SOP OCP en sedimentos

PROCEDIMIENTO
PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
SEDIMENTOS Y SUELOS
Hoja 1 de 7
Rev.1
PROCEDIMIENTO PARA LA EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN
DE PESTICIDAS ORGANOCLORADOS (OCP) EN MUESTRAS
DE SEDIMENTOS Y SUELOS
1.
2.
3.
4.
Introducción
Objetivo
Alcance
Realización
4.1. Extracción
4.2. Purificación
4.3. Paso a vial
4.3. Adición del patrón interno o de jeringa
5. Anexos
5.1. Acondicionamiento del Florisil
5.2 Preparación de las columnas del Florisil
5. Histórico de modificaciones
Febrero 2011
Elaborado por:
Revisado por:
Aprobado por:
Fdo.: M.G. Martrat
LABORATORIO DE DIOXINAS
IDÆA-CSIC
Fecha: 8/02/2011
Fdo.- E. Abad
LABORATORIO DE DIOXINAS
IDÆA-CSIC
Fecha: 11/02/2011
Fdo.- H. Fiedler
UNEP Chemicals Branch
Fecha: 15/02/2012
PROCEDIMIENTO
PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
SEDIMENTOS Y SUELOS
Hoja 2 de 7
Rev.1
1. INTRODUCCIÓN
Este procedimiento ha sido elaborado en el Laboratorio de Dioxinas del Departamento de
Química Ambiental del Instituto de Diagnóstico Ambiental y Estudios del Agua (IDÆA) del
Consejo Superior de Investigaciones Científicas (CSIC) de Barcelona (España), en el Marco de
Colaboración con el Programa de las Naciones Unidas para el Medio Ambiente (PNUMA) para
dar apoyo a la Implantación del Plan de Vigilancia Mundial de Contaminantes Orgánicos
Persistentes (COP)1 bajo el Convenio de Estocolmo. El programa incluye a los países
participantes en Latinoamérica y el Caribe en los proyectos de capacitación de los laboratorios
financiados por el Fondo para el Medio Ambiente Mundial (FMAM)2, así como del Enfoque
Estratégico para la Gestión de Productos Químicos a Nivel Internacional (SAICM)3.
Las personas participantes en la elaboración de este documento:
Dr. Esteban Abad Holgado
Dra. Heidelore Fiedler
Prof. Josep Rivera Aranda
Dra. Manuela Ábalos Navarro
Sra. Laura Morales Pérez
Sr. Jordi Sauló Dalmau
Sra. Mª Generosa Martrat Castellví
Sr. Jordi Parera Costa
Sr. Miquel Àngel Adrados León
Sr. Karell Martínez Guijarro
Sr. Joan Rivera Austrui
2. OBJETIVO
El objetivo del Plan de Vigilancia Mundial (PVM) es apoyar la evaluación de la eficacia del
Convenio de Estocolmo en relación a las concentraciones ambientales de fondo mediante medios
que tienen un gran potencial de comparabilidad. La Conferencia de las Partes ha decidido que sea
la vigilancia del aire y la exposición en leche materna o sangre humana, los medios prioritarios
para la primera evaluación.
El objetivo del presente procedimiento es describir la sistemática seguida para la extracción,
y purificación del análisis de pesticidas organoclorados (OCP) en muestras de sedimentos y
suelos.
1
2
3
En inglés: Global Monitoring Plan for Persistent Organic Pollutants (GMP)
En inglés: Global Environment Facility (GEF)
En inglés: Strategic Approach to International Chemicals Management (SAICM)
PROCEDIMIENTO
PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
SEDIMENTOS Y SUELOS
Hoja 3 de 7
Rev.1
3. ALCANCE
Este procedimiento describe la sistemática seguida para la extracción y purificación del
análisis de OCP en muestras de sedimentos y suelos.
4. REALIZACIÓN
4.1. EXTRACCIÓN
4.1.1. Pesar aproximadamente 5 g de sedimento seco o suelo y 2.5 g de cobre en polvo
en un cartucho de vidrio Soxhlet con una precisión de 0.1 g. Introducir el cartucho
en un cuerpo Soxhlet de 250 mL y acoplar el conjunto a un matraz esférico de 500
mL previamente identificado con la referencia de la muestra y añadido varios
gránulos de porcelana porosa.
4.1.2. Fortificación (Sólo para método de la dilución isotópica):
4.1.2.1.Por pesada:
4.1.2.1.1. Sacar el vial con el patrón marcado de la nevera y esperar a que
alcance la temperatura ambiente.
4.1.2.1.2. Coger un vial de 1mL. Tararlo en una balanza analítica, y con la ayuda
de una micropipeta o jeringa de vidrio medir el volumen de patrón
necesario para realizar la fortificación. Pesar el vial con el patrón
adicionado en una balanza analítica.
