Jacqueline Maisonnave

Inmunología Veterinaria
Aplicada a Salud Animal
20 a 31 de julio 2015
Posgrado
Inmunología Veterinaria Aplicada a Salud Animal
20 a 31 de julio 2015
Medicina Regenerativa Veterinaria en Uruguay
Jacqueline Maisonnave
 En 2007 (Curso de Inmunología Veterinaria de PG) el Prof. Kent
Erickson (hablar de Stem cells). Comencé a Trabajar en Cels Madre
Mesenquimales (CMM) / Tronco.
 Primer aislamiento, expansión y criopreservación (A/E/Crio) de CMM
equinas derivadas de MO (esternón)
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Células madre mesenquimales (CMM)
Células adherentes, multipotentes progenitoras del
mesodermo
seleccionadas espontáneamente en cultivo sin fraccionar y provenientes
de diversos tejidos del individuo adulto.
Características:
• Adherentes al plástico
• Multipotentes
• División asimétrica
• Autorrenovación moderada
Yaneselli
4
Fuente de extracción de CMM
• En los últimos 30 años se han estudiado CMM-MO, como
fuente primaria de células para su uso en investigación y
nuevas terapias.
• Actualmente,
los estudios se han centrado sobre las
CMM derivadas de tejido adiposo (TA) que presenta tres
grandes virtudes.
Alta capacidad proliferativa.
II. Mínimo discomfort.
III. Perdura en estado indiferenciadas mayor número de
pasajes in vitro.
I.
Yaneselli
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Línea de investigación con Células Madre en el Área
Inmunología, Fvet, UdelaR
Extracción del TA
Procesamiento de TA
Criopreservación
Expansión
de las CMM-TA
Foco de mi presentación
Medicina regenerativa
Aislamiento
Yaneselli
Imágenes adaptadas de Yoshimura K. et al. (2010)
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¿Por qué investigar a las CMM?
Existe gran interés por investigar la aplicación en nuevas terapias
regenerativas mediante el uso de CMM.
Poseen cinco características atractivas para su aplicación.
I.
II.
III.
IV.
V.
Multipotencialidad
Inmunomodulación
Angiogénesis
Migran al foco inflamatorio (homing)
Poder Antimicrobiano
Yaneselli
¿Cuándo puedo denominar a las CEM en
CMM?
Se deben caracterizar las células según las recomendaciones de la ISTC
Multipotencialidad
Tridiferenciación in vitro
Adiposo
Condro
Oseo
Inmunofenotipificación
Detectar marcadores de superficie
CD44 +
CD45 -
CD90 +
 2010 comenzamos con A / E / Crio de CEM y CMM – MO caninas
Caniche
 Grupo CSIC “Medicina Regenerativa Veterinaria” creado en 2010
(multidisciplinarios)
 Primer Tratamiento Células Estromales Mesenquimales (CEM)-MO autólogas
Antes
Después Fijación
B
C
C) Radiografía lateral de fémur:
se aprecia no-unión crónica 2
meses post-fijación externa.
A
A) Radiografía lateral de
la fractura del fémur
B) Fijación externa
Después Terapia Celular
E
Resultados
D
D) Aplicación de CEM-MO 1x106
pase 4, en la no-unión.
E) Radiografía lateral de fémur 8 semanas post-terapia celular: se
aprecia zona una más radiodensa en la zona de no-unión, indica
comienzo de actividad de osteogénesis.
Recuperación clínica = camina y corre
Publicaciones
Primer caso tratado en 2010 con CEM en Uruguay
 SEMIGLIA, G; FILOMENO, A; ZUNINO, J;
GORDON-FIRING,
R;
YANESELLI,
K;
MAISONNAVE, J. “Preliminary results on the use
of autologous mesenchymal bone marrow-derived
cells on a canine non-union femoral fracture”.
