Monografia Kalanchoe pinnata
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Hierba de bruja Kalanchoe pinnata ELABORADO POR: Leidy Barajas Villamizar* Nancy Herreño Mosquera* Antonio Luis Mejía Piñeros* Paola Borrego Muñoz* Luis Miguel Pombo Ospina* * Investigadores del Departamento de Ciencias Básicas Fundación Universitaria Juan N. Corpas Escuela de Medicina Bogotá, D.C., Septiembre de 2014 TABLA DE CONTENIDO Pág 1. Denominación, sinónimos y equivalencia 1 2. Descripción botánica 1 3. Distribución geográfica 2 4. Datos agrotecnológicos 2 5. Usos tradicionales 2 6. Descripción macroscópica de la droga 4 7. Descripción microscópica de la droga 4 8. Composición química 9 9. Control de calidad 10 10. Datos farmacológicos y clínicos 14 11. Indicación sugerida 24 12. Actividad antimicrobiana 24 13. Estudios toxicológicos 27 14. Referencias bibliográficas 28 Hierba bruja 1. Denominación, sinónimos y equivalencia Definición: hojas deshidratadas de Kalanchoe pinnata (Lam.) Persoon (Crassulaceae). Sinónimos: Cotyledon pinnata Lam., Bryophyllum calycinum Salisb., Bryophyllum germinans P.Fr.M. Blanco., Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken., Bryophyllum pinnatum (Lam.) Kurz, Cotyledon calycina A.G. Roth., Cotyledon calyculata Solander., Cotyledon rhizophilla Roxb., Crassuvia floripendia Comm. ex Lam., Crassuvia floripendia Comm., Kalanchoe pinnata var. floripendula Pers., Sedum madagascariense Clus., Verea pinnata (Lam.) Spreng1. Nombres comunes: hierba bruja, hierba de bruja, colombiana, prodigiosa, inmortal, flor de aire, hierba de aire y hoja bruja. Clasificación taxonómica: Clase: Equisetopsida C. Agardh Subclase: Magnoliidae Novák ex Takht. Superorden: Myrothamnanae Takht. Orden: Saxifragales Bercht. & J. Presl. Familia: Crassulaceae J. St.-Hil. Género: Kalanchoe Adans. Especie: Kalanchoe pinnata (Lam.) Persoon2. Colección de los ejemplares botánicos Sitio de colección: Fundación Universitaria Juan N. Corpas, Jardín Medicinal. Alt. 2554m., Bogotá, Colombia. Referencia geográfica: 4°, 45,722´N 74° 5,644’ O. No. voucher: 27768 Herbario de la Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, Colombia. 2. Descripción botánica La Kalanchoe pinnata (Lam.) Persoon es una planta suculenta perenne, que crece de 3 a 5 pies de altura. Es comúnmente conocida como "planta del aire", porque tiene altos tallos huecos y hojas carnosas de color verde oscuro que son claramente onduladas y adornadas en rojo; sus flores están agrupadas en panículas terminales; la corola es campanulada y rojiza, con cuatro lóbulos, con estambres en dos series de cuatro semillas numerosas3. Los nombres botánicos actuales y validados por el Código Internacional de Nomenclatura Botánica son: Bryophyllum pinnatum (Lam.) Oken, Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. Sin: Cotyledon pinnata Lam., Bryophyllum calycinum Salisb., Bryophyllum pinnatum (Lam.) Kurz, Crassula pinnata L. f4. Figura No. 1. Vista general de la especie vegetal. 3. Distribución geográfica La Kalanchoe pinnata (Lam.) Persoon = Bryophyllum pinnatum (Lamarck) S. Kurz, es una planta nativa de África tropical y Madagascar, según Germosén-Robineau5, introducida y naturalizada en los trópicos americanos donde es muy común, tanto cultivada, como escapada de otros cultivos. Está presente en Colombia, Ecuador, Panamá y Venezuela6. 4. Datos agrotecnológicos No se encuentra información documentada. 5. Uso tradicional En Suramérica se prepara una bebida para la bronquitis, los resfríos, la tos y el sarampión, a partir de las hojas. También se sabe que cocidas en poca agua y aplicadas en forma de cataplasma tratan la erisipela y demás inflamaciones de la piel. Se prepara un té con la miel de las flores para todos los tipos de tos y la bronquitis. Las hojas frescas puestas sobre la frente se indican para curar dolores de cabeza y jaquecas, y una vez aplicadas, producen sudor y alivio. Aplastadas y cocidas en poca agua, se vuelven emolientes, hemostáticas, vulnerarias y curan dolencias de la piel como forúnculos y úlceras. En infusión sirven como diurético y se prepara un jarabe que alivia las enfermedades de las vías respiratorias. Esta especie se usa como resolutiva de abscesos y como antiinflamatoria cuando sus hojas son calentadas al fuego y aplicadas directamente en la parte enferma 6. La Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers., es considerada como una panacea por los pobladores del Amazonas quienes la emplean con diferentes propósitos. Los Creoles utilizan las hojas ligeramente tostadas contra el cáncer y las inflamaciones, y en infusión como un remedio popular para aliviar la fiebre. Los Palikur mezclan su jugo con aceite de coco y aceite de Andiroba, luego la esparcen sobre la frente para curar la migraña y el dolor de cabeza. Los indígenas Siona la conocen como la “medicina de los forúnculos”, calientan las hojas y las aplican tópicamente sobre los forúnculos y úlceras de la piel. A lo largo del río Pastaza en Ecuador, los nativos utilizan una infusión de hoja para huesos rotos y contusiones internas. En Perú, tribus indígenas mezclan la hoja con aguardiente (ron de caña de azúcar) y aplican la mezcla a las sienes para el dolor de cabeza; sumergen las hojas y tallos durante la noche en agua fría y luego la beben para la acidez estomacal, la uretritis y las fiebres. La raíz también es preparada como infusión y es utilizada para la epilepsia. Otras tribus en el Amazonas exprimen el zumo de hojas frescas y la mezclan con la leche de las madres