4.1.2.1.3. Medir aproximadamente 10 mL de hexano. Con una pipeta Pasteur,
trasvasar el patrón contenido en el vial sobre la muestra. Con una pipeta
Pasteur, trasvasar parte de los 10 mL de disolvente al vial que contenía el
patrón. Con una pipeta Pasteur, vaciar el vial sobre la muestra. Repetir los
pasos anteriores hasta que no quede disolvente. Tapar la parte superior del
cuerpo Soxhlet con papel de aluminio y dejar reposar durante 2h antes de
iniciar la extracción con Soxhlet.
4.1.2.2.Por volumen:
4.1.2.2.1. Con la ayuda de una micropipeta o una jeringa de vidrio medir el
volumen de patrón necesario para realizar la fortificación. Añadir el
patrón a la muestra. Tapar la parte superior del cuerpo Soxhlet con papel
de aluminio y dejar reposar durante 2h antes de iniciar la extracción con
Soxhlet.
4.1.3. Retirar el papel de aluminio y tapar el cartucho de vidrio Soxhlet con un poco de
lana de vidrio lavada.
PROCEDIMIENTO
PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
SEDIMENTOS Y SUELOS
Hoja 4 de 7
Rev.1
4.1.4. Añadir al cuerpo Soxhlet, procurando mojar toda la muestra en el cartucho, 200
mL de Hexano medido con probeta, y 200 mL de cloruro de metileno también
medidos con probeta. Provocar el reflujo para que prácticamente todo el volumen de
disolvente quede contenido en el matraz.
4.1.5. Colocar el conjunto Soxhlet y matraz en una manta calefactora y acoplar un
refrigerante a la boca del cuerpo Soxhlet. Sujetar bien todo el conjunto para
mantener su estabilidad.
4.1.6. Verificar que el agua de refrigeración esta abierta y ajustar la potencia de la manta
calefactora asegurando una medida aproximada de 3-4 reflujos por hora.
4.1.7. Dejar extraer la muestra durante 24 h. Apagar la manta calefactora y dejar enfriar
hasta temperatura ambiente.
4.1.8. Si queda disolvente en el cuerpo Soxhlet provocar el reflujo para que todo el
volumen quede contenido en el matraz y dejar secar el cartucho al aire apoyado en la
boca del cuerpo Soxhlet. Separar el matraz del resto del conjunto.
4.1.9. Si se observa la presencia de un precipitado en el matraz se ha de seguir el
siguiente procedimiento:
4.1.9.1. Concentrar el extracto hasta aproximadamente 5-10 mL procurando que la
temperatura del baño no supere los 30ºC para evitar perdidas de nuestros
compuestos por evaporación.
4.1.9.2.Con la ayuda de un embudo de forma alemana sobre el que se coloca un filtro
de fibra de vidrio, filtrar el extracto y recogerlo en un matraz esférico de 250
mL, previamente identificado con la referencia de la muestra. Añadir 2-3 veces
aproximadamente 2 mL de hexano al matraz original, para limpiarlo y tratar de
recoger todos los restos de precipitado. Filtrar el disolvente de lavado a través
del mismo filtro.
4.1.9.3.Introducir el filtro en un cuerpo Soxhlet de 250 mL y acoplar el conjunto al
matraz esférico de 500 mL de la extracción inicial, añadiendo si es necesario
varios gránulos de porcelana porosa.
4.1.9.4.Proceder a la extracción del filtro siguiendo el paso 4.1.3, 4.1.4, 4.1.5, 4.1.6,
4.1.7 y 4.1.8.
4.1.9.5.Concentrar el extracto procedente de la extracción del filtro procurando que la
temperatura del baño no supere los 30ºC. Reunir el extracto inicial y el
obtenido en la extracción del filtro en uno de los matraces empleados, con la
ayuda de una pipeta Pasteur. Añadir 2-3 veces aproximadamente 2 mL de
hexano al matraz que se descarta para limpiarlo y trasvasar el disolvente de
lavado al otro matraz.
PROCEDIMIENTO
PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
SEDIMENTOS Y SUELOS
Hoja 5 de 7
Rev.1
4.1.10. Concentrar el extracto, procurando que la temperatura del baño no supere los
30ºC, hasta un volumen aproximado de 2 mL.
4.2. PURIFICACIÓN
4.2.1. Una vez preparada la columna de Florisil según el punto 5.1, colocar bajo la
columna un matraz esférico de 250 mL previamente identificado con la referencia
de la muestra y fracción primera. Asegurarse que la llave de la columna esté
cerrada.
4.2.2. Medir 200 mL de éter de petróleo: dietil éter al 6% con la ayuda de una probeta,
disolver el residuo de muestra contenido en el matraz. En el menor volumen
posible de éter de petróleo: dietil éter al 6% de la probeta y con la ayuda de una
pipeta Pasteur transvasar la muestra a la cabecera de la columna. Lavar el matraz
que contiene la muestra con unos mililitros de éter de petróleo: dietil éter al 6% o
(de los de la probeta de 200 mL) y transvasarlos a la cabecera de la columna.
