, el abastecimiento
de alimentos en nuestro país, los cosméticos, los suplementos
dietéticos y los productos que emiten radiaciones.
2. Favorecer la salud pública mediante el fomento de las
innovaciones de productos.
3. Proveer al público la información necesaria, exacta, con base
científica, que le permita utilizar medicamentos y alimentos
para mejorar su salud.
Una grasa mayoritariamente MONOINSATURADA
GRASAS VEGETALES RICAS EN ÁCIDO OLEICO
Olivo
Olivo
Colza
Colza
Girasol
Girasol
Soja
Soja
EL reto de la investigación actual: Los beneficios del aceite de
oliva van más allá de la grasa
Nivel de evidencia
Tipo de efecto
Demostrado mediante
numerosos estudios de
intervención en diferentes
poblaciones sana y de
riesgo
1. Mejora el perfil lipídico: ↓ LDL y ↑ HDL/Col.
2. Reduce oxidación de LDL.
3. Promociona un ambiente menos protrombótico: reduce agregación plaquetaria y
producción tromboxanos B2, entre otros.
4. Mejora de la respuesta vasodilatadora dependiente del endotelio.
NO SOLO AYUDA A CONTROLAR
5. Reduce la presión arterial.
6. Mejora el metabolismo de glucosa en la diabetes.
7. Amortiguación de la inflamación inducida por la ingestión de dietas ricas en grasas
saturadas.
LOS NIVELES DE COLESTEROL
Estudios epidemiológicos
1. Menor incidencia de algunos tipos de cáncer; modesta asociación de MUFA con un
menor riesgo de cáncer de mama mientras que el riesgo aumenta con dietas SFA.
Todavía pocos estudios de
intervención o
experimentos in vitro
1. Reducción en el deterioro cognitivo relacionado con la edad y la enfermedad de
Alzheimer de una mayor adhesión.
2. Favorables efectos en la prevención de la obesidad.
¿Tiene algún valor añadido a su grasa el aceite de
oliva virgen y virgen extra?
Asegura el aporte de monoinsaturados
…. y …..
COMPONENTES MINORITARIOS biológicamente activos
COMPONENTES MINORITARIOS DEL ACEITE DE OLIVA
Compuestos
Cantidad o proporción
Escualeno
300 - 700mg/100g
Carotenos
0.5 - 10mg/kg (expresado como bcaroteno)
Clorofilas
0 – 9.7mg/kg
Tocoferoles
7 – 30 mg/100g
α-tocoferol
> 93 %
β y γ-tocoferol
< 10 %
δ-tocoferol
< 1.5 %
Esteroles
80 – 240 mg/100g
Campesterol
2.0 – 3.0 %
Estigmasterol
1.0 – 2.0 %
γ-sitosterol + ∆5 avenasterol
95.0 – 97.0 %
Fenoles
100 – 350 mg/kg (expresado como
ácido cafeico)
Otros: Alcoholes, cetonas, éteres, ésteres y derivados furánicos.
COMPONENTES MINORITARIOS: COMPUESTOS FENÓLICOS
Propiedades organolépticas del aceite
(amargo y picante).
Estabilidad oxidativa al aceite de oliva.
Propiedades saludables.
COMPONENTES MINORITARIOS: COMPUESTOS FENÓLICOS
Variedad de la aceituna.
Grado de maduración.
Procedimiento de obtención del aceite.