lactantes. A lo largo de Suramérica, la Kalanchoe pinnata ha tenido una larga historia sobre su uso. Comúnmente se denomina “hoja de milagro” y “hoja de vida” por sus propiedades curativas notables. En Brasil la planta se considera como sedante, vulneraria, diurética, antiinflamatoria y antitusiva. Se utiliza para todo tipo de condiciones respiratorias relacionadas con el asma y la tos y la bronquitis. También es empleada para los cálculos renales, las úlceras gástricas, los trastornos de la piel y el edema de las piernas. Externamente, la infusión de las hojas o el zumo de éstas se utilizan para los dolores de cabeza, de muela y de oído, en las infecciones de los ojos, las heridas, las úlceras, los forúnculos, las quemaduras y las picaduras de insectos. En Perú la planta es empleada para los mismos usos. En México y Nicaragua, la Kalanchoe pinnata es utilizada con fines similares y también para promover la menstruación y asistir el parto7. De Wet, et al8, encontraron que las hojas mezcladas con Opuntia stricta y Euphorbia hypericifolia se emplean para el tratamiento de la gonorrea con alta eficacia. En un estudio etnofarmacológico realizado en Mauritania, se encontró que la Bryophyllum pinnatum es utilizada por las comunidades del área para aliviar el dolor de pies con el agua de la decocción de sus hojas. Según la bibliografía consultada por los autores, se emplea para las úlceras gástricas, la artritis reumatoide, como antitumoral y para aliviar las alergias de las vías respiratorias9. 6. Descripción macroscópica de la droga fresca (hojas) Figura 3. Las hojas son pinnado compuesta, carnosas, elípticas con bordes crenados, pecioladas, enteras, lampiñas y lustrosas. El haz de color verde esmeralda y el envés más claro. 7. Descripción microscópica de la droga fresca y deshidratada (hojas) 7.1. Hoja: lámina foliar (ver figuras No. 2a y 2e) La anatomía de la Kalanchoe pinnata es típicamente la que se espera de una planta con metabolismo fotosintético CAM. Las epidermis adaxial y abaxial están conformadas por células de recubrimiento típicas de ovaladas a aplanadas en sección transversal y de contorno de redondeado a sinuoso en sección paradérmica. La hoja es anfiestomática, con estomas pequeños y escasos, en sección transversal a nivel o ligeramente prominentes con "pestañas" que conforman una cámara epistomática de tipo de anisocítico a helicocítico, de tres células acompañantes, de tamaño diferente, que incrementa en forma helicoidal (ver figuras No. 2b y 2c). La cutícula es casi imperceptible. Figura No. 2. Secciones anatómicas de hoja y tallo de la Kalanchoe pinnata. (a) Sección transversal de lámina foliar; (b-c) Estomas en sección paradérmica y transversal; (d-e) Haces vasculares en sección longitudinal y transversal; (f) Nervio central en sección transversal; (g) Detalle del haz vascular central; (h) Sección transversal del pecíolo; (i) Vista general de la sección transversal del tallo. Escalas: a, g=50 m; b, d, e=10 m; c=5 m, f, h, i=200 m. Coloración: astrablue-fucsina; b: tionina. El mesófilo es indiferenciado, conformado por parénquima fotosintético con grandes vacuolas y células de mayor tamaño hacia el centro de la hoja. Hay presencia de células con taninos de color rojizo. El nervio principal (ver figuras No. 2f y 2g) es de sección transversal planoconvexa, con curvatura hacia el envés y estructura similar a la del la lámina foliar. Tiene un haz vascular en arco abierto, un floema con elementos de tubos cribosos y células acompañantes pequeñas que forman grupos irregulares inmersos entre el parénquima floemático. La zona cambial denota un crecimiento secundario muy limitado, los vasos no están alineados entre el parénquima xilemático. Tanto el floema, como el xilema, presentan externamente parénquima tanífero de color azul a rojizo. Rodeando el haz vascular central, se presentan pequeños haces vasculares menores. Todos los nervios vasculares de primer, segundo o tercer orden están inmersos en el mesófilo y presentan una vaina del haz vascular parenquimática indistinguible del resto de células del mesófilo, las células de los tejidos vasculares (xilema y floema) son muy pequeñas, de tal manera que todo el haz vascular (de segundo o tercer orden) es menor que una sola célula parenquimática circundante (ver figuras No. 2d y 2e). 7.2. Hoja: pecíolo Es de contorno ovalado (eje mayor horizontal), convexo hacia el envés y ligeramente cóncavo en el haz. La epidermis es simple, dos a tres capas de colénquima hacia el haz y el envés (con engrosamientos poco evidentes). La corteza parenquimática presenta taninos, el haz vascular central está en forma de arco y los haces vasculares son muy pequeños, rodeándolo, de manera similar al nervio medio de la hoja. Hay células taníferas en tejidos parenquimáticos y colenquimáticos de la corteza, asociados externamente al floema y al xilema del haz central (ver figura No. 2h). 