Lavar el matraz seis veces como mínimo. El volumen final será de 200 mL.
4.2.3. Abrir la llave para que comience la elución de la columna.
4.2.4. En el momento en que el hexano llega a la cabecera de la columna de sulfato de
sodio se cierra la llave.
4.2.5. Se retirará el matraz de 250 mL y se colocará otro de 250mL etiquetado con el
nombre de la muestra y fracción segunda adicionar 200 mL de una disolución éter
de petróleo: dietil éter al 15% a la columna de Florisil. Abrir la llave para que
comience la elución. En el momento en que el hexano llega a la cabecera de la
columna de sulfato de sodio se cierra la llave.
4.2.6. Se retirará el matraz de 250 mL y se colocará otro de 250mL etiquetado con el
nombre de la muestra y fracción tercera. Adicionar 200 mL de una disolución éter
de petróleo: dietil éter al 50% a la columna de Florisil. Abrir la llave para que
comience la elución. La columna de Florisil se considera finalizada cuando todo el
disolvente haya eluido a través de la columna.
4.2.7. Concentrar los extractos, procurando que la temperatura del baño no supere los
30ºC
4.3. PASO A VIAL
4.3.1. Con una pipeta Pasteur, trasvasar el extracto contenido en el matraz procedente de
la columna de Florisil en un vial de 2 mL. Concentrar el extracto del vial bajo una
corriente de nitrógeno. Cuando el volumen contenido en el vial es de unos 20 µL
se realizan los lavados del matraz que contenía la muestra. Con una pipeta
PROCEDIMIENTO
PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
SEDIMENTOS Y SUELOS
Hoja 6 de 7
Rev.1
Pasteur, trasvasar 2 mL de hexano al matraz que contenía la muestra. Con una
pipeta Pasteur, trasvasar el contenido del matraz al vial. Repetir los pasos
anteriores 4 veces más. Finalmente, dejar el vial bajo la corriente de nitrógeno
hasta que llega a sequedad.
4.4. ADICIÓN DEL PATRÓN INTERNO O DE JERINGA
4.4.1. Por pesada:
4.4.1.1.
Sacar el vial con el patrón marcado de la nevera y esperar a que alcance la
temperatura ambiente.
4.4.1.2.
Coger el vial que contiene la muestra. Tararlo en una balanza analítica, y
con la ayuda de una micropipeta medir el volumen de patrón interno o de
jeringa necesario y adicionarlo al vial de muestra. Pesar el vial con el patrón
adicionado en una balanza analítica.
4.4.2. Por volumen:
4.4.2.1.
Con la ayuda de una micropipeta o una jeringa de vidrio medir el volumen
de patrón interno o de jeringa necesario y adicionarlo al vial de muestra.
5. ANEXOS
5.1. ACONDICIONAMIENTO DEL FLORISIL
5.1.1 Pesar la cantidad de Florisil correspondiente al número de muestras a las que se
les va a realizar la purificación en una cápsula de porcelana.
5.1.1. Colocar la cápsula en el horno mufla.
5.1.2. En el indicador del horno mufla marcar la temperatura de activación del Florisil
(675ºC)
5.1.3. Ponerla en marcha y dejar el Florisil en activación como mínimo 16h
5.1.4. Una vez transcurridas el tiempo mínimo de activación, parar la mufla y dejar
enfriar.
5.1.5. El Florisil se ha de utilizar dentro del día siguiente a su activación o se ha de
volver a activar.
5.2. PREPARACIÓN DE LA COLUMNA DE FLORISIL
5.2.1. Coger una columna de vidrio de 1.5 cm. de diámetro y 60 cm. de longitud y
colocar una base de lana de vidrio.
PROCEDIMIENTO
PARA LA EXTRACCIÓN Y
PURIFICACIÓN DE
ANÁLISIS DE PESTICIDAS
ORGANOCLORADOS
(OCP) EN MUESTRAS DE
SEDIMENTOS Y SUELOS
Hoja 7 de 7
Rev.1
5.2.2. Pesar y añadir dentro de la columna 20 g de Florisil, activado tal y como se
describe en el apartado 5.1 del presente procedimiento.
5.2.3. Pesar y añadir dentro de la columna 2 g de sulfato sódico
5.2.4. Después de cada adición golpear ligeramente la columna para evitar la formación
de caminos preferenciales.
5.2.5. Acoplar el matraz de adición.
5.2.6. Eluir la columna con 50 mL de hexano.
5.2.7. Antes de que se seque cerrar la llave
6. HISTÓRICO DE MODIFICACIONES.
FECHA DE MODIFICACIÓN
REFERENCIA DE LAS MODIFICACIONES REALIZADAS
REVISIÓN Nª
24/07/2012
Primera Edición
1