COMPUESTOS FENÓLICOS: ESTRUCTURAS QUÍMICAS
COMPUESTOS FENÓLICOS DE LA ACEITUNA
R
O
HO
O
COOMe
Oleuropeína (R = OH)
Ligustrósido (R = H)
O
OGlu
COMPUESTOS FENÓLICOS DEL ACEITE DE OLIVA VIRGEN EXTRA
DERIVADOS SECOIRIDOIDEOS
R
HO
DAOD (R = OH)
DALD (R = H)
R
O
O
HO
O
O
O
OHC
O
COOMe
O
AAO (R = OH)
AAL (R = H)
COMPUESTOS FENÓLICOS: ESTRUCTURAS QUÍMICAS
DERIVADOS
DERIVADOS SECOIRIDOIDEOS
SECOIRIDOIDEOS
R
R
O
HO
O
O
HO
O
DAOD (R = OH)
DALD (R = H)
O
COOMe
O
OHC
AAO (R = OH)
AAL (R = H)
O
FENOLES
FENOLES SIMPLES
SIMPLES
MeO
R2
COOH
MeO
R1
HO
HO
HO
COOH
Ácido ferúlico
COOH
COOH
Ácido vainíllico
HO
Ácido cinámico
Ácido p-coumárico
LIGNANOS
LIGNANOS
LIGNANOS
FLAVONAS
FLAVONAS
OMe
R
HO
OH
O
HO
R
O
O
OH
Pinorresinol
R=H
1-acetoxipinorresinol
OMe
R = OCOCH3
OH
O
Luteolina
Apigenina
R = OH
R=H
COMPUESTOS FENÓLICOS: INGESTA MEDIA DIARIA
Ingesta diaria 25mL AOVE (350 ppm)
9mg/día C.Fenólicos
8 mg Derivados Secoiridoideos
R
R
O
HO
DAOD (R = OH)
DALD (R = H)
O
O
HO
O
O
OHC
O
COOMe
O
AAO (R = OH)
AAL (R = H)
1 mg Hidroxitirosol + Tirosol (y derivados acetilados)
R2
HO
100-350 ppm CF de AOVE
0-5 ppm CF de A.OLIVA
R1
HTy
Ty
Ac-HTy
Ac-Ty
R1 = OH; R2 = OH
R1 = OH; R2 = H
R1 = OCOCH3; R2 = OH
R1= OCOCH3; R2 = H
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
Biodisponibilidad.
Cantidad que se absorbe y alcanza la
circulación sistémica, momento en
el cual se distribuye por los tejidos y
alcanza lugares donde puede ejercer
sus propiedades beneficiosas.
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
La actividad biológica in vivo:
1. Estabilidad digestiva.
2. Extensión de la absorción.
3. Metabolismo.
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
Estudios de intervención con humanos:
a) Se absorben de manera dosis
dependiente ([Cmax] = 1-2h).
b) Extensiva metabolización
(90%).
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
1. Modelo de digestión gastrointestinal in vitro
2. Biodisponibilidad intestinal (Caco-2)
3. Biodisponibilidad hepática (HepG2)
Hidroxitirosol
(HTy)
Acetato de Hidroxitirosilo
(Ac-HTy)
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
Modelo de digestión gastrointestinal in vitro:
Estima la cantidad de estos fenoles disponibles para la
posterior absorción intestinal.
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
Modelo de digestión gastrointestinal in vitro:
Compuestos fenólicos a evaluar
Digestión con pepsina
pH 2.0, 37ºC, 2 h
Evaluación de la estabilidad
gástrica e intestinal mediante
HPLC-DAD.
Digestión con pancreatina
pH 7.5, 37ºC, 2 h
sales biliares
ESTABILIDAD GASTROINTESTINAL IN VITRO
Cuantitativamente:
Compuesto
Digestión gástrica
% Pérdida
Digestión gástrica
% Pérdida
% Pérdida Global
HTy
0,1
20,2
20,3
Ac-HTy
3,4
22,3
25,7
Cualitativamente:
HO
R
O
Hidrólisis
HO
OH
O
HO
HO
Ésteres de HTy
Hidroxitirosol
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
Transporte y metabolismo intestinal:
Células Caco-2
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
Transporte y metabolismo intestinal:
AP → BL
(Papp, x 10-6 cm/s)
BL → AP
(Papp, x 10-6 cm/s)
Efflux Ratio
(AP : BL)
HTy
16,2 ± 4,2
14,6 ± 1,3
1,1 ± 0,2 a
Ac-HTy
33,6 ± 1,9
21,1 ± 2,3
1,6 ± 0,2 b
Compuesto
Apical → Basolateral
Basolateral → Apical
Se absorben en relación directa a la naturaleza lipofílica
del compuesto.
> 50% compuestos absorbidos….
permanecen sin metabolizar.
