"Inmunología al alcance del veterinario de campo. Vacunación y diagnóstico".
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Inmunología al alcance del veterinario de campo. Vacunación y diagnóstico. Dr. Rodrigo Puentes Área de Inmunología – Dpto. Ciencias Microbiológicas Facultad de Veterinaria – UdelaR 2014 Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay ¿Quiénes son los enemigos? Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Analogía del Sistema Inmune con las defensas de un país Escuela Militar = Timo Cuarteles = ganglios linfáticos Rutas = vasos sanguíneos y linfáticos Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Analogía del Sistema Inmune con las defensas de un país tanques = células Misiles = Anticuerpos Mensajeros = citoquinas Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Secuencia de acontecimientos en una Respuesta Inmune Sistema Inmune innato Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Sistema Inmune adaptativo Los Linfocitos T colaboradores son muy importantes para una eficiente respuesta inmune!! Los linfocitos T colaboradores se diferenciarán en distintas poblaciones celulares, que modularán la respuesta inmune a partir de las citoquinas producidas por ellos. Th2 Th1 IL-4 IL-5 IL-6 IFN-ɣ IL-2 TNF-α IL-9 IL-10 IL-13 Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay El sistema Inmune es específico y produce anticuerpos y/o activa células contra muchas porciones de los antígenos Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Principales mecanismos efectores según tipo de patógeno Bacterias extracelulares Bacterias intracelulares/protozoos Virus Helmintos Macrófagos/ Macrófagos/ Macrófagos/ Macrófagos/ dendríticas dendríticas Dendríticas dendríticas Neutrófilos Linf. Th1 (IFN-γ) Linf. TCD8+ Mastocitos Linf. Th1/Th2 Linf. Th1 (IFN-γ) Eosinófilos Linf. B Linf. B Linf. Th2 IgM IgM Linf. B IgG IgG IgE IgA IgA Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Algunas consideraciones sobre técnicas diagnósticas aplicadas en la sanidad animal Si bien el veterinario clínico no necesita poseer un conocimiento profundo sobre las técnicas diagnósticas, sí debe saber qué resultados puede esperar de cada una de ellas. Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Abortos: Clasificación de los principales agentes etiológicos Período 1996-2002 (Fuente: DILAVE, MGAP. La Paloma – Rocha año 2003) 37% ? 42% 2% 1% 2% Bacterias Hongos 16% Virus Parasitos Distocia Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Sin diagnóstico ¿Qué técnica diagnóstica solicito al laboratorio? Inmunofluorescencia Inmunohistoquímica Aislamiento ELISA Histopatología Radioinmunoanálisis Hemoaglutinación IDGA Seroneutralización Western blot PCR Real time PCR Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay PRIMER PREGUNTA: ¿A quien estamos buscando? “huella” patógeno Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Tipo de infecciones y momento adecuado para la toma de muestra en los animales Animal enfermo Animal luego de la enfermedad Signos clínicos Acs y células tiempo Infección Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Producción de anticuerpos patógeno Tipo de infecciones y momento adecuado para la toma de muestra en los animales Animal luego de la enfermedad patógeno Acs y células Límite detección Acs tiempo Infección Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Producción de anticuerpos Signos clínicos Animal enfermo Diagnóstico de Leucosis bovina IDGA PCR ELISA Real time PCR Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de Leucosis bovina Monti et al., 2005 Rama et al., 2010 Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de Leucosis bovina IDGA ELISA PCR Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Variaciones en los títulos de anticuerpos anti Leucosis bovina en vacas en el período de transición Tesis Maestría Lic. Gonzalo Rama – Facultad de Ciencias – 2013 Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Técnicas de Inmunofluorescencia Conjugado anti virus Rábico Presencia del virus en el cerebro del bovino Sensibilidad 100% Especificidad 94,3% Ribas et al., 2005 Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de BVDV mediante detección del agente Histopatología Aislamiento ELISA – ag + Aborto por BVD RT-PCR IHC ¿otras causas? Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de BVDV mediante pruebas serológicas Títulos de anticuerpos Rodeo positivo con animales PI Fallas reproductivas o abortos Rodeo positivo con riesgo PI o rodeo negativo Lanyon et al., 2014 Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de IBR mediante detección del agente Tejidos fetales Contenido estomacal Cotiledones Descarga vaginal Histopatología Aislamiento ELISA – ag + Aborto por IBR PCR Hisopados oculares y/o nasales IHC Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay ¿otras causas? Diagnóstico de IBR mediante detección del agente Concordancia entre las distintas pruebas diagnósticas para detectar el virus HISTOPATOLOGÍA* vs INMUNOHISTOQUÍMICA = valor kappa 0.80 PCR vs INMUNOHISTOQUÍMICA = valor kappa 0.90 HISTOPATOLOGÍA* vs PCR = valor kappa 0.91 PCR vs AISLAMIENTO VIRAL = valor kappa 0.49 Mahajan et al., 2013 * Cuerpos de inclusión intranucleares acidófilos en varios órganos incluyendo placenta y presencia de encefalitis no supurativa. Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de IBR mediante pruebas serológicas Alonzo et al., 2010 Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Diagnóstico de IBR mediante pruebas serológicas Diagnóstico positivo de BoHV utilizando 3 técnicas diferentes (n=248) Eficiencia de las técnicas serológicas utilizando como referencia la nested-PCR 213 111 Nested PCR SN in vitro 127 ELISA Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Cuidados al interpretar el resultado de una técnica diagnóstica VERDADERO POSITIVO – implicaría una infección real FALSO POSITIVO – atribuidos a interacciones cruzadas entre distintos microorganismos. VERDADERO NEGATIVO – indicaría una ausencia de infección FALSO NEGATIVO – toma de la muestra en etapas muy tempranas de la infección por ejemplo o técnicas poco sensibles. Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Vacunación en bovinos: Algunos conceptos a tener en cuenta. Vacunación y protección Importancia del calostro Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Conc. de anticuerpos en sangre Respuesta de anticuerpos esperada luego de dos vacunaciones IgG IgM IgM 3-4 d 7-10 d IgG 1 2 3 4 5 6.........................14, 15 Conc. de anticuerpos en sangre Respuesta de anticuerpos esperada luego de dos vacunaciones IgG IgM 3-4 d 7-10 d 1 2 3 4 5 6.........................14, 15 Inmunización vs protección en un animal Concentración de anticuerpos PROTEGIDO INMUNIZADO Límite de protección + Límite de detección de anticuerpos – tiempo Que el animal tenga anticuerpos, no siempre significa que esté protegido contra la enfermedad!! Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Inmunización vs protección en un rodeo Límite de protección Límite de detección de anticuerpos Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Importancia del calostro para el ternero Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Anticuerpos maternales Anticuerpos producidos por el animal a Límite de protección Límite donde la respuesta a la vacuna está inhibida En general, la duración de la inmunidad pasiva en terneros varia mucho, pudiendo durar 2-4 meses (bacterias) hasta 6-9 mese (algunos patógenos víricos). Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay Concentración de anticuerpos séricos “Cuando existe concentraciones muy altas de inmunoglobulinas séricas se deprime la síntesis normal de anticuerpos”. Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay ¿Cómo responde una población luego de una vacunación? Mala respuesta Respuesta Media Excelente respuesta 80 % 10 % 10 % Dr. Rodrigo Puentes – Facultad de Veterinaria - Uruguay
