IA-MBA-PE-008 Control de Ambiente y Superficies de

Elaborado por: Analista
LANASEVE
Rige a partir de:
28/03/11
Código:
IA-MBA-PE-008
Control de Ambiente y Superficie de
Cámaras de Flujo Laminar y Mesas de trabajo
Versión 04
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Revisado por: Coordinador Técnico de Sección
Aprobado por: Jefe de Sección
1. Objetivo
Establecer un procedimiento para el control microbiológico del ambiente y las superficies de las mesas de
trabajo y las cámaras de flujo laminar.
2. Alcance
Se aplica al Laboratorio de Microbiología de Alimentos
3. Responsabilidad y Autoridad
El Jefe de sección debe velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este procedimiento.
El Coordinador Técnico de Sección debe velar por el cumplimiento de las normas establecidas en este
procedimiento.
El analista debe ejecutar las actividades descritas en este procedimiento.
4. Definiciones
No aplica
5. Abreviaturas y/o Siglas
No aplica
6. Referencias
IA-MBA-PE-008-RE-001 Análisis de superficie
IA-MBA-PE-008-RE-002 Control de ambiente y superficies
IA-MBA-PE-004-RE-001 Limpieza de mesas de trabajo y cámaras de flujo laminar
Manual para el control de calidad de los alimentos
7. Descripción del Procedimiento
7. 1 Materiales
Hisopos estériles
Bolsas estériles con esponja
Petrifilm Recuento Aerobio
Petrifilm Recuento de Hongos y Levaduras
Tubos de 10 ml de Agua peptonada
Tubos de 10 ml y 15 ml de Buffer Butterfield
Tubos de 10 ml de Caldo D/E Neutral
Tubos de 5 ml de Caldo Letheen
Agua peptonada
Caldo Ec modificado
Caldo UVM Listeria
Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no
controlada
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7.2
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Control de ambiente
7.2.1 Agregar 1 ml de butterfield a la placa de petrifilm Recuento Aerobio y presionar con el
dispensador.
7.2.2 Dejar a temperatura ambiente por 30 minutos para que solidifique el agar.
7.2.3 Exponer por 15 minutos en el área a ser muestreada; con una cinta adhesiva pegada en la
parte externa se sostiene la parte superior del petrifilm.
7.2.4 Mantener encendida la cámara durante el tiempo de exposición de la placa y en las mesas de
trabajo el mechero encendido.
7.2.5 Incubar a 35 ºC  2 ºC por 48 horas.
7.2.6 Realizar el conteo de las colonias por placa, reportar como número ufc/15 min / 40 cm2 para
recuento de Mesófilos y ufc/15 min / 60 cm2 para recuento de Hongos.
7.2.7 Registrar los resultados en el formulario IA-MBA-PE-008-RE-002 Control de ambiente y
superficies
7.2.8 Evaluar los resultados obtenidos ;si se obtiene un valor mayor al límite de aceptación (1 ufc/min)
se deben tomar las acciones correctivas necesarias (ver apartado 7.5)
7.2.9 Realizar el control de ambiente una vez al mes en las mesas de trabajo y las cámaras de flujo
laminar.
7.3 Control de limpieza y desinfección de superficies
7.3.1 Realizar el control de superficie en un área previamente desinfectada.
7.3.2 Introducir un hisopo estéril en un tubo de 5 ml de Caldo Letheen.
7.3.3 Frotar con el hisopo un área de aproximadamente 50 cm2
7.3.4 Introducir en el tubo el hisopo y agitar bien.
7.3.5 Pasar 1 ml de ese cultivo a un petrifilm de Recuento de Aerobios, presionar con el
dispensador.
7.3.6 Incubar a 35 ºC  2 ºC por 48 horas.
7.3.7 Contar las colonias y calcular el número ufc/cm2 de la siguiente forma:
Nº ufc x 5 ml
50 cm2
7.3.8 Registrar los resultados en el formulario IA-MBA-PE-008-RE-002 Control de ambiente y
superficies
7.3.9 Evaluar los resultados obtenidos de acuerdo a la siguiente tabla:
Resultado
0-10 ufc/cm2
10-100 ufc/cm2
Mayor de 100 ufc/cm2
Evaluación de limpieza y desinfección
Conforme
Parcial
No conforme
7.3.10 Tomar las acciones correctivas necesarias si se obtiene una condición parcial o no conforme
de la limpieza de la superficie de trabajo analizada (ver apartado 7.5).
7.3.11 Realizar este control una vez al mes en las mesas de trabajo y las cámaras de flujo laminar.
Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no
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7.4 Análisis de Superficie (Determinación de patógenos)
7.4.1 Realizar el control de superficie en un área previamente desinfectada.
7.4.2 Hidratar una esponja estéril con el medio de cultivo adecuado de acuerdo al tipo de análisis,
como se detalla a continuación:
Análisis
Medio hidratante
Medio de enriquecimiento
E.coli O157:H7
10 ml de Butterfield
100 ml Caldo Ec modificado
Listeria monocytogenes 10 ml de Caldo D/E Neutral
200 ml Caldo UVM Listeria
Salmonella spp.
10 ml de Agua Peptonada
50 ml Agua Peptonada
7.4.3
7.4.4
7.4.5
7.4.6
7.4.7
7.4.8
7.5
Muestrear un área de 0,4 m2 aproximadamente de cada una de las mesas de trabajo y todo el
área de las cámaras de flujo laminar.
En el caso de la determinación de E.coli O157:H7 agregar 15 ml de Butterfield después de
tomar la muestra.
Seguir los análisis de acuerdo a la metodología empleada por el laboratorio.
Registrar los resultados en el formulario IA-MBA-PE-008-RE-001 Análisis de superficie.
Tomar las acciones correctivas necesarias si se determina la presencia de los
microorganismos patógenos: E.coli O157:H7, Listeria monocytogenes, Salmonella spp. (ver
apartado 7.5)
Realizar el análisis de patógenos cada tres meses en las mesas de trabajo y las cámaras de
flujo laminar.
Acciones correctivas
7.5.1 Si en el resultado del control de ambiente se obtiene un valor mayor de 1 ufc/min se deben
revisar el estado del filtro de la cámara, limpiarlo y desinfectarlo debidamente.
7.5.2 Cuando en el control de limpieza de superficie se obtiene un RT mayor de los niveles
aceptables se deben revisar el registro IA-MBA-PE-004-RE-001 para verificar si se realizó una
limpieza pre-operatoria y post-operatoria. En el caso de que se haya realizado la limpieza
previa y se detectara un RT mayor de 10 ufc/cm2 se debe evaluar el estado de la solución de
desinfectante en uso (verificar la fecha de vencimiento, la concentración, etc) para decidir si se
debe utilizar un nuevo desinfectante.
7.5.3 Cuando alguno de los análisis de E.coli O157:H7, Listeria monocytogenes y/o Salmonella spp.
da un resultado positivo se deben revisar el registro IA-MBA-PE-004-RE-001 y evaluación del
desinfectante en uso. Tomar las medidas necesarias y volver a realizar el análisis de
superficie de nuevo. Si el proceso está bajo control y se determina nuevamente un resultado
positivo se debe cambiar el desinfectante.
7.6 Equipo de protección y medidas de Bioseguridad
Se aplican las normas de bioseguridad para laboratorios de nivel NB-2 Potencial Moderado
8. Anexos
No aplica
Normativo Propiedad del SENASA, el documento vigente se encuentra en INTERNET cualquier versión impresa es una copia no
controlada