7.3. Tallo (ver figuras No. 2i, 3a, 3b y 3c) En los tallos estudiados se presenta un corcho muy delgado (ver figura No. 3ª), conformado por células de paredes delgadas suberificadas, derivado de un cambium felógeno subepidérmico, siendo la felodermis colenquimática. La corteza externa tiene cuatro a cinco capas celulares, es un colénquima angular, seguido de parénquima. El floema presenta externamente células con paredes gruesas pero no lignificadas y células taníferas enfrentadas al xilema primario, posiblemente lleguen a lignificar en estados más avanzados de desarrollo conformando fibras perifloemáticas en aquellas zonas asignables al floema primario (ver figura No. 3b). El floema, al igual que en las hojas, es una mezcla de pequeños elementos conductores (células acompañantes y elementos de tubo criboso) con células parenquimáticas, algunas taníferas. La zona cambial es de cuatro a ocho células de grosor, continua y forma un anillo en el tallo. Internamente se desarrolla el xilema secundario formado por vasos con engrosamientos helicoidales o anulares y perforación simple (ver figura No. 3c). El parénquima xilemático es abundante e incluye células taníferas. La médula es parenquimática y con células taníferas. Tanto en corteza como en médula se observan pares de células que evidencian crecimiento en el grosor del tallo por la división de las células parenquimáticas. 7.4. Caracteres diagnósticos de las muestras analizadas (ver figuras No. 3e y 3i) Vasos de xilema con engrosamientos principalmente helicoidales (ver figura No. 3i). Parénquima abundante, conformado por células muy grandes, frecuentemente con amiloplastos y reacción positiva a lugol (ver figuras No. 3d, 3e y 3f). Se observa reacción positiva a cloruro férrico de grandes porciones de tejido parenquimático, generando un halo amarillo (ver figura No. 3g). Algunas células tiñen fuertemente con azul de metileno. En un solo caso se evidenciaron cristales prismáticos de oxalato de calcio (ver figura No. 3h). Chauhan y Pillai10 señalan que estos cristales se presentan en el pecíolo, pero en este estudio no fueron observados. La presencia de estomas anisocíticos con tres células acompañantes cuyo tamaño es desigual (ver figura No. 3b), es también una característica diagnóstica mencionada por Chauhan y Pillai10, sin embargo la densidad estomática en la Kalanchoe pinnata es baja, así como la probabilidad de observar fragmentos de epidermis que permitan ver los estomas en muestra. Figura No. 3. Secciones anatómicas de tallo (a-c) hoja (d) y caracteres diagnósticos (e-i) de la Kalanchoe pinnata. (a) Detalle del corcho y la corteza del tallo en sección longitudinal; (b) Detalle de los tejidos vasculares del tallo en sección transversal; (c) Detalle del xilema en sección longitudinal; (d) Sección transversal de la hoja cortada a mano alzada y teñida con azul de metileno; (e) Parénquima con amiloplastos; (f) Tinción de amiloplastos con lugol; (g) Tinción amarilla de tejido con cloruro férrico; (h) Célula parenquimática teñida intensamente con azul de metileno, con cristales prismáticos de oxalato de calcio; (i) Vasos xilemáticos con engrosamientos espiralados. Escalas: a, b, d=50 m; c, e, g=10 m; f, h, i=5 m. Coloración: a, b, c=astrablue-fucsina; d, g=azul de metileno; e-h=floroglucinolHCl. 8. Composición Química La Kalanchoe pinnata (Lam.) Pers. (Sin: Bryophyllum pinnatum L.), es rica en alcaloides, triterpenos, glucósidos, flavonoides, cardienólidos, esteroides, bufadienolidos y lípidos. Las hojas contienen un grupo de químicos llamados bufadienólidos que son muy activos. Los bufadienólidos tales como bryotoxina A, B y C son muy similares en estructura así como su actividad de otros dos glucósidos cardiotónicos, digoxina y digitoxina11. Además de los anteriores componentes posee: Las hojas contienen fenoles, fenilpropanoides y flavanoides: ácido siríngico, ácido caféico, ácido 4-hidroxi-3-metoxi-cinámico, ácido 4-hidroxibenzoico, ácido p-hidroxicinámico, ácido paracumárico, ácido ferúlico, ácido protocatecuico, fosfoenolpiruvato, ácido protocatecuico aislado de las partes aéreas de las plantas. Las hojas contienen astragalina, 3,8-dimetoxi-4, 5, 7trihydroxyflavona, friedelina, epigallocatecquin-3-o-syringato, luteolina, rutina, kaempferol, quercetina, quercetina-3 L-ramnósido-L-arabino furanósido; quercetina-3-O-diarabinósido, kaempferol-3-glucósido, kaempferol-3-O-α-L-arabinopiranosil (1→2) α -L-ramno piranósido, quercetin-3-O-α-L-arabino piranosil (1→2) α -L-ramno piranósido y 4', 5-dihydroxi-3', 8-dimetoxi flavona-7O-β-D-glucopyranosido. Debido a su ocurrencia restringida y su abundancia en B. pinnatum, los flavonoides pueden ser un marcador químico de la planta con alto potencial terapéutico. Triterpenoides y esteroides: la planta contiene α-amirina, α-amirinacetato, β-amirina, βamirinacetato, bryophollenona, bryophollona, taraxerol, taraxasterol, Ψ-taraxasterol pseudo, 18-α-oleanano, friedelina, glutinol. El cardienólido y el contenido de esteroide incluye βsitosterol, bryophyllol, bryophynol, bryophyllina B , a. bryophyllina (bryotoxina C, bufadienolido 1, 3, 5-orthoacetato), bufadienólido y bersaldegenin-3-acetato, bryophyllina C, bryotoxina A, bryotoxina B, bersaldegenin-1, 3, 5-orthoacetato, campesterol, 24-etil-25 - hidroxicolesterol, isofucosterol, codisterol, peposterol, 22-dihydrobrassicasterol, cliona-esterol, clerosterol, 24 epiclerosterol, 24 etil - desmosterol, 25-metil-5α-ergost-24-in-3-Beta-ol, ergosta-5-24 -dien-3Beta-ol, 25-methyl-ergosta-5-24-dien3-β-ol5Α-stigmast-24-in-3-Beta-ol, (24s) - stigmast-25-in-3Beta-ol, (24r) - 5α-stigmasta-7-25-dien-3-Beta-ol (24s) - 5α - stigmasta-7, 25 dien-3-β-ol, 24 (R) - stigmasta - 5, 25-dien-3β-ol, estigmasterol, quercetagetina, 3-O-(4-O-acetil-α-L- rhamnopyranosil)-7O- quercetagetina (2-O-acetil-α-L-rhamno pyranosido), 3-O-α-L-rhamno pyranosyl-7-O-(2-O-acetyl-α-L-ramno piranosido) patuletina, ramno 3-O-(4-O-acetil-α-L- piranosil)-7-Orhamno piranósido quercetagetina están aisladas de las partes aéreas. Ácidos grasos, minerales y otros: fracción de ácidos grasos incluye ácido palmítico (89,3 %), ácido esteárico (10,7 %), restos de ácido araquídico y behénico. La planta también contiene HCN, ácido oxálico, ácido cítrico, ácido isocítrico, oxalacetato, ácido málico y ácido succínico. La planta es rica en vitaminas y aminoácidos; ácido ascórbico, riboflavina, tiamina, niacina, piridoxina, glicina, cisteína, hidrolizado de caseína, ácido glutámico, hidrolizado de proteína, metionina, tirosina, fenilalanina. El contenido de nutrientes son: carbohidratos, proteínas, lípidos, ácidos, yodo. La hierba es buena fuente de elementos minerales como Na, Ca, K, P, Mg, Mn, Fe, Cu, Zn. El contenido de azúcares incluye rafinosa, lactosa, sacarosa, glucosa, galactosa, fructosa. Planta también contiene alcaloides, taninos, derivados del fenantreno: 2(9-decenyl)fenantreno, 2(9-undecenil)-fenantreno, alcanos (C25-35), alcanoles (C26-34), n-triacontano, hentriacontano11. 9. Control de calidad 9.1. Extracto etanólico de las partes aéreas: Caracteres Organolépticos: Líquido homogéneo, color verde oscuro y olor alcohólico característico. Caracteres fisicoquímicos: pH. 4.83. Densidad: 0.8281 g/mL. % de alcohol: 95 %. Materia Seca: 2.387 g/100 mL. 9.2. Planta pulverizada Identificación: Caracteres organolépticos: olor ligeramente aromático, sabor neutro, color parduzco. Propiedades fisicoquímicas: Mejor disolvente: los productos fitoterapéuticos son elaborados, principalmente, con mezclas hidroalcohólicas. Según Sharapin12, el porcentaje de alcohol más eficiente para la extracción es al 70 %. pH en suspensión al 1 % en agua purificada: 5.79. Materia extraña: no más del 2 %. Contaminantes: Metales pesados y/o residuos de pesticidas: no exceder los límites especificados en el Quality Control Methods for Medicinal Plant Materials, texto guía de la Organización Mundial de la Salud. Humedad y cenizas: humedad 5.79 %, cenizas 6.31 %, cenizas insolubles en HCl concentrado 1.09 %. Conservación: en recipientes herméticamente cerrados que mantengan el contenido de humedad constante y evite la degradación y contaminación por microorganismos. Formas farmacéuticas: no se tienen datos reportados. 9.3 Análisis fitoquímico preliminar Metabolito Carotenoides Secundario Prueba Patrón positivo Salkowski Resultado - triterpenoides Taninos Esteroides y Achiote (Bixa orellana L.) Liebermann-Burchard + Colesterol Cloruro férrico +++ Rutina Acetato de plomo +++ Flavonoides Dividivi (Etanol) Shinoda + 5,7,3´,4´,tetrahidroxi flavona Rodamina - Quinonas Emodina Amoniaco - Saponinas Emodina Espuma Jaboncillo (Sapindus saponaria) (Etanol) Rosenthaler Jaboncillo (Sapindus Cardiotónicos saponaria) (Etanol ) Baljet ++ Dedalera (Digitalis purpurea) (Etanol) Erlich - Coumarinas Cumarina (1,2 Benzopirona) Fluorescencia - Alcaloides Umbeliferona Valser - Atropina Dragendorff - Atropina Mayer - Atropina Tabla No. 1. Análisis fitoquímico preliminar. Teniendo en cuenta los resultados obtenidos en las pruebas químicas preliminares se sugiere la presencia de: esteroides, triterpenos, taninos, flavonoides y cardiotónicos. 10. Datos farmacológicos y clínicos En un estudio prospectivo multicéntrico observacional, Lambrigger-Steiner, et al13, notaron que en 78 pacientes embarazadas, la administración por 14 días de tabletas de 350 mg de B. pinnatum, daba como resultado una mejoría en los desórdenes del sueño. Kalanchoe pinnata presenta algunas propiedades y acciones documentadas por Investigación: analgésica (calmante del dolor), anti-alérgica, anti-anafiláctica (reduce las reacciones alérgicas), anti-inflamatoria, antitumoral, antiulcerosa, antibacteriana, antihistamínica, antifúngica, antiviral, depresora del sistema nervioso central, febrífuga (reduce la fiebre) gastroprotectora (protege el tracto gástrico), inmunosupresora (suprime algunas células inmunes), inmunomoduladora (modula algunas células inmunes hiperactivas), relajante insecticida, muscular y sedante6. En un estudio en modelo animal (en ratas), Bopda, et al15, demostraron el efecto antihipertensivo del extracto de la Kalanchoe pinnata, la disminución de la presión sanguínea se evidenció de manera dosis dependiente. En un estudio realizado en Nigeria por Salami, et al16, se observó la actividad antitusiva y antiasmática del extracto acuoso de las hojas de Bryophyllum pinnatum (= Kalanchoe pinnata). Los cobayos sensibilizados con Ovalbumina, los cuales fueron tratados con Bryophyllum pinnatum por 21 días consecutivos, fueron expuestos a 0.2 % aerosol con histamina en una cámara de vidrio. Se midieron la viscosidad del moco producido, la morfometría de la pared traqueal, además del conteo de células blancas y linfocitos. Los ataques de tos fueron contados antes y después de la exposición aguda de aerosol de ácido cítrico a los cobayos tratados (x 7 días) con extracto. Se estimó la cantidad de expectoración coloreada con fenol rojo después de la aplicación por 7 días de Bryophyllum pinnatum. Las dosis de 200 y 400 mg/kg/día (x 21 días) de Bryophyllum pinnatum incrementan significativamente el tiempo disnea preconvulsiva experimentada por los cobayos. Bryophyllum pinnatum y el salbutamol (0,5 mg/kg/días x 21 d) redujeron la viscosidad del moco en el grupo sensibilizado a valores comparables con los controles. Los conteos de células blancas y linfocitos y la morfometría traqueal no fueron significativamente alterados. Ambas dosis también redujeron significativamente los accesos de tos pero solo con la dosis de 400 mg/kg/día inhibieron significativamente la expectoración de fenol rojo. En conclusión, Bryophyllum pinnatum demostró propiedades antitusivas