ALT (Alanina aminotransferasa) y AST (Aspartato aminotransferasa)

INTRODUCCIÓN
En los procesos de análisis clínicos que involucren directamente al tejido hepático, resulta de gran utilidad el
determinar los niveles sericos de Transaminasas , como lo son la alanina aminotransferasa (ALT ó TGP) y la
aspartato aminotransferasa (AST ó TGO), ya que comparando los valores de actividad ALT v/s AST, es
posible determinar el origen hepático, ó en su defecto cardiaco , al observar alteraciones en estos patrones
enzimáticos.
Por otro lado , resulta muy útil para diferenciar hepatitis alcohólicas de otras hepatitis agudas, esto
relacionando AST/ALT: En las hepatitis alcohólicas(con necrosis) este índice es generalmente mayor a 1
(AST aumentada por sobre ALT), mientras que en las hepatitis virales es generalmente menor a 1 (AST
disminuida ante ALT).
En fin cualquiera que sea el caso , la determinación de estas enzimas adquiere importancia diagnóstica cuando
sus valores son enfrentados con valores de otras enzimas de similar origen tisular, permitiendo así completar
un perfil enzimático de órganos como el hígado.
MÉTODO DE REFERENCIA Y DE RUTINA
TGO
(AST, ASPARTATO AMINOTRANFERASA)
METODO DE IFCC (FEDERACION INTERNACIONAL DE QUIMICA CLINICA)
Descripción.
La Aspartato aminotransferasa es una enzima que se encuentra localizada tanto a nivel citoplasmático
como mitocondrial, de allí que se diga que es una enzima bilocular , se encuentra ampliamente
distribuida en músculo esquelético, riñón , cerebro y principalmente en higado y corazón, donde esta en
mayor concentración.Cualquier alteración en estos tejidos, se vera reflejado en un aumento en el
torrente circulatorio de esta enzima, el cual será directamente proporcional al daño tisular.
En aquellos pacientes con afecciones hepáticas se observan las mayores elevaciones de AST, sobre todo en
aquellos casos de hepatitis con necrosis.
Fundamento.
La reacción es catalizada por la TGO (AST), ésta desplaza la reacción hacia la formación de Oxaloacetato que
reacciona con la MDH (Malato Deshidrogenasa), de modo que la velocidad de oxidación del NADH medida a
340 nm, es directamente proporcional a la actividad de TGO en la muestra.
En el medio de reacción hay además LDH (Lactato Deshidrogenasa) suficiente para consumir los cetoácidos
de origen endógeno, evitando así su interferencia.
Reacción.
TGO
L−aspartato + 2−oxoglutarato Oxalacetato + L−glutamato
1
Oxalacetato + NADH + H+ L−malato + NAD+
MDH
Muestra.
• Suero, Plasma (Heparinizado, EDTA).
• Muestras hemolizadas no se aceptan ya que poseen elevados niveles de AST dentro de los eritrocitos.
Linealidad.
Si el cambio por minuto de absorbancia excede de 0.160 (340nm y 334 nm) ó 0.080 (365), diluir la muestra
1+ 4 con suero fisiológico. Multiplicar el resultado por 5.
La absorbancia inicial debe ser superior a 0.8 A. En caso de no serlo se puede estar en presencia de
actividades enzimáticas muy elevadas y obtener resultados erróneos. Diluir la muestra y reprocesarla.
Metodología de Análisis.
*Lectura: Hg 365 nm, 340 nm, 334 nm.
*Paso Óptico: 1 cm.
*Temperatura: 37°C.
*Medición: Contra aire.
Los reactivos y cubetas deben ser llevados a la temperatura del ensayo, la que debe mantenerse
constante durante el desarrollo del test.
Valores Normales.
Hombre
Mujer
37°C (U/L)
Hasta 37
hasta 31
Ventajas.
• Simple y Rápido
Desventajas.
• Resulta imposible o poco práctico modificar las mezclas reactivas preestablecidas.
• Sueros hemolizados dan valores falsamente aumentados.
• Los sueros con concentraciones de cetoácidos endógenos elevados generan valores
falsos elevados.
• Pacientes hemodializados o con hipovitaminosis u otras patologias asociadas con déficit de Piridoxal
Fosfato (coenzima), generan valores falsamente disminuídos.
Consideraciones.
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• A mayor temperatura se obtiene mayor sensibilidad , pero un menor rango de linealidad .
• La preincubación con parte del reactivo es para evitar interferencia con cetoacidos endógenos del
suero.
• El Piridoxal fosfato es una coenzima necesaria en la actividad de la TGO, por ello esta última se ve
afectada en ausencia de la misma. ejemplo: pacientes hemodializados o con hipovitaminosis.
• Para evitar contaminación de reactivos , usar pipetas nuevas y no intercambiar las tapas de los
reactivos.
MÉTODO DE RUTINA Y REFERENCIA.
TGP
(ALT, ALANINA AMINOTRANFERASA)
METODO IFCC (FEDERACION INTERNACIONAL DE QUIMICA CLINICA)
Descripción.
