EL MICROSCOPIO ELECTRONICO

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PRACTICA 6
EL MICROSCOPIO ELECTRONICO
Con el
M.E. se consigue un considerable aumento del poder de resolución al
emplear en lugar de luz visible electrones acelerados cuya longitud de onda es unas 100.000
veces menor. Al ser de pequeña longitud de onda pueden contornear muy bien los objetos,
lo que proporciona un gran poder de resolución. Su masa es muy pequeña por lo que
pueden ser desviados con mucha facilidad. El aire los desvía y por ello se trabaja en tubos
huecos con un alto vacío, equivalente a 10-5 Torr (Torricelli o mm de mercurio). Para desviar
los electrones de un modo controlado se utilizan lentes que no son ópticas sino
electromagnéticas.
Imagen fotográfica de un Microscopio Electrónico
En resumen el funcionamiento es como sigue:
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Un FILAMENTO de tungsteno (cátodo) en un tubo a alto vacío se calienta
emitiendo electrones que tienden a seguir una trayectoria rectilínea.
Los electrones liberados por este filamento son sometidos a una diferencia de
voltaje de 60-120 kV entre el cátodo y el ánodo (un disco metálico con un orificio en
su centro). De esta manera los electrones son atraídos por el ánodo y acelerados
hasta que alcanzan altas velocidades.
Tras atravesar el orificio del ánodo forman un haz de electrones que recorren que
recorre la columna del microscopio. En el interior de la columna el haz pasa por el
interior de bobinas eléctricas y se desvía de manera análoga a lo que ocurre con un
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haz de luz que atraviesa una lente de cristal, dado que los electrones desvían su
trayecto cuando se someten a campos magnéticos. Por esta razón las bobinas del
ME se denominan “lentes electromagnéticas”.
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La primera lente es una lente electromagnética CONDESADORA que focaliza los
electrones sobre la muestra. Algunos electrones interaccionan con los átomos del
corte histológico al atravesarlo y continuar su trayecto hacia otras lentes, mientras
que otros atraviesan la muestra sin interaccionar con ésta.
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La mayoría de los electrones
alcanzan una segunda lente
Electro-magnética que funciona
como OBJETIVO dando una
imagen ampliada del objeto
que posteriormente es proyectada en otras lentes.
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Una tercera lente PROYECTORA actúa de ocular, volviendo a ampliar la imagen y proyectándola sobre una pantalla
fluorescente y/o sobre placas
fotográficas.
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Entre ambas lentes hay una
lente INTERMEDIA, también
electromagnética, que amplia s
una vez mas la imagen.
ESQUEMA DEL ME CON SUS COMPONENTES
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La imagen resultante siempre es en blanco y negro. Las áreas oscuras de una
electromicrografía se denominan electrodensas, mientras que las áreas claras se
denominan electrolúcidas o electrotransparentes.
PREPARACION DEL MATERIAL
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La fijación se realiza en glutaraldehido, que preserva menor loa tejidos que el formol,
seguida de postfijacion con osmio que impregna muchas estructuras proporcionando
contraste al chocar los electrones con la muestra.
La inclusión se realiza en resinas plásticas de epoxido o metacrilatos que
proporcionan una mayor dureza.
Los cortes han de ser extremadamente finos (entre 20 y 80 nm) lo que se consigue
con un ultramicrotomo.
Para contrastar el material no se usan colorantes, sino átomos de metales pesados
como el plomo y el uranilo, que acentúan el contraste proporcionado por el osmio.
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FIGURA 1
Electronografía de un tumor endocrino constituido por células que
sintetizan serotonina.
Cuestiones:
1) La imagen comprende partes de varias células. ¿Cuál es la razón de la
diferente densidad entre la célula central (clara) y las vecinas
(oscuras)?.
2) Diferencias de la cromatina de los dos núcleos presentes.
3) Clasificar los orgánulos citoplasmáticos según densidades.
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FIGURA 2
CORTE DE CELULA EPITELIAL
1. Describa la disposición del RER
2. Qué imagen puede dar el RER así dispuesto en un corte convencional al
microscopio óptico
3. A que se debe la estrecha relación entre el RER y las mitocondrias
4. Describa la estructura A
5. Describa la disposición de la cromatina.
FIGURA 3
CELULA PLASMATICA
1) Describa los componentes mas importantes de esta célula.
2) Debido a los orgánulos que posee ¿Cuál es la función de esta célula?
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FIGURA 4
PANORAMICA DE UN ACINO PANCREATICO
A) ¿Que son los espacios blancos que aparecen en el centro de la
imagen?
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B) Describa los orgánulos celulares. ¿Están dispuestos de algún modo
especial? ¿Guardan alguna relación con los procesos de la secreción
proteica?
C) ¿Hay alguna estructura de unión entre las células?
FIGURA 5
A) ¿Cuáles son los componentes mas abundantes en el citoplasma?
B) ¿Qué puede ser el área señalada por la flecha?
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C) ¿Cuál es la actividad nuclear de la célula?