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
Transporte y metabolismo intestinal:
COMP. FENÓLICOS: METABOLISMO Y BIODISPONIBILIDAD
Biodisponibilidad hepática
Células HepG2
1 – HTy
2 – Ty
3 – Ac-HTy
HTy y Ac-HTy se absorben y metabolizan extensivamente por
células HepG2.
COMP. FENÓLICOS: ACTIVIDAD BIOLÓGICA
Más que un antioxidante.
El 70% de la población mundial fallece
por enfermedades cardiovasculares y
cancerígenas.
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
ETIOLOGÍA DE LA ECV: ATEROSCLEROSIS
Progresión de la placa de ateroma (sección transversal)
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
Aterosclerosis: un proceso inflamatorio
•Moléculas de adhesión celular
VCAM-1; PCAM-1
ICAM-E; P-selectina
E-selectina.
•Proteínas quimiotácticas
MCP-1
•Factores de crecimiento
M-CSF
Adhesión
Migración
Endotelio
•Citoquinas proinflamatorias
IL-6; IL-8; IL-1b; IFNγ; TNFα
Monocitos
LDL
Activación
Acumulación
colesterol
Diferenciación
Inflamación
tejido dañado
LDLox
Disponibilidad
Retención
Modificación
Macrófago
Modificación
Citoquinas inflamatorias,
radicales
COMP. FENÓLICOS: ACTIVIDAD BIOLÓGICA
Biomarcador
Una característica que se puede medir y evaluar
objetivamente como indicador de procesos biológicos
normales o patogénicos, o de respuestas
farmacológicas a una intervención terapéutica.
(Food and Drug Administration, www.fda.gov)
Una característica bioquímica que puede utilizarse para
medir el progreso de una enfermedad o los efectos de
un tratamiento.
(Webster’s Medical Dictionary)
COMP. FENÓLICOS: ACTIVIDAD BIOLÓGICA
Biomarcador de estrés oxidativo
Una molécula cuya estructura ha sido modificada por la
acción de las especies reactivas de oxígeno.
(Oxford et al., 2000)
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
Biomarcadores:
a) Perfil lipídico: HDLc, LDLc, Colesterol.
b) Marcadores de estrés oxidativo:
a) Lípidos: LDLox (clave en la función cardiovascular)
b) Otros
c) Marcadores de inflamación.
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
Condiciones
Seguimiento
30 ♂ sanos
3 semanas
2 w lavado
12 ♂ sanos
4 días
10 días lavado
200 sujetos sanos
3 semanas
2 w lavado
30 sujetos sanos
3 semanas
2 w lavado
36 sujetos sanos
3 semanas
2 w lavado
Dieta Intervención
AOV (0 mg/Kg CF)
vs
AOV (68 mg/Kg CF)
vs
AOV (150 mg/Kg CF)
AOV (10 mg/Kg CF)
vs
AOV (133 mg/Kg CF)
vs
AOV (486 mg/Kg CF)
AOV (2,7 mg/Kg CF)
vs
AOV (164 mg/Kg CF)
vs
AOV (366 mg/Kg CF)
AOV (0 mg/Kg CF)
vs
AOV (370 mg/Kg CF)
vs
AOV (825 mg/Kg CF)
AOR sin CF
vs
AOV (629 mg/Kg CF)
Resultados grupo AOV
Referencia
LDLoxd
LDLc; HDL
Marrugat et al., 2004
LDLc; HDL
MDA orina
8-OHdG orina y linfocitos
activ. Gpox.
Weinbrenner et al., 2004
HDL, TAG, Col
LDLox
Biomarcad estrés
Covas et al., 2006
LDLox
HDL
Gimeno et al., 2007
LDLox y dienos
conjugados
De la Torre-Carbot et al.,
2010
The effect of polyphenols in olive oil on heart disease risk factors.
A randomized trial.
Covas et al. Ann. Intern. Med. 2006; 145:333-341.
Estudio EUROLIVE, multicéntrico europeo: 200 voluntarios sanos.
25mL de aceite de oliva/día: a) 2,7 mg/Kg
b) 164 mg/Kg
c) 366 mg/Kg.