Evento: Internacional, 2nd North American
Veterinary Regenerative Medicine Conference,
Lexington,
Kentucky,
USA,
2011
 Segundo caso no-unión y osteomelitis tratado con CMM-TA alogenicas
(Banco CMM – Area Inmunología)
Tratamiento con antibióticos Clindamycin, 1 mes antes de llegar al hospital
sin resultados
Antes
Sasha
Affected forearm, day 0.
Notes: (A) Fistulas. (B) Lateral radiograph. (C) Frontal
radiograph. The red arrows show the site of nonunion.
The blue arrows show bone fragments and sites of
osteogenesis and osteolysis.
Después del tratamiento con CMM-TA ( 5 implantes percutáneos 2×106 CMM-TA = Total 10×106)
Affected forearm, week 16.
Notes: (A) No fistulas. (B) Lateral radiograph. (C)
Frontal radiograph. The violet arrows show areas of
reabsorption and bone regeneration.
1 año después
Publicaciones
2012
2013
TERAPIA REGENERATIVA CON CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES
ALOGÉNICAS, APLICADAS EN CASOS CLÍNICOS CON DEFECTOS
ÓSEOS EN CANINOS
Caso N°1 (macho 5 años)
A
Antes
6 meses antes fractura = cirugía conse implantó hueso xenogénico en el canal
medular con fijación esquelética externa.
Después
1 año Post CMM-TA Percutanea
TRAMIENTO
B
4 implantes de percutáneos 5,4 - 9,7 x
osteomielitis
bordes irregulares, fistulas
01/2013 (1 mes antes ATB)
106
CMM-TA, c/ 15 días
CMM-TA: caracterizadas por
tridiferenciación y citometria flujo
Resultados
• eliminación de los bordes óseos irregulares
característicos de la osteomielitis
• fístulas fueron disminuyendodesaparecieron a las 7 semanas
•
No hubo signos de rechazo a las CMM-TA alogénicas, ni reacciones adversas posteriores a un
año de seguimiento en el paciente
TERAPIA REGENERATIVA CON CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES
ALOGÉNICAS, APLICADAS EN CASOS CLÍNICOS CON DEFECTOS
ÓSEOS EN CANINOS
Caso N°2 (hembra 7 años)
A
C
Antes
CMM-TA: caracterizadas por
tridiferenciación y citometria flujo
6 meses Post
B
TRAMIENTO (3 implantes)
D
1) 4x106 CMM-TA sobre injerto intramedular de hueso
desantigenizado bovino
2) Percutáneo 17 semanas post cirugía (2-5x106 CMM-TA
alogenicas)
3) Percutáneo 19 semanas post cirugía (2-5x106 CMM-TA
Fractura expuesta MAD
alogenicas)
Esquirla prominente
Resultados
Mejoría clínica progresiva, pasando del no apoyo del miembro
afectado al apoyo total en 20 semanas
regeneración y unión ósea de todos los
cabos de la fractura (flechas blancas) y
esquirla (flecha roja)
No hubo signos de rechazo a las CMM-TA alogénicas, ni reacciones adversas posteriores
a 6 meses de seguimiento en el paciente.
DIFUSIÓN
Universidad de la República
Facultad de Veterinaria
TESIS DE GRADO
APLICACIÓN DE TERAPIA REGENERATIVA CON CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES ALOGÉNICAS,
APLICADAS EN CASOS CLÍNICOS CON DEFECTOS ÓSEOS EN CANINOS
por
Heike Agnes Díaz Harmssen
Jornadas Técnicas Veterinarias – Facultad de Veterinaria
Aplicación de células madre mesenquimales alogénicas en casos
clínicos con defectos óseos en caninos.
