Moleculas vasculares de adhesion en el LPO

Moleculas vasculares de adhesion en el LPO
Objetivo:Debido a que la aglomeracion y retencion de las celulas linfoideas parece
ser un componente critico de la patogenia del LPO, hemos comparado la
expresion y distribucion de un grupo de moleculas vasculares de adhesion (ELAM
1, selectina p, ICAM 1, VCAM 1, PECAM 1, CD34) y ligandos leucocitarios de
moleculas de adhesion (LFA 1, Mac 1, VLA4, Selectina L) en biopsias de esta
enfemedad.
Diseño del estudio:Se evaluaron inmunohistoquimicamente cortes congelados de
12 casos clinica e histologicamente confirmados de LPO y 9 controles normales,
con una tecnica normal de avidina-biotina de un día.La intensidad de la tinción del
epitelio vascular se evaluo semicuantitativamente.Se observaban 3 zonas o
compartimientos microvasculares definidos que fueron evaluados separadamente.
Resultados:Generalmente, se observaron patrones de tinción distintivos asociados
con las moleculas de adhesion.En los controles normales, el PECAM se
expresaba intensamente, mientras que el VACM1 lo hacia debilmente.Habia
tinción intermedia relacionada con el ELAM 1, la selectina p, el ICAM 1 y el
CD34.La tinción dentro de los tres compartimientos microvasculares mostro
frecuentemente variaciones en intensidad.Fue evidente en el LPO una mayor
tincion con el ELAM1, la selectina p, el ICAM1 y el VACM 1 en uno o mas de los
compartimientos microvasculares.En el compartimiento vascular subepitelial
donde fue mas denso el infiltrado, el VACM 1 parecio mostrar el mas grande
cambio positivo.Casi todas las celulas en el infiltrado del liquen plano se tiñeron
cuando se expusieron al ICAM 1, la selectina L, el LFA 1 y el VL4, asi como gran
numero de celulas tambien mostraban inmunoreactividad al VACM 1, el PECAM 1
y el Mac 1.
Conclusiones:Parece ser que la regulacion del ELAM1, el ICAM1 y el VACM1
(especialmente por medio de las celulas endoteliales en el plexo vascular
subepitelial) podria jugar un papel en la patogenia del liquen plano.La expresion de
los receptores selectina L, LFA 1 y VLA4 del leucocito por parte de la mayoria de
las celulas en el infiltrado del liquen plano sugiere que estas moleculas pueden ser
responsables de la aglomeracion asi como de la retención en la lesion activa de
liquen plano.
La aglomeracion de leucocitos en los sitios de inflamacion o de alteracion
inmunologica se asocia a eventos de adhesion entre celulas endoteliales y
leucocitos en cascada que afectan moleculas de varias familias (selectinas,
integrinas, superfamilia de las inmunoglobulinas).Las selectinas, la selectina L,
selectina E (molecula de adhesion leucocitaria endotelial, ELAM 1) y selectina P,
cuyos ligandos son carbohidratos de superficie celular, se cree que tienen que ver
con la adhesion de celula a celula, que se da en las primeras fases del proceso de
acumulacion de leucocitos.Las moleculas asociadas a los leucocitos de la familia
de la integrina estan involucrados en la adhesion leucocitaria al epitelio
vascular.Las integrinas beta2, el LFA 1 y el Mac 1 son ligandos del ICAM
1(molecula de adhesion intercelular).La integrina beta1, el VLA4, es un ligando del
VCAM 1 (molecula de adhesion vascular).Se cree que otra molecula de la misma
familia, el PECAM 1 (molecula de adhesion celular endotelial plaquetaria)
conjuntamente con un ligando no determinado, estan involucrados en la
aglomeracion de leucocitos.Se cree que tambien el CD34 asociado a vasos
sanguineos, que no se relaciona estructuralmente a ninguna de las tres familias
moleculares anteriormente mencionadas, esta asociado con la adhesion entre
endotelio y leucocito.Muchas de estas moleculas de adhesion se cree que estan
involucradas en la retencion de estos leucocitos en el foco de la enfermedad.
