CONTROL DE PRECISIÓN FOTOMÉTRICA

COLEGIO DE BIOQUÍMICOS DE JUJUY
SUB COMISIÓN DE CONTROL DE CALIDAD
CONTROL DE PRECISIÓN FOTOMÉTRICA
Una de las causas importantes en la aparición de errores analíticos es la falta de
reproducibilidad de los resultados, El espectrofotómetro puede contribuir a esa falta
de reproducibilidad cuando da lecturas inestables. El objetivo de ésta práctica es el
estudio de la repetibilidad de las lecturas de absorbancia del espectrofotómetro y el
control de la exactitud fotométrica dependiendo las soluciones a utilizar de las
longitudes de onda a controlar:
340 nm: solución de Dicromato de potasio en ácido sulfúrico 0,01 M
510 nm: solución de Nitrato de cobalto en ácido sulfúrico 0,37 M
540 nm: solución de Cianmetahemoglobina o Sulfato de cobre pentahidratado en
medio ácido.
Alicuotar por ejemplo la solución de dicromato de potasio en 10 porciones y medir
los valores de absorbancia de cada una.
Hallar la media, la desviación estándar y el coeficiente de variación.
El valor de CV deberá ser inferior a 1 % para cubetas paralelas y 2 % para tubos de
fotocolorimetría.
Precisión fotométrica: grado de repetibilidad de las medidas de absorbancia. Se
calcula midiendo varias veces la absorbancia de una solución y calculando la
imprecisión de las medidas como el coeficiente de variación porcentual. Las causas
que contribuyen a un aumento de la imprecisión fotométrica son: ruido instrumental,
inestabilidad de la corriente de alimentación, mal ajuste de la cubeta en el
compartimiento portacubetas, técnica del operador, etc.
Exactitud fotométrica: diferencia entre la absorbancia leída y la absorbancia real
de una solución.
Procedimiento:
Espectrofotómetros manuales:
1) Encender el espectrofotómetro el tiempo que indique el fabricante antes de
realizar las lecturas.
2) Llevar a 340 nm el selector de longitud de onda. En caso de no poseer esa
longitud de onda, elegir la más cercana e indicarla en la planilla de resultados.
3) Seleccionar una cubeta en buen estado (sin rayaduras, deformaciones y
limpia), con la que se realizarán todas las medidas de absorbancia. Introducir
la cubeta en el compartimiento de medida respetando siempre la misma
orientación al realizar las lecturas.
4) Llevar a cero de absorbancia con agua destilada, con la cubeta seleccionada.
5) Llenas la cubeta con la solución de dicromato y medir la absorbancia,
registrándola en una planilla de resultados
6) Repetir nueve veces más, vaciando y volviendo a llenar la cubeta cada vez,
con la solución de dicromato.
Espectrofotómetros con bomba de aspiración:
1) Encender el espectrofotómetro el tiempo que indique el fabricante antes de
realizar las lecturas.
2) Llevar a 340 nm el selector de longitud de onda. En caso de no poseer esa
longitud de onda, elegir la más cercana e indicar en la planilla de resultados.
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3) Llevar a cero de absorbancia con agua destilada. Aspirar aire.
4) Aspirar la solución de dicromato y registrar la absorbancia en la planilla de
resultados.
5) Aspirar aire.
6) Repetir el procedimiento nueve veces más, aspirando aire entre cada alícuota
medida.
Autoanalizadores:
1) Seleccionar la longitud de onda de 340 nm. En caso de no poseer esa
longitud de onda, elegir la más cercana e indicarla en la planilla de resultados.
2) Cargar en una copa de reacción agua destilada para realizar el blanco.
3) Cargar la solución de dicromato en 10 copas de reacción y leer la
absorbancia de cada una de ellas.
4) Si el camino óptico de las cubetas de reacción fuera distinto de 1 cm,
normalizar todas las lecturas de absorbancia a 1 cm de paso de luz de la
siguiente manera:
Absorbancia normalizada = Absorbancia leída / Camino óptico (en cm)
5) Registrar las absorbancias normalizadas en la planilla de resultados.
Si tiene alguna duda de cómo realizar estas mediciones con su equipo automático,
le aconsejamos se comunique con el servicio técnico de su fabricante.
A) Precisión
Longitud de onda: 340 nm
Solución utilizada: dicromato de potasio
Absorbancia
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
Promedio
Coeficiente
de Variación
Imprecisión aceptable: < 1 %
B) Exactitud
Inexactitud = [ (Promedio – Absorbancia real) / Absorbancia real ] 100
Inexactitud aceptable : < 2 %
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