y antiasmáticas en este modelo animal. Estos resultados apoyan los usos de Bryophyllum pinnatum en la medicina tradicional nigeriana. Patil, et al17, mostraron el efecto antidiabético del extracto de diclorometano de la Kalanchoe pinnata en ratas. Las ratas se volvieron diabéticas con estreptozotocina. Dicha fracción disminuyó la glucemia de 228 mg/dl a 116 mg/dl. En un estudio clínico controlado aleatorizado, doble ciego con placebo, en 20 pacientes, Bestchart, et al18, determinaron que la administración de 350 mg por día de Bryophyllum pinnatum mejoró la hiperactividad de la vejiga en mujeres postmenopáusicas. El alto contenido de saponina justifica el uso de los extractos para detener el sangrado y en el tratamiento de las heridas. Las saponinas tienen la propiedad de precipitar y de producir coagulación de glóbulos rojos. Algunas de las características de las saponinas incluyen formación de espumas en soluciones acuosas, actividad hemolítica, propiedades de enlace de colesterol y amargor. Estas propiedades le otorgan importantes actividades medicinales a los extractos de Bryophyllum pinnatum. Los taninos tienen propiedades astringentes, aceleran la cicatrización de heridas e inflamación de las membranas mucosas. Estos quizás, explican por qué algunos curanderos de medicina tradicional en el sureste de Nigeria a menudo utilizan hierbas en el tratamiento de heridas y quemaduras. La Dra. Amalia y cols.19, investigaron la actividad antiinflamatoria del extracto fluido de las hojas contra el edema causado por carragenina en ratas. Se confirmó que el extracto líquido con 4,5 % de sólidos totales en dosis de 100 mg/kg de peso tiene un efecto antiinflamatorio. Algunos compuestos de bryophyllina han mostrado un alto valor terapéutico contra el cáncer y contra células cancerosas. El bersaldegenin-1, 3, 5-orthoacetato inhibe el crecimiento de células cancerígenas en varias líneas de cáncer. En otro estudio se evaluó el efecto antiinflamatorio de 2-(3,4-dihidroxyfenil)-3, 5,7-trihidroxi-4h H fenilcromen-4-ona aislada del tallo de la Kalanchoe pinnata (Lam.)Pers., utilizando el modelo de inflamación aguda en pata de rata suiza albina induciendo edema. Algunos flavonoides a dosis de 200 y 400 mg/kg, y el medicamento de síntesis con capacidad antiinflamatoria indometacina a 10 mg/kg o el vehículo fueron administrados oralmente antes de la inyección del compuesto pro-inflamatorio. La sustancia ensayada mostró actividad antiinflamatoria significativa contra edema en la pata, inducido por carragenina, mostrando actividad importante a la máxima dosis de 400 mg/kg. En estos análisis, la fracción de flavonoides en general fue más activa a una dosis de 400 mg/kg20. Un nuevo derivado esteroideo, el estigmast-4, 20 (21), 23-trien-3-ona y otros cuatro compuestos fueron aislados por Azafal, et al21, de las hojas de Bryophyllum pinnatum. La estructura de este nuevo esteroide fue aclarada y se estableció por métodos espectroscópicos estándar. El modelo de edema inducido en la pata de rata por carragenina se utilizó como modelo anti-inflamatorio y por otra parte el modelo de la actividad analgésica inducida por ácido acético. Se encontró que este nuevo compuesto esteroideo fue activo en la reducción de la inflamación (% de inhibición 87,29 y 84,45, respectivamente) en comparación con el diclofenaco. Además, se demostró protección en un 75 y 72 % en la actividad analgésica por el ensayo de inducción a contorsión de ratones por ácido acético. En conclusión, el porcentaje (%) de inhibición contra la inflamación por edema de la pata de la rata inducida por carragenina y el porcentaje (%) de protección contra contorsiones inducidas por ácido acético mostradas por el nuevo compuesto reveló que la actividad analgésica y anti-inflamatoria del extracto acuoso Bryophyllum pinnatum son principalmente debido a la presencia de este compuesto esteroideo. Schuler, et al22, demostraron que el jugo de las hojas de Bryophyllum pinnatum inhibe las contracciones inducidas mediante la estimulación con campos eléctricos utilizando vejigas de porcinos. El máximo efecto relajante se obtuvo a una concentración al 10 % del jugo. Coutinho, et al23, comprobaron el efecto inmunosupresor del extracto acuoso de las flores de la Kalanchoe pinnata. Flavonoides tipo quercetina inhibieron la mitogenesis de células T y la producción de IL-2 y IL-4. Mohan, et al24, encontraron que el extracto seco de la Kalanchoe pinnata mostró un efecto inhibitorio in vitro sobre la peroxidación lipídica. Los radicales generados in vitro fueron barridos efectivamente por la administración del extracto de manera dosis dependiente. El extracto crudo de hojas y tallos de la Kalanchoe pinnata produjo un efecto citotóxico significativo sobre artemia salina. Adicionalmente se evidenció actividad antibacteriana sobre cepas Gram+. En un estudio similar también se evidenció una baja actividad antimicrobiana del extracto clorofórmico de las hojas de la Kalanchoe pinnata25, 26. De acuerdo con Joseph, et al27, la Kalanchoe pinnata posee propiedades, entre otras, como las siguientes: Antibacteriana: la hoja y el jugo o extracto de la hoja han demostrado una significativa actividad antibacteriana in vitro sobre S. aureus, E. coli, Shigella, Bacillus y Pseudomonas, incluyendo varias cepas de múltiples bacterias resistentes. Anticáncer: algunos compuestos de la Kalanchoe pinnata han marcado valor terapéutico contra el cáncer especialmente contra las células cancerosas, según Supratman, et al28, el Bersaldegenin-1, 