Díaz, Heike1; Yaneselli, Kevin2; Semiglia, Gabriel3. Maisonnave, Jacqueline4
Aplicación de PRP y Parches de Fibrina Sobre un Caso Clínico de un Equino
Deportivo fue exitoso
Hembra raza Sangre Pura de Carrera de 4 años
Antes
Fractura en loseta completa de hueso carpiano III, en cara
dorsomedial del mismo, con leve desplazamiento proximal
•
Aplicación intraarticular de PRP autólogo (7.87 x108 plaquetas)
Después
 1 MES post aplicación, se observó consolidación de la
línea de fractura, con remodelación ósea
1 mes post-tratamiento comenzó ejercicio gradual
Antes
1 mes luego de consolidación de la línea de fractura, con remodelación ósea,
Se enganchó en alambrado
 Tratamiento tradicional: lavado, curabichera diarios
Se realizaron 3 aplicaciones de parches de fibrina, las semana 0, 1 y 2 del tratamiento.
•
•
Se fotografiaba la herida c/7 días hasta el cierre completo de la misma.
Se realizó medición del área de la herida en las fotografías utilizando el software ImageJ.
Día 0
A
Día 15
B
reducción del 50% herida y
formación islotes vasculares
Día 60
C
herida se redujo 10%
del tamaño origina
Día 80
D
D
Cierre completo de la herida
4 meses post-tratamiento el equino comenzó a realizar entrenamiento intensivo
Terapia Regenerativa en lesiones de piel en Equinos
Equino Sangre Pura de Carrera
5 sem post Trat Reg
Tratamiento Regenerativo
Aplicación semanal de PRP intradérmico
peri lesional y parches de fibrina tópicos.
Se tomaron fotografías semanalmente y se
midió el área de las mismas con el software
“ImageJ”, con el fin de evaluar la evolución de
las heridas.
Resultados
Se constató una mejoría al mes de iniciado el
tratamiento, observándose tejido de granulación
y áreas de epitelización y reducción del tamaño
de las heridas.
Caso clínico N°2: La reducción
del área de la herida fue de 51%
en cuatro semanas, alcanzando
un 71% a la quinta semana
(Figura 2, C y D).
Terapia Regenerativa en lesiones de piel en Equinos
2 meses post
Trat. Reg.
Resultados
Se constató una mejoría al mes de iniciado el tratamiento, observándose
tejido de granulación y áreas de epitelización y reducción del tamaño de
las heridas.
Caso clínico N°3: La evolución de la herida fue favorable, observándose una
mejora en el aspecto de los tejidos y una reducción del 60% en dos meses
Terapia Regenerativa en lesiones de piel en Equinos
PRP intradérmico peri lesional y parches de fibrina tópicos.
• No produjo reacciones adversas tras su aplicación
• No representaron altos costos para el dueño de los animales debido a
la baja complejidad de las técnicas utilizadas y la factibilidad de
aplicación en condiciones de campo.
DIFUSION
Jornadas Técnicas Veterinarias – Facultad de Veterinaria
Aplicación de terapia regenerativa en lesiones de piel en equinos
Campbell, Valeria1; Mondino, Alejandra2; Hernandez, Victoria 3; Mirazo, Javier 4;
Ferreira, Oscar5; Yaneselli, Kevin6; Maisonnave, Jacqueline7.
Modelo experimental heridas cutáneas
Tratamiento regenerativo en la reparación de heridas cutáneas en
un modelo murino.
24 ratas, heridas 1cm2
6 grupos: Tratamientos (intradérmicas)
Control
NaCl al 0,9%
CMM caninas
CEM rata alogénica
Gel de Fibrina
CMM caninas y GF
CEM rata y GF
Evaluación: c/3 días signos inflamación y día 7 y 10 fotografiadas = área programa Image J
Resultados
 CMM xenogénicas y CEM alogenicas = aceleraron la contracción de heridas
 Gel de Fibrina no difirió del Control
UNIVERSIDAD DE LA REPUBLICA
FACULTAD DE VETERINARIA
Tesis de Grado
Jornadas Técnicas Veterinarias – Facultad de Veterinaria
Tratamiento regenerativo en la reparación de heridas cutáneas en un modelo murino.
Muchas gracias !!!