Método de predifusion para los antibióticos de elevado peso

Método de predifusion para los antibióticos de elevado peso molecular, qué
difunden mal en el agar.
Tenemos los ejemplos de la Colistina y de la Daptomicina,que la CLSI recomienda que no se usen
por el método corriente de difusión porque producen muchos resultados falsos.
El método consiste básicamente en lo siguiente:
Se predifunde el antibiótico en la placa (sin bacterias),durante unas 20 horas (overnight).
De esta manera se consigue un gradiente de antibiótico en el agar, resultando en una buena
separación entre cepas con CMIs distintas:
Se puede decir que con el método de difusión corriente la diferencia entre dos CMIs consecutivas
corresponde a aprox. 1 mm de diferencia entre las zonas de inhibición (con colistina y
daptomicina), mientras que con el método de predifusión la diferencia de zonas entre dos CMIs
consecutivas es de 4 – 5 mm. Con ello es claro que el método de predifusión es casi tan exacto
como el método de medir CMIs.
La técnica es la siguiente:
En la placa de MH sin inocular se coloca una tableta de Colistina o Daptomicina. Se deja a
temperatura ambiente durante 2 horas.
Ahora se elimina la tableta (deposito de
antibiótico)poniendo la placa boca abajo y dándole un pequeño golpe contra la mesa. Es
importante que se elimine el deposito de antibiótico, con objeto de conseguir el mejor gradiente en
el agar.
Ahora se deja la placa a temperatura ambiente hasta el día siguiente (unas 18 horas).
Al día siguiente se inocula la placa con la cepa a ensayar y se colocan otras Neo-Sensitabs por ej.
con un dispensador. La placa se incuba ahora normalmente a 35-37 grados hasta el día siguiente,
cuando se miden las zonas de inhibición.
Uno puede pensar que esto significa que el resultado se obtiene un día mas tarde. Pero la placa
predifundida puede prepararse el día anterior a su uso, ya que no se necesitan las cepas hasta el
día siguiente. En caso de que se hayan preparado demasiadas placas predifundidas pueden estas
guardarse en el refrigerador durante un día extra.
Naturalmente hay un poco mas de trabajo que con el método habitual, pero los resultados son
excelentes
Este método funciona también para detectar cepas de VISA /GISA e inclusivo hVISA, usando
vancomicina y teicoplanina de 30 ug. Naturalmente estos dos antibióticos tienen también un
elevado peso molecular y por lo tanto difunden mal en el agar. Como medio recomendamos el BHI
con 5 % de sangre y un inoculo corriente de 0.5 McF.