El LP se caracteriza microscopicamente por un intenso infiltrado de celulas T con
grandes numeros de macrofagos y dendrocitos XIIIa+, localizados en la interfase
entre epitelio y tejido conectivo.A partir de lo que se conoce sobre la cinetica
leucocitaria en los tejidos, la atracción de estas celulas hacia un lugar con una
enfermedad activa requiere la regulacion mediada por la citoquina de las
moleculas de adhesion por las celulas endoteliales y la expresion de las moleculas
receptoras por los linfocitos y macrofagos.
La expresion alterada de la celula endotelial del ELAM 1, ICAM 1 y VCAM 1 ha
sido reportado en LP oral, lo cual indica que juegan un papel en la patogenia de la
enfermedad.
Otras celulas de adhesion vascular, tales como la selectina p, el PECAM 1 y el
CD34, que pueden contribuir a la aglomeracion de linfocitos, no han sido
evaluados en el LP.
El proposito de esta investigacion fue el comparar la expresion y distribucion de un
conjunto de moleculas vasculares de adhesion (ELAM 1, selectina p, ICAM 1,
VCAM 1, PECAM 1, CD34) de potencial importancia en el LP y comparar los
resultados con la expresion de las mismas moleculas en tejido normal.Ademas,
tambien se evaluaron los ligandos de las moleculas de adhesion leucocitarias
(LFA 1, Mac 1, VL 4, selectina L) en el infiltrado celular en el LP.
Material y metodos.
Las muestras de biopsia oral de LP (10 de mucosa bucal, 2 de encia) se dividieron
antes de ser procesadas, la mitas de cada muestra fue congelada inmediatamente
en nitrogeno liquido para obtener cortes congelados, y la mitad fue puesta en
formalina para cortes parafinizados.
Los diagnosticos de los 12 casos clinicamente aceptables de LP oral se
confirmaron con cortes teñidos con Hematoxilina y Eosina.Los criterios
microscopicos requeridos para su inclusion fueron: hiperqueratosis, vacuolizacion
del estrato basal, necrosis de algunas celulas basales, y un infiltrado linfofagocitico
limitado a la union entre epitelio y tejido conectivo.Los pacientes (8 mujeres, 4
hombres) tenian una edad promedio de 50 anos (rango; 32 a 67 años).7 pacientes
tenian sintomas orales descritos como quemazon o incomodidad; dos de este
grupo tenian ulceraciones asociadas.Ninguno de los pacientes estaban bajo algun
tratamiento para el LP, y ninguno estaba tomando drogas que causaran
reacciones liquenoides.4 pacientes tenian LP limitado solo a la mucosa bucal, y
ocho tenias otros lugares afectados.Los tejidos de control normales consistian de
4 muestras de mucosa bucal de lugares no afectados en 4 de los pacientes con
LP y 5 muestras de encia de adultos sanos sin LP.
Se hizo la tinción inmunohistoquimica para evaluar la expresion de las moleculas
de adhesion asociadas a las celulas endoteliales. (ELAM 1, selectina p, ICAM 1,
VCAM 1, PECAM 1, CD34) y receptores moleculares en el leucocito (selectina L,
LFA 1, Mac 1, VLA 4).(Tabla 1).Los cortes congelados de LP y los cortes controles
de la mucosa oral se incubaron con anticuerpos monoclonales; tambien se usaron
cortes embebidos en parafina para evaluar la expresion del CD34.Se uso una
tecnicade 1 día de peroxidasa de avidina-biotina.Los cortes fueron revelados en
aminoetilcarbazol y sus contrapartes con hematoxilina de Mayer.Los controles
negativos consisitian de cortes tisulares en los cuales el anticuerpo primario fue
remplazado con suero de raton.
