Universidad de Puerto Rico-Aguadilla Departamento de Ciencias Naturales Instrucciones para libreta de laboratorio/investigación Dr. José A. Cardé 1. La información de ejercicios realizados en un laboratorio se organizará en una libreta asi denominada: libreta de laboratorio. Para los efectos de este curso la libreta debe ser cocida, con cubierta dura, y papel cuadriculado. (no tiene que ser un lab notebook como tal). Debe ser escrita en tinta y cada página debe estar numerada. Los errores no se deben borrar ni arrancar, solo tacharlos con una línea e firmados con las inciales. La idea es que se mantenga pensando en que otra persona que la lea pueda leer y entender lo que usted ha hecho. La libreta, debe traerse todos los días al laboratorio y puede recogerse (por el profesor) cualquier día sin previo aviso por lo que debe estar siempre al día. 2. Tabla de contenido: Debe tener título para cada experimento y el número de página en la libreta, debe ser incluida al comienzo de la libreta. 3. QUE DEBE INCLUIRSE EN LA LIBRETA? Esencialmente TODO lo que tu haces en el laboratorio debe incluirse en la libreta. La de laboratorio debe estar organizada por experimentos solamente, la de investigación como un registro diario por fecha. Comienza cada nuevo experimento en una página nueva. La página llevará un título para el experimento la fecha y el número de la página. Este número es importante para el índice, parar referencias en otros experimentos y para rotular materiales usados en otras páginas. Si el experimento se extiende mas de una página anota bien donde continua si no es en la próxima página. Cada experimento debe incluir: 4. Título/Propósito u objetivos: Cada experimento debe tener un título el cual debe ser descriptivo, por ejemplo: Purificación a gran escala del plásmido pXGH-5. Objetivo: Obtener DNA de plásmido pXGH-5 para transformar células de levadura. Para investigación, cuando comience un nuevo proyecto, una buena idea es introducir la estrategia general antes de comenzar con el primer experimento. Esto se hace con dos propósitos. 1), te obliga a pensar y repasar en lo que estarás haciendo y en porque algunas cosas se ven distintas cuando se escriben comparadas a cuando se piensan. 2) una buena descripción de lo que es tu hipótesis, tu racional y tus estrategias experimentales con buena documentación es de mucha ayuda a la hora de defender, convencer explicar repasar y estudiar. 5. Información de trasfondo: Esta sección debe incluir cualquier información que sea pertinente para la realización del experimento o para la interpretación de los resultados. Por ejemplo, si se esta repitiendo un experimento, establece con claridad que se esta haciendo diferente para ver si funciona. Un dibujo sencillo puede ayudar. ESTA NO es como la introducción de un artículo. Cada dibujo y/o tabla con su descripción. Incluye todo aquello que sea de ayuda para llevar a cabo el experimento y para descifrarlo mas tarde. Por lo general las libretas NO se escriben para HOY sino mas bien para el FUTURO. 6. Materiales: Esta sección debe incluir materiales claves, soluciones, equipos que se necesitarán. Puedes incluir cada pieza de material que se necesite como vortex, micropipetas y pero debes incluir cualquier equipo especializado incluyendo el fabricante, como espectrofotómetro, thermocycler etc, y los parámetros utilizados al menos la primera vez. Luego puedes obviar algo de esto. La composición de todos los amortiguadores debe incluirse a menos que sean comunes o estén en las referencias. Kits pre-empacados deben mencionarse con el nombre del kit, el vendedor y el número de catálogo. Muestras biológicas deben identificarse por género, especie, cepa, tipo de tejido y/o genotipo y fecha, lo que aplique para que luego sea fácil de ubicar. Las enzimas se deben identificar por nombre, fabricante, concentración y dilución 1 si se usa. Muestras de DNA deben ser identificadas como: 1 tipo de DNA, (cromosomal, plasmido) 2: pureza (miniprep, purificado de gel, producto de PCR), 3 concentración si se conoce, 4: fuente (si es del experimento anterior, etc). Esto es imperativo para que la próxima vez que tome la libreta sepa donde terminó, donde pararon la muestras, que se dejo dializando en que bolsita etc… Incluye todos los cálculos hechos para preparar las soluciones. Las secuencias de oligonucleótidos usados, deben incluirse o poner la referencia. Las geles de agarosa deben identificarse por porciento y por el amortiguador usado (TAE, TBE). Si alguno de estos materiales se usaron en experimentos previos, se puede hacer referencia al experimento y fecha para no repetir todo. 7. Procedimiento: Escribe exactamente lo que vas a hacer ANTES de hacerlo y asegurate de que entiendes cada paso ANTES de hacerlo. Es su responsabilidad traer este resumen hecho en la libreta al comienzo del lab. En general las fotocopias de protocolos no se deben aceptar por varias razones: 1) Debe incluir todo lo que haces incluyendo todos los volúmenes y cantidades; algunos protocolos están escritos para uso genérico y deben adaptarse para una aplicación específica. 2) Escribir con claridad un procedimiento ayuda a recordar y entender de que trata. Ayuda también a identificar los pasos claves o los que no están claro o que necesita atención especial. 3) Algunos protocolos son de 2 o 3 páginas porque tienen mucho detalle o mas información de la necesaria para la libreta. Sin embargo es una buena práctica de laboratorio tener otra libreta sólo para los protocolos que se usan comúnmente, (impresos o a mano pero solo el protocolo). Si estas repitiendo un experimento previo no tienes que escribir cada paso de nuevo necesariamente sino referirte al anterior por la página en donde esta. Si haces cambios entonces anotas los cambios y explicas porque. Diagramas de flujo son útiles para experimentos que tienen muchas partes. Tablas también son útiles si un experimento incluye un set de reacciones con múltiples variables. Una vez se van realizando la partes es una buena estrategia irlas marcando como ya hechas como cuando añades un reactivo para no volver a añadirlo o para que no se te olvide añadirlo. Todos los protocolos deben tener referencias. 8. Resultados: Esta sección incluye TODA la data cruda, fotografías de geles, impresos, conteos de colonias, autoradiografías, etc. Todos los carriles en la gel deben estar rotulados y se identifica la fuente y la cantidad de los estándares, bandas. Esta sección deben incluir también la data analizada, por ejemplo eficiencia de transformación, cálculos de actividades específicas o de actividades enzimáticas. Cantidad de DNA purificada, nivel de pureza. La foto de la placa con las colonias, y el resultado de cuantas colonias se obtuvieron. 9. Discusión y Conclusiones/Resumen: Una de las secciones mas importantes. Debes resumir todos tus resultados, aun si fueran mencionados antes y presentar las conclusiones que puedas hacer. Si el experimento no funcionó, lo que estuvo malo, y lo que harías en el próximo para tratar de resolver el problema. 10. Referencias: Si se hace referencia a algún artículo, o capítulo de libro para el experimento o para algún protocolo que se use por primera vez. 11. Apéndice: Copias, fotos, diagramas, pdfs, artículos, paginas que se hayan usado durante el trabajo y no son parte del informe pero que pueden ayudar a entender mejor el informe. 2