Capítulo 2d: Análisis y tipificación del VPH
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UICC HPV and CERVICAL CANCER CURRICULUM UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 01 Capítulo 2.d. Detección y diagnóstico -- análisis y tipificación del VPH Prof. Suzanne Garland MD Directora de Investigación Microbiólogica, Jefe de Microbiología Clínica y Enfermedades Infecciosas The Royal Women's Hospital Melbourne, Australia Associate Prof. Sepehr Tabrizi Investigador Principal, Departamento de Microbiología The Royal Women's Hospital Melbourne, Australia UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 02 Partículas similares al virus (VLPs) • Ánalogos no infecciosos de un virus patógeno • VLP-L1 se ensambla in vitro en cápsides vacías o ‘VLPs’ • La producción de VLP no es estandarizada - Sistemas de expresión diferentes, métodos de preparación, métodos de control de calidad - Formatos de identificación varían (directa e indirecta) - No hay estándar de oro para establecer el umbral de resultado positivo - Pocas comparaciones entre laboratorios UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 03 Partículas similares al virus (VLPs) • VLPs pueden ser analizadas mediante técnicas de microscopía electrónica W UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 04 Detección de anticuerpos VPH • Anticuerpos - Su presencia representa una infección en el pasado o presente - Se puede generar contra las proteínas del VPH tempranas (early/E) o tardías (late/L) - Presencia de anticuerpos neutralizantes L1 correlacionan con protección antiviral iniciada por la vacuna UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 05 Detección de anticuerpos VPH • Se han desarollado diversos métodos de análisis para detectar anticuerpos en el suero/mucosa: - Ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA): mide las inmunoglobinas (Ig) en su totalidad, tanto neutralizantes como no neutralizantes. - Ensayos de unión competitiva, por ejemplo, el ensayo competitivo Luminex (cLIA): mide las Ig neutralizantes a un epítopo solamente, pero todas las diferentes clases de Ig - Ensayo pseudovirión: mide el total de Ig neutralizantes, de todas las subclases - Western blot - Radio-inmunoprecipitación UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 06 Detección de AND del VPH en el tejido por microscopio • Inmunohistoquímica (antígeno especifico de grupo) • Citología Pap: detecta células precancerosas UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 07 Técnicas de detección molecular de ADN del VPH Métodos de amplificación • Amplificación de la señal - Captura de híbridos/Hybrid Capture (HC2) • Amplificación del objetivo - Reacción en cadena de la polimerasa – PCR de ADN del VPH - ARNm del VPH UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 08 Análisis Hybrid Capture 2 • Prueba actualmente aprobada por la FDA - 1995 formato de tubo; 1999 formato micro-placa • Diseñado para trabajar con una muestra de células cervicales exfoliadas • Kit recomendado incluye cepillo y medio de transporte de la muestra - Recoge células endo- y exocervicales UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 09 Análisis Hybrid Capture 2 • Sensibilidad de 5000 genomes/muestra • Mezcla de bajo riesgo - VPH tipo 6, 11, 42, 43, 44 • Mezcla de tipo de alto riesgo - VPH tipo 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59 and 68 • Los resultados no son específicos del tipo • No hay control de número de entrada de las células • Buena comparación entra laboratorios UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 10 Reacción en cadena de polimerasa • Muy sensible; cerca de 1-10 copias /100,000 células • Permite realizar pruebas de diferentes tipos de muestras • Permite el análisis de muestras de archivo con AND de baja calidad • Ensayos de consenso: objetivo general: región L1 - Conservado - Primers varían: MY09/MY11 SPF1/SPF2 PGMY09/PGMY11 GP5+/GP6+ - Sistemas de detección: ELISA dot blot UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 11 Diferentes metodologías de PCR • Test AMPLICOR ® HPV • Test LINEAR ARRAY® HPV • Test genotipo INNO-LiPA ® - Genotipado de VPH en tejido preparado en parafina - Las secciones de tejido pueden ser muy viejas y están sujetas a la degradación del ADN (incluso durante la extracción) UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 12 Diferentes metodologías de PCR • Formato de Chip de ADN de VPH • HPV Microarray • Citometría de flujo UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 13 Otras metodologías para detectar los tipos de VPH • Luminex’s xMAP® Technology • Norchip - HPV Proofer UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 14 Limitaciones y Desafíos • Ensayos de diversa gama • Diferente sensibilidad y especificidad • Falta de controles fácilmente disponibles, la garantía de calidad y el control de calidad UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 15 Uso práctio de los métodos de prueba de ADN del VPH Clínico • Tamizaje • Triage de las pruebas de Papanicolau equívocas • Sequimiento de displasia post-tratamiento Epidemiología • Vigilancia en zonas geográficas - Prevalencia de VPH - Prevalencia de genotipo de VPH Vacuna • Antes y después de la implementación de un programa de vacunación - Estudios de eficacidad de la vacuna - Diferent regiones del mundo UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi Slide 16 Gracias Esta presentación está disponible en www.uicc.org/curriculum UICC HPV and Cervical Cancer Curriculum Chapter 2.d. Screening and diagnosis - HPV analysis and typing Prof. Suzanne Garland, MD; Prof. Sepehr Tabrizi