Intervención
Tratamiento
Tratamiento
2 sem
8 semanas
2 sem
8 semanas
Tratamiento
2 sem
8 semanas
Bajo CF
Alto CF
Medio CF
Medio CF
Bajo CF
Alto CF
Alto CF
Medio CF
Bajo CF
Covas et al. Ann. Intern. Med. 2006; 145:333-341.
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
Condiciones
Seguimiento
Dieta Intervención
Resultados grupo AOV
Referencia
Voluntarios de alto riesgo cardiovascular
24 ♂ enferm periferica
vascular
12 semanas
40 ♂ con enfermedad
coronaria estable
3 semanas
2 semanas lavado
22 hiperlipidémicos
7 semanas
4 semanas lavado
21 hipercolesterolémicos
1 dosis aguda
AOV (60mg/Kg CF)
vs
AOV (800 mg/Kg CF)
AOR (15mg/Kg CF)
vs
AOV (161 mg/Kg CF)
LDLox
Activ antiox plasma
Ramírez-Tortosa et al.,
1999
LDLox; LPO
GSH-Px
P sistólica
Fito et al., 2005
AOR (2mg/Kg CF)
vs
AOV (166 mg/Kg CF)
AOV (80mg/Kg CF)
vs
AOV (400 mg/Kg CF)
Activ antiox plasma
TXB2;
Visioli et al., 2005
LPO y F2 isoprostanos
Ruano et al., 2005
Los fenoles del AOV mejora el perfil lipídico y el estatus
antioxidante de los voluntarios.
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
INFLAMACIÓN
a) Inhibición de la ruta del ácido araquidónico:
PLA2
PG
AA
Formación trombo
Tx
5-,12-LOX
LT
COX-1/2
Eicosanoides
PG
Tx
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
INFLAMACIÓN
Condiciones
Seguimiento
14 mujeres obesas
post-menopáusica
4 semanas
22 hiperlipidémicos
7 semanas
4 semanas lavado
12 ♂ sanos
1 dosis aguda
Dieta Intervención
AG alto oleico (25mg/Kg CF)
vs
AOV (108 mg/Kg CF)
AOR (2mg/Kg CF)
vs
AOV (166 mg/Kg CF)
Aceite de maíz sin CF
vs
AOV (16 mg/Kg CF)
vs
AOV (607 mg/Kg CF)
Resultados grupo AOV
Referencia
TXB2 y LPO en plasma
tras la ingesta de AOV.
Oubiña et al., 2001
Activ antiox plasma
TXB2.
Visioli et al., 2005
TXB2
Activ antiox plasma.
Bogani et al., 2007
Los fenoles del AOV disminuye significativamente el nivel de
tromboxano B2.
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
INFLAMACIÓN
b) Modulación del sistema de citoquinas/quimioquinas
Pro-inflamatorios
Anti-inflamatorios
IL-1β; TNFα; IL-6
IL-10; IL-4; TGFβ
IL-8; IFNγ
Anti-inflammatory effects of virgin olive oil in stable coronary
disease patients: a randomized, crossover, controlled trial.
Fito et al. Eur J. Clin. Nutr. 2008; 62:570-574.
Intervención
Tratamiento
28 voluntarios con
enfermedad
coronaria estable
2 sem
3 semanas
Tratamiento
2 sem
3 semanas
AOR (0,62 mg CF)
AOV (6,53 mg CF)
AOV (6,53 mg CF)
AOR (0,62 mg CF)
CF del aceite de oliva mejoraron significativamente los niveles de
citoquinas pro-inflamatorias (IL-6) y PCR aunque no mostraron
cambios en las moléculas de adhesión (sVCAM-1 y sICAM-1).
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
INFLAMACIÓN
c) Efecto en las moléculas de adhesión
VCAM-1
PCAM-1
ICAM-E
P-selectina
E-selectina
Anti-inflammatory effects of virgin olive oil in stable coronary
disease patients: a randomized, crossover, controlled trial.
Fito et al. Eur J. Clin. Nutr. 2008; 62:570-574.
Los CF del aceite de oliva no mostraron cambios en sVCAM-1 y sICAM-1.
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
Minor compounds of olive oil have postprandial anti-inflammatory
effects.
Pacheco et al. Br. J. Nutr. 2007; 98:260-263.
Estudio postprandial
14 voluntarios sanos y 14 hipertriacilglicerolémicos.