La alanina aminotranferasa es una enzima que tiene como única localización el citoplasma , de ahí que se le
denomine unilocular. Su mayor actividad la presenta en el tejido hepático y la menor actividad en músculo
esquelético, corazón, riñón, páncreas y eritrocitos (en ese orden).
Por lo tanto la destrucción o cambio en la permeabilidad de membrana celular provoca la liberación de ALT a
la circulación sanguínea. Su aumento se debe principalmente a alteración hepática (como colestiasis, hepatitis
tóxicas o virales).
En hepatitis viral el aumento de ALT precede a la aparición de ictericia, si los valores están aumentados por
sobre 6 semanas, nos debe hacer pensar en una hepatitis activa o el comienzo de una hepatitis crónica.
Fundamento.
La reacción catalizada por ALT esta desplazada hacia al formación de piruvato, que reacciona
inmediatamente con la LDH (Lactato Deshidrogenasa), de modo que la velocidad de oxidación del NADH,
medida a 340 nm, es proporcional a la actividad de ALT en la muestra. El exceso de LDH en el medio es para
consumir cetoácidos de origen endógeno, evitando así su interferencia.
Reacción.
TGP
L−alanina + 2−oxoglutarato Piruvato + L−glutamato
Piruvato + NADH + H L−lactato + NAD+
LDH
Muestra.
Suero, plasma heparinizado o EDTA.
El oxalato , la heparina no inhiben la actividad enzimática , pero pueden causar cierta turbidez.
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La ALT es estable en suero durante 3 dias a temperatura ambiente y hasta una semana a 4°C.En
la orina se encuentra poca o ninguna actividad, por lo cual no se recomienda para el análisis.
Porcentaje de pérdida de actividad.
10%
17%
Refrigerada
Hasta 25°C
Linealidad.
Si el cambio por minuto de absorbancia excede de 0.160 (340 nm y 334 nm) ó 0.080 (365 nm), diluir la
muestra 1 + 4 con suero fisiológico. Multiplicar el resultado por 5.
La absorbancia inicial debe ser superior a 0.80 A. En el caso de no serlo se puede estar en presencia de
actividades enzimáticas muy elevadas y obtener resultados erróneos. Diluir la muestra y reprocesarla.
Valores de referencia.
Hombre
Mujer
37°C (U/L)
Hasta 40
Hasta 31
Metodología de análisis.
• Lectura: Hg 365 nm, 340 nm, 334 nm.
• Paso Óptico: 1 cm.
• Temperatura: 37°C.
• Medición: contra aire.
Los reactivos y cubetas deben ser llevados a la temperatura del ensayo, la que debe mantenerse constante
durante el desarrollo del test.
Ventajas.
• Simple y Rápido.
• El uso de buffer TRIS nos permite que el NADH sea más estable que en otros métodos que usan
fosfato.
• El piridoxal 5−Fosfato(PP) es un activador más efectivo de la ALT en buffer Tris que en el de fosfato.
• Este método tiene una alta especificidad , carencia de interferencias, alta linealidda, reproductibilidad
y rapidez.
Desventajas.
• Sueros hemolizados generan valores falsos elevados, debido a que el eritrocito contiene 3 a 5 veces
más ALT que el suero.
• Sueros con concentraciones de cetoácidos endogenos elevados generan valores falsamente elevados.
Consideraciones.
• Muestras de pacientes hemolizadializados o con hipovitaminosis u otras patologías asociadas
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con déficit de Piridoxal Fosfato generan valores falsamente disminuidos.
• A mayor temperatura , mayor sensibilidad, pero menor rango de linealidad .
• Una absorvancia inicial bajo 0,800 D.O., estando reactivos en condiciones, indica una
• muestra con muy alta actividad de TGP. Por lo tanto es necesario diluir la muestra.
• Cuando la técnica se realiza como ensayo de punto final, la reacción presenta un efecto de
retroinhibición por piruvato, este disminuye la linealidad.
• No es conveniente modificar la formulación de un fabricante luego de adquirir los reactivos.
MÉTODOS ALTERNATIVOS.
Método de Reitman y Frankel.
Esta es una reacción acoplada con dinitrofenilhidrazina (DNPH). Es una técnica colorimétrica y cuantitativa.
Reacción.
Alanina + cetoglutarato Glutamato + Piruvato
Piruvato + DNPH Complejo formado por Pir−DNP−Hidrazona.
La lectura se hace a 505 nm. Es una reacción de punto final.
Es necesario un tiempo de retardo de la reacción con cetoglutarato, lo que permite el consumo de
cetoglutarato endógeno y todo otro proceso que consuma NADH. Este retardo no debe ser inferior a 90
segundos.
Muestra.
• Suero.
Método de Wrodlewski y LaDue.
Este es un método enzimático cuantitativo.
Alanina + cetoglutarato Glutamato + Piruvato
LD
Piruvato + NADH + H+ Lactato + NAD+