3,5-ortoacetato inhibió el crecimiento de células cancerosas en líneas de cáncer de varios tipos. Anti-alérgica: además de sus propiedades antibacterianas, los usos tradicionales de la Kalanchoe pinnata para las dolencias de las vías respiratorias superiores y la tos se podría explicar por investigaciones que demuestran que el zumo de la hoja tiene una potente actividad antihistamina y anti-alérgica. En un estudio in vivo (en ratas y conejillos de indias), el zumo de la hoja fue capaz de proteger contra reacciones anafilácticas inducidas químicamente y la muerte por el bloqueo selectivo de los receptores de histamina en los pulmones. Anti-inflamatoria: otros trabajos in vivo confirman que Kalanchoe puede reducir la fiebre y proporciona actividad anti-inflamatoria, analgésica y efectos de relajación muscular. Sus efectos anti-inflamatorios se han atribuido al efecto inmunomodulador y al efecto inmunosupresor 27. Se ha encontrado que el extracto acuoso de la Kalanchoe pinnata, es eficaz en modelos para reducir las reacciones anafilácticas agudas. En el presente estudio, se investigó el efecto de la Kalanchoe pinnata y de sus flavonoides quercetina (QE) y quercitrina (QI) aislados en la activación de los mastocitos in vitro y por otra parte, se empleó un modelo murino para valorar la enfermedad alérgica de las vías respiratorias in vivo. El tratamiento con la Kalanchoe pinnata y QE in vitro inhibe la degranulación y la producción de citoquinas de las células cebadas derivadas de médula ósea seguido de la reticulación por IgE/FcɛRI, mientras que el tratamiento con QI no tuvo ningún efecto. Del mismo modo, el tratamiento in vivo con la Kalanchoe pinnata y QE produjo una disminución en el desarrollo de la hiperreactividad de las vías respiratorias, la inflamación de las vías respiratorias, metaplasia de células caliciformes y la producción de IL-5, IL-13 y TNF. En contraste, el tratamiento con QI no tuvo ningún efecto sobre estos parámetros. Estos hallazgos demuestran que el tratamiento con la Kalanchoe pinnata o QE es eficaz en el tratamiento de la enfermedad alérgica de las vías respiratorias disminuyendo la hiperactividad aérea (HA) e inflamación, lo cual proporciona nuevas perspectivas sobre las funciones inmunomoduladoras de esta planta29. Wächter, et al30, demostraron que el jugo de las hojas de Bryophyllum pinnatum y una fracción derivada rica en flavonoides inducen relajación miometrial. Nayak, et al31, comprobaron la actividad cicatrizante del extracto etanólico de la Kalanchoe pinnata en ratas. El porcentaje de reducción del área de la herida fue de 86.33 %. Adicionalmente se observó un aumento en la concentración de hidroxiprolina. En un estudio in vitro, Jaeger, et al32, obtuvieron que el extracto en acetona de la Kalanchoe pinnata, mostró actividad antiviral frente a los virus HSV 1 y HSV 2. En un estudio precedente, se informó de la acción inmunosupresora del extracto acuoso de la Kalanchoe pinnata en ratones. En el presente estudio, se observa un efecto protector de la Kalanchoe pinnata sobre el estado de shock anafiláctico fatal, así mismo sobre la inmunopatología Th2 inducida, y la identificación de su componente activo. Los ratones tratados diariamente con la Kalanchoe pinnata por vía oral durante la hipersensibilización con ovoalbúmina fueron protegidos contra la muerte cuando se enfrentan con el alérgeno, en comparación con el 100 % de mortalidad en el grupo no tratado. Una sola dosis intraperitoneal 3 horas antes de la exposición fue parcialmente eficaz. La protección por el suministro vía oral de la Kalanchoe pinnata fue acompañada por una reducción de la producción de anticuerpos IgE específicos de OVA, reducción de la eosinofilia y alteración de la producción de la IL - 5, IL - 10 y las citocinas TNF - α. In vitro, la especie previene la degranulación de mastocitos inducida por antígenos y actúa sobre la liberación de histamina. El tratamiento oral con la flavonoide quercitrina aislado de la Kalanchoe pinnata detuvo la anafilaxia fatal en el 75 % de los animales. Estos hallazgos indican que el tratamiento oral con la planta inmunosuprime eficazmente las respuestas inmunes de inducción pro-anafilácticas. La protección alcanzada con quercitrina, aunque no es máxima, sugiere que este flavonoide es un componente del extracto de la Kalanchoe pinnata muy eficiente contra esta reacción alérgica extrema33. La importancia de algunos flavonoides sobre la actividad antileishmania de la Kalanchoe pinnata se demostró previamente por el aislamiento de quercitrina, un potente flavonoide contra leishmania. En un estudio realizado por Muzitano, et al36, el extracto acuoso de hojas de la planta (Crassulaceae) proveyó un kaempferol di - glucósido, llamado kapinnatosido, identificado como kaempferol 3 - OAL - arabinopiranosil ( 1! 2) α– L rhamnopyranosido (1). Además, dos flavonoles y flavonas glucósidos inusuales ya se ha informado, la quercetina - 3 - OAL arabinopiranosil ( 1! 