Macarrones con: a) AOR (0 mg/Kg CF)
b) AOV (1125 mg/Kg CF)
1 día
1 día
Ayuno 1h
2h
3h
4h
5h
6h
7h
8h
Ayuno 1h
2h
3h
4h
5h
6h
7h
8h
2 sem
AOR
AOV
AOV
AOR
La ingesta de AOV rico en CF provocó una disminución
postprandial de s-ICAM-1 y s-VCAM-1.
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
In vitro nutrigenomic effects of virgin olive oil polyphenols within
the frame of the Mediterranean diet: a randomized controlled trial.
Konstantinidou et al. FASEB J. 2010; 24:2546-2557.
90 voluntarios sanos.
3 tipos de dieta: a) Dieta Mediterránea (DM) + AOV (328mg/Kg CF)
b) Dieta Mediterránea (DM) + AOV (55mg/Kg CF)
c) Dieta habitual
Intervención
Tratamiento
2 sem
12 semanas
Tratamiento
2 sem
12 semanas
Tratamiento
2 sem
12 semanas
DM + AOV high
Dieta habitual
DM + AOV low
DM + AOV low
DM + AOV high
Dieta habitual
Dieta habitual
DM + AOV low
DM + AOV high
COMPUESTOS FENÓLICOS: SALUD CARDIOVASCULAR
In vitro nutrigenomic effects of virgin olive oil polyphenols within
the frame of the Mediterranean diet: a randomized controlled trial.
Konstantinidou et al. FASEB J. 2010; 24:2546-2557.
Especialmente con la Dieta Mediterránea y AOV rico en CF:
a) Mejora el estado antioxidante del plasma.
b) Disminuye el estado inflamatorio del individuo.
c) Modula la expresión de genes implicados en la inflamación
(IFNγ, ARHGAP15 y IL7R) y estrés oxidativo (ADRB2 y POLK).
Los efectos de los fenoles del AOV sobre el riesgo cardiovascular
se podrían deber a cambios en la expresión de genes
proaterogénicos.
HIDROXITIROSOL
Reciente Declaración Nutricional
HO
El consumo diario de 5mg de HTy y sus derivados,
OH
tomados como parte del aceite de olivaHO
virgen en la
Hidroxitirosol
dieta, puede proteger a las LDL del estrés oxidativo
(HTy)
manteniendo la concentración de HDL y colesterol
en sangre, la presión arterial y aportando
componentes con propiedades antiinflamatorias.
(EFSA, 2011, EC Nº 1924/2006)
COMPUESTOS FENÓLICOS: CÁNCER
Condiciones
Seguimiento
10 ♀ menopausicas
8 semanas
2 sem lavado
182 ♂ sanos
3 semanas
2 w lavado
Dieta Intervención
AOV (147mg/Kg CF)
vs
AOV (592 mg/Kg CF)
AOV (2,7 mg/Kg CF)
vs
AOV (164 mg/Kg CF)
vs
AOV (366 mg/Kg CF)
Resultados grupo AOV
Referencia
Daño DNA en linfocitos
tras la ingesta del AOV
rico en CF.
Salvini et al., 2006
13% Daño DNA
(8OHdG, 8OHG),
independientemente el
contenido fenólico.
Machowetz et al., 2007
Los resultados obtenidos hasta la fecha no muestran resultados
concluyentes sobre los efectos de los CF del AOV en los
procesos cancerígenos.
COMPUESTOS FENÓLICOS: ESTUDIOS IN VITRO
(Beauchamp et al.)
•
•
•
•
0.9 mg/día Oleocantal
Biodisponib. y Biotransformación
Presencia de otros CF en el AOV
Influencia de la matriz lipidica
Ingesta diaria 9mg de oleocantal
50g aceite (200ppm oleocantal)
Actividad Antioxidante del hidroxitirosol y su
derivado el acetato de hidroxitirosilo en células de
hepatoma humano
El Hígado es el principal órgano implicado
en el metabolismo de xenobióticos.
Susceptible a cualquier exceso que genere
un daño oxidativo.