La intensidad de la tincion del endotelio vascular se evaluo semicuantitativamente
con una escala de tinción de la siguiente forma: tinción ligera (+), moderada (++) e
intensa (+++).Los diversos espacios microvasculares (capilares enrrollados en el
tejido conectivo de la papila, el plexo vascular subepitelial, y la red vascular
submucosa) se evaluaron por separado.aunque la division de la microvasculatura
en tres compartimientos fue de alguna forma artificial, fue practica y util debido a
que la tincion endotelial fue frecuentemente diferente en estas zonas.Se estimaron
porcentajes de celulas que se tiñeron positivamente en tres campor
representativos a gran aumento para los leucocitos.
Resultados
Moleculas vasculares de adhesion en la mucosa normal
En general los tejidos de control de la mucosa bucal y la encia dieron resultados
similares, aunque las muestra de la encia mostraron una intensidad de tincion
ligeramente mayor asociada con el ELAM 1 y el VCAM 1
Se observaron diferentes patrones de tincion en asociación con las diversas
moleculas de adhesion asociadas al endotelio (Tabla II).El PECAM fue la molecula
de adhesion que se expreso con mas intensidad, tiñendo todos los vasos en los
tres compartimientos microvasculares mucosos. (fig 1).El VCAM 1 fue la molecula
examinada que se tiño mas debilmente y se limito esencialmente a las celulas
endoteliales en los capilares del tejido conectivo papilar.En contraste, el ELAM 1 y
la selectina p o se expresaban debilmente o no se expresaban en los capilares
antes mencionados, pero eran evidentes en los vasos sanguineos inferiores.La
intensidad de la tincion para el ICAM 1 y el CD34 fue intermedio entre los dos
extremos.Aunque el CD34 se vio en cortes congelados, era mas intenso y tenia
mejor contraste en cortes embebidos con parafina.La tincion con CD34 se
encontraba tipicamente en la superficie luminal de las celulas endoteliales.
Moleculas de adhesion leucocitaria en la mucosa normal
En la submucosa, una pequeña cantidad de celulas redondeadas con morfologia
ya sea de linfocito o de macrofago se tiñeron positivamente para el ICAM 1 y la
selectina L (Tabla II).El LFA 1 fue responsable de la tinción de grandes cantidades
de celulas de la misma forma.Las celulas dendriticas del tejido conectivo en la
submucosa superior ocasionalmente se tiño positivamente para el VCAM 1, el
PECAM1, el Mac 1 y el VLA4.En la submucosa profunda, una poblacion al parecer
diferente de celulas dendriticas fueron positivas al CD34.Raramente, las celulas
dendriticas intraepiteliales se tiñeron poco positivamente para el VL4.
Moleculas vasculares de adhesion en el liquen plano
El PECAM 1 parecio ser expresado maximamente tanto el LP como en los
controles (Fig 2).Un aumento de la tincion para el ELAM 1, la selectina p, el ICAM
1 y el VCAM 1 fue evidente en uno o mas de los compartimientos
microvasculares.(Tabla
II)(Figuras
3-6)Ocasionalmente el
plexo
vascular subepitelial (dentro del infiltrado linfoideo) se tiño menos intensamente
con el ELAM 1, la selectina p y el CD 34 que en los otros dos compartimientos
vasculares.Como en los cortes de control normales, la tinción con CD34 fue de
mejor calidad en los cortes embebidos en parafina y fijados en formalina.Un
intensidad de tincion algo reducida o similar para esta molecula fue evidente en los
vasos subepiteliales dentro del infiltrado. Moleculas de adhesion molecular en el
LP
Casi todas las celulas en todos los infiltrado del LP se teñian positivamente con el
ICAM 1, la selectina l, el LFA 1 y el VL4(Fig 7).Grandes numeros de celulas
tambien ostraban inmunoreactividad al VCAM 1, PECAM 1 y el Mac 1(Tabla
II)/Las celulas dendriticas intraepiteliales (presumiblemente celulas de
Langherhans) mostraban regulacion del ICAM 1, el PECAM, la selectina L, el LFA
1 y el VLA4.
Discusion
La expresion de un conjunto de moleculas vasculares de adhesion tienen que ver
con el movimiento de leucocitos desde el sistema vascular a los espacios
extracelulares.Bajo condiciones normales, subconjuntos de leucocitos que llevan
los receptores para estas moleculas, infiltran sitios especificos, tales como la
mucosa, donde desempeñan una función de sobrevivencia.En condiciones
inmunes o de inflamacion, la regulacion de las moleculas vasculares de adhesion
es responsable de la acumulacion y retencion de los infiltrados que tipifican a las
enfermedades.Tanto el sitio como la especificidad de la enfermedad se cree que
estan relacionados a la expresion endotelial de una combinacion de moleculas
vasculares de adhesion, las cuales en si pueden ser reguladas por citoquinas
especificas para cada enfermedad, tales como el TNFalfa, el IL 1 y el interferon
gama.El lugar, la mucosa oral y la enfermedad, el LP, por lo tanto se esperaria que
sean caracterizadas por la expresion de una conjunto especifico de moleculas
vasculares de adhesion (y citoquinas).Aun no se determinado si hay moleculas
vasculares de adhesion que se alojen exclusivamente en los linfocitos de la
mucosa oral.
Moleculas de adhesion en la mucosa normal.
En la mucosa oral normal, la expresion de moleculas vasculares de adhesion varia
de un compartimiento microvascular a otro.Normalmente, el endotelio del capilar
enrrollado expresa el ICAM 1 y el VCAM 1 debilmente y el PECAM 1 y el CD34
mas intensamente.El epitelio que recubre el plexo vascular subepitelial, el cual
incluiria capilares, arteriolas y venulas, expresa todas las moleculas excepto el
VCAM 1.La tincion de los vasos mas profundos de los vasos tampoco muestran
expresion del VCAM 1.Estas diferencias regionales de tincion de la
microvasculatura de la mucosa oral sugiere que hay una regulacion independiente
de esta moleculas, y que los leucocitos normales en transito pueden estar
asociados con la expresion segmentaria de diversas moleculas de adhesion
especificas.
Los resultados de la tincion de la mucosa normal sugiere que la celula en transito
esta muy asociada con la expresion leucocitaria del LFA 1 y menos con la
selectina L.La expresion por las celulas redondeadas y las celulas dendriticas en
el tejido conectivo de varias moleculas de adhesion examinadas esta
probablemente relacionada a la comunicacion de celulas a celulas asi como a la
retención en el lugar.Las celulas dendriticas de la parte superior del tejido
conectivo por virtud de su posición y morfologia, probablemente representan parte
de una poblacion de dendrocitos XIIIa relacionados a los macrofagos.Las celulas
dendriticas mas profundas positivas al CD34 parecen representar una poblacion
diferente de celulas dendriticas cuyo origen y funcion son indeterminadas.
Moleculas de adhesion en el liquen plano
La aglomeracion del infiltrado linfofagocitico caracteristico del LP puede estar
relacionado a la expresion endotelial de un tipo caracteristico o grupos de
moleculas de adhesion y a la expresion reciproca de receptores especificos por los
linfocitos circulantes y macrofagos.Una comparacion de los resultados de todas
las moleculas asociadas a los vasos muestra que la regulacion de el ELAM 1, el
ICAM 1, el VCAM 1 y la selectina 1 es importante para el mantenimiento o
persistencia de las lesiones de LP.La expresion endotelial del ELAM (selectina E)
y la selectina p, moleculas de adhesion que son operativas en los estadios
tempranos de la unión endotelio-leucocito, se puede expresar en el LP debido a la
aglomeracion leucocitaria continua y persistente.
Debido a que el VCAM 1 no es expresado por los neutrofilos, esta molecula puede
ayudar a seleccionar macrofagos y linfocitos.La regulacion del VCAM 1 fue de
particular interes debido a que los cambios fueron mas dramaticos en los vasos en
los cuales el infiltrado fue mas denso.En constraste, la ligera disminucion del
ELAM 1 y la selectina p de los vasos en el mismo lugar sugiere que estas
moleculas pueden ser menos importantes que el VCAM 1 para la regulacion
celular en esta zona microvascular.Se ha sugerido que una modulacion negativa o
disminuida del CD34 se asocia con la adhesion leucocitaria al endotelio.
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