2) α L- ramnopiranósido (2) y 40,5 - dihidroxi - 30,8- dimetoxiflavona 7 OBD- glucopiranósido (3), fueron aislados. Sus estructuras se determinaron mediante análisis de mono y 1H bidimensional y los experimentos espectroscópicos de RMN de 13C y de masas MALDI -HR. Dada su incidencia restringida y su abundancia, el flavonoide (2) puede ser un marcador químico para esta especie vegetal de gran potencial terapéutico. Los tres flavonoides fueron probados por separado contra amastigotes de Leishmania amazonenis en comparación con quercitrina, quercetina y afzelin. La estructura de tipo aglicona de la quercetina, así como una unidad de ramnosil ligada en C- 3, parecen ser importantes para la actividad contra leishmania. Muzitano, et al35, demostraron que la quercitrina aislada de la Kalanchoe pinnata tiene un efecto potente antileishmania (IC50= 1 ug/ml). De acuerdo con Germosén-Robineau5, se emplea la hoja machacada para el dolor de cabeza aplicada sobre la frente; para el resfrío y la tos, el zumo de la hoja por vía oral. Estudios preclínicos con extractos de la hoja indican actividad sedante del SNC, aumenta el nivel de ácido gamma amino butírico GABA provocando relajación del músculo esquelético. Los extractos acuosos y etanólicos de la planta fresca inhibieron in vitro la actividad inmunomoduladora en el modelo de proliferación linfocitaria experimental; la incubación de las células en el extracto produjo un bloqueo de la respuesta proliferativa a la interleuquina- 2, que permaneció durante todo el periodo de cultivo, aún en ausencia del extracto, con respuesta dosis-dependiente. Un extracto de la hoja en solución salina de Bryophyllum pinnatum fue investigado para sustentar su uso tradicional como neurofarmacológico. Cuando se probó en ratones, produjo una prolongación, dosis-dependiente, de inicio y duración de la hipnosis inducida por fentobarbital, asimismo la reducción de actividades exploratorias en el modelo de inmersión y de evasión de la cabeza del ratón. Por otra parte, utilizando el modelo de coordinación muscular, se observó la agilidad en las pruebas de pantalla, de tracción y de escalada inclinadas dependiente de la dosis. Además, se retrasó el inicio de la convulsión en tanto ataques inducidos por estricnina y picrotoxina, además de una protección mínima contra las convulsiones inducidas por picrotoxina. El extracto acuoso de las hojas de Bryophyllum pinnatum posee efectos antinflamatorios, analgésicos y antidiabéticos, de acuerdo con un estudio in vivo realizado por Ojewole36. Estos resultados confirman algunos de sus usos tradicionales en África. En un estudio clínico en 14 mujeres en trabajo de parto, Gwehenberger, et al37, hallaron que una solución de Bryophyllum pinnatum inhibió contracciones espontáneas de manera concentración dependiente. El estudio confirmó la actividad tocolítica de la especie. Torres-Santos, et al38, demostraron que el tratamiento con el extracto de hojas por vía oral tiene un efecto fuerte sobre la leishmaniasis murina. Adicionalmente, se presenta evidencia que la leishmaniasis en humanos podría ser controlada por el suministro oral. Un hombre de 36 años de edad con una leishmaniasis cutánea activa se trató oralmente con 30 gramos de hojas de la Kalanchoe pinnata por 14 días, durante el tratamiento la lesión paro su crecimiento y disminuyo suavemente, no se observaron reacciones toxicas o efectos adversos. El estudio reporta por primera vez que la planta contiene sustancias potencialmente activas y seguras para el tratamiento oral de la leishmaniasis cutánea humana. Las hojas de la Kalanchoe pinnata poseen actividad hepatoprotectora según un estudio realizado por Yadav, et al39. En este estudio se determinó la capacidad protectora del jugo concentrado de hojas y del extracto etanólico de las mismas. Por una parte, empleando un modelo in vitro, utilizando hepatocitos aislados para establecer el nivel de enzimas (transaminasas GTP y GTO) producidas por la aplicación de tetracloruro de carbono (CCl 4), por otra parte, in vivo empleando ratas que fueron protegidas por el suministro del jugo y de extracto de las hojas en concentraciones de 200 mg/kg, solos o en combinación con CCl 4 y éste mismo administrado solo mostrando su profundo efecto tóxico. Se analizó la sangre después de varios días con el objeto de identificar la presencia de altos niveles enzimáticos y de bilirrubina. Además, se realizaron cortes histopatológicos para observar el posible daño hepático producido por la adición de CCl4 así como el efecto protector de la Kalanchoe pinnata. De otro lado, se trabajó un modelo in vivo empleando ratas inducidas al sueño con un barbitúrico (tiopental sódico) y envenenadas con CCl4. En este modelo se midió la duración del sueño como un índice de metabolismo del hígado como parámetro funcional relacionado con el tiempo de sueño. En el modelo de los hepatocitos aislados se observó el efecto tóxico al presentar altos niveles de GOT y GPT en el grupo envenenado con el CCl4 en comparación con el grupo normal. Con el jugo concentrado y el extracto hidroalcohólico los niveles de estas enzimas se redujeron significativamente (p< 0,001) en el caso de GOT, en un 55.55 % y 36.50 % y GPT por 69.57 % y 38.61 %, respectivamente. El sobrenadante (suero) de la sangre centrifugada mostró niveles significativamente reducidos (p< 0,001) de las enzimas hepáticas SGOT, SGPT, SALP y SBLN. El jugo concentrado redujo los niveles de estas enzimas en un 51.69, 92.47, 72.50 y 105.50 %, respectivamente y el extracto etanólico en 29.45, 81.37, 45.82 y 49.00 %. Los estudios histopatológicos mostraron daño hepático severo en las ratas tratadas con CCl4, en cambio en los animales tratados el daño fue leve en las estructuras celulares de los hepatocitos observados. Las ratas inducidas al sueño por tiopental sódico y tratados con el jugo concentrado y el extracto etanólico redujeron el tiempo de sueño en relación con las que fueron tratadas con el tetracloruro de carbono. En general se demostró un efecto protector en cada uno de los modelos utilizados en este ensayo. Especialmente se destaca el poder protector del jugo concentrado más que del extracto etanólico y la disminución significativa de los niveles de bilirrubina sugiriendo un tratamiento de la ictericia. De otra manera se confirma el uso tradicional de las hojas para el tratamiento de esta condición médica. Supratman, et al28, encontraron 5 bufadienólidos aislados de las hojas de la Kalanchoe pinnata y la Kalanchoe daigremontiana, los cuales fueron examinados por su efecto inhibidor sobre el virus del Epstein-Barr, todos los bufadienolidos presentaron actividad inhibitoria y la bryophylina A mostró la mayor inhibición con un IC50 de 0.4 uM. En 1995, Da Silva, et al40, investigaron el efecto de un extracto de hoja de la Kalanchoe pinnata en ratones BALB / c infectados con Leishmania amazonensis. El tratamiento oral con la especie retrasó significativamente la aparición de la enfermedad en comparación con los ratones no tratados o aquellos que la recibieron por las vías intravenosa o tópica. Al inicio en las primeras etapas de infección, las dosis orales diarias de 8 mg previnieron el crecimiento de la lesión y el efecto fue de larga duración, comparable al Glucantime, fármaco contra la leishmania a la que se hace referencia. El crecimiento de la lesión disminuyó utilizando el extracto por vía oral y a su vez, acompañado por una disminución significativa en el número de parásitos viables. El efecto protector estuvo asociado a la disminución de la capacidad de los animales para desarrollar hipersensibilidad de tipo retardado y para producir anticuerpos específicos. En un estudio realizado por Siddharta y Chaudhuri41, se estableció la actividad antiiflamatoria de la planta Bryophyllum pinnatum L., bajo varios modelos de inducción a edema por carragenina y otros mediadores, y en particular, se encontró que la fracción metanólica del extracto de las hojas muestra un efecto inhibidor estadísticamente significativo en el modelo de inflamación de pata de rata con carragenina a dosis desde 100 mg/kg y más concentrado (hasta 300 mg/kg), con un porcentaje de inhibición desde la dosis más baja, 53,65 %, hasta 87.80 % a la dosis más alta. 11. Indicación sugerida: Antiinflamatorio por vía oral y tópica y para el tratamiento de alergias. 12. Actividad antimicrobiana Los resultados obtenidos sugieren que el extracto de la Kalanchoe pinnata, a la concentración de de 4mg/mL, presenta actividad antimicrobiana contra Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella tiphymurium ATCC 14028, Klebsiella pneumoniae ATCC 10031, Escherichia coli ATCC 8739 Y Proteus mirabilis ATCC 43071; En la tabla No. 2, se pueden observar los valores de los halos de inhibición obtenidos. Microorganismo ATCC Kalanchoe pinnata 10.04 mm Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027 % de inhibición 59,86 (Gentamicina) 10.05 mm 59,86 9.07 mm 54,08 _ Estreptococcus faecalis ATCC 29212 Salmonella tiphymurium ATCC 14028 _ 0 _ 0 _ 0 _ 0 9.52 mm 31,89 (Ampicilina) 9.51 mm 31,89 9.86 mm 33,03 9.36 mm 31,35 11.19 mm Klebsiella pneumoniae ATCC 10031 Aspergillus brasiliensis ATCC 16404 Candida albicans ATCC 10231 46,28 11.26 mm 44,20 11.26 mm 44,20 _ 0 _ 0 _ 0 _ 0 _ 0 _ 0 _ 0 _ 0 48,77 (Gentamicina) 8.78 mm 48,77 8.34 mm 46,33 8.74 mm 48,55 9.46 mm Proteus mirabilis ATCC 43071 (Gentamicina) 11.79 mm 8.78 mm Escherichia coli ATCC 8739 43,93 43,23 (Gentamicina) 10.44 mm 47,71 9.33 mm 42,64 10.35 mm 47,30 Tabla No. 2. Resultados de halo de inhibición para la especie vegetal Kalanchoe pinnata. En las imágenes que se presentan a continuación se observan las placas de petri con halos de inhibición, se evidencia que el tamaño de los halos de inhibición del extracto frente a las cepas, son comparables con los valores obtenidos con la tetraciclina a 1mg/Ml para las bacterias y Fluconazol a 1mg/mL para el hongo. Los controles positivos y negativos correspondieron a lo esperado según la literatura. Figura No. 4. Halo de Inhibición de Kalanchoe pinnata frente a Salmonella tiphymurium ATCC 14028 Figura No. 5. Halo de Inhibición de Kalanchoe pinnata frente a Klebsiella pneumoniae ATCC 10031. Figura No. 6. Halo de Inhibición de Kalanchoe pinnata frente a Escherichia coli ATCC 8739. Figura No. 7. Halo de Inhibición de Kalanchoe pinnata frente a Proteus mirabilis ATCC 43071 13. Estudios toxicológicos Luego de relacionar los hallazgos clínicos, consumo de alimento, necropsia y análisis histológico de órganos recomendados por la OECD (OECD, 407. OECD GUIDELINES FOR THE TESTING OF CHEMICALS. Repeated Dose 28-Day Oral Toxicity Study in Rodents, 2008). Para búsqueda de toxicidad durante 28 días; el extracto completo de Kalanchoe pinnata, no muestra toxicidad a las dosis probadas en el presente ensayo. 14. Referencias bibliográficas 1. Gupta M. Plantas Medicinales Iberoamaricanas. Convenio Andrés Bello. Colombia: CYTED. 2008. 2. Tropicos.org [Internet] [citado 11 junio 2014] Disponible en: http://www.tropicos.org/ 3. Jessica L. Investigation of Kalanchoe Homeobox I (Kh1) Gene in Apical Meristems of Kalanchoe Pinnatum. Undergraduate Honors Theses. USA: Butler University. 2008. 4. Missouribotanicalgarden.org [Internet] USA: Missouri Botanical Garden; 2014. [citado 11 junio 2014] Disponible en: http://www.missouribotanicalgarden.org/ 5. Germosén-Robineau L. Farmacopea Vegetal Caribeña. 2a edición. Nicaragua: Editorial Universitaria Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua, 2005. p. 486. 6. Correa J, Bernal H. 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