Evaluación del efecto protector del Ac-HTy en comparación
con el HTy frente al daño oxidativo inducido en células
de hepatocarcinoma humano (HepG2)
Células HepG2
Viabilidad celular:
• Método Cristal Violeta
Marcadores de estatus oxidativo celular:
• Nivel intracelular de glutation reducido (GSH)
• Especies reactivas de oxígeno (ROS)
• Actividad de enzimas antioxidantes (GPx y GR)
• Biomarcador de peroxidación lipídica (MDA)
Modelo celular de estrés oxidativo:
Tratamiento celular con 400 µM t-BOOH 3h.
Alía et al., J. Biochem. Mol. Toxicol. 19, 119-128, 2005.
Efecto Protector del hidroxitirosol y acetato de
hidroxitirosilo en células HepG2:
0.5-10 µM HTy, Ac-HTy
2 y 20h
400 µM t-BOOH
3h
Determinación parámetros
tomando 2 referencias:
• Control
• t-BOOH
Viabilidad Celular – Cristal Violeta
Evaluación del número de células vivas.
• Células HepG2
• Concentraciones: 0.5, 1, 5 y 10 µM
• Tiempo Incubación: 2, 20h
• t-BOOH: 400 µM durante 3h
Viabilidad Celular – Cristal Violeta
Especies Reactivas de Oxígeno (ROS)
Método basado en la medida de la fluorescencia que emite la sonda DCF,
resultante de la oxidación de DCFH por los oxidantes intracelulares.
t-BOOH
Células
control
• Células HepG2
• Concentraciones: 0.5, 1, 5 y 10 µM
• Tiempo Incubación: 2, 20h
• t-BOOH: 400 µM durante 3h
Especies Reactivas de Oxígeno (ROS)
2h
20h
Glutation Intracelular Reducido (GSH)
Método basado en la medida de la fluorescencia que emite la
concentración intracelular del glutation reducido.
• Células HepG2
• Concentraciones: 0.5, 1, 5 y 10 µM
• Tiempo Incubación: 2, 20h
• t-BOOH: 400 µM durante 3h
Glutation Intracelular Reducido (GSH)
Malondialdehído (MDA)
Método basado en la medida de un derivado hidrazona del
MDA mediante HPLC-DAD.
• Células HepG2
• Concentraciones: 0.5, 1, 5 y 10 µM
• Tiempo Incubación: 2, 20h
• t-BOOH: 400 µM durante 3h
Malondialdehído (MDA)
Enzimas antioxidantes (GPx y GR)
2 GSH + ROOH
GSSG + NADPH +
GPx
H+
GSSG + ROH + H2O
GR
2GSH + NADP+
• Células HepG2
• Concentraciones: 0.5, 1, 5 y 10 µM
• Tiempo Incubación: 2, 20h
• t-BOOH: 400 µM durante 3h
Enzimas antioxidantes (GPx)
Enzimas antioxidantes (GR)
Conclusiones
El pretratamiento de las células HepG2 durante 2h o 20h con
0.5-10 µM de HTy y Ac-HTy reduce parcialmente la
citotoxicidad provocada por t-BOOH.
Además, previenen completamente el daño celular inducido
por t-BOOH tras 20h de incubación, especialmente a las
concentraciones más altas, mientras que a 2h el daño
oxidativo es contrarrestado parcialmente.
En resumen estos resultados demuestran un efecto protector
del Ac-HTy similar, e incluso ligeramente superior, al
descrito para el HTy frente a situaciones de estrés
oxidativo.
COMPUESTOS FENÓLICOS
Absorción
Lumen
C. Fenólicos
Antioxidante
Anticancerígeno
Anticardiovascular
[email protected]
‘Que el alimento sea
tu mejor medicina, y
tu mejor medicina sea
tu alimento’
Hipócrates
XVI Cursos de Otoño de la Universidad de Cádiz en Jerez
“Innovación en la Industria Agroalimentaria Andaluza”
Jerez de la Frontera, 20 Septiembre 2011
Aceite de Oliva y Salud
Mª Raquel Mateos Briz
Científico Titular (CSIC)
Instituto de Ciencia y Tecnología de Alimentos y Nutrición (ICTAN)
C/ José Antonio Novais, 10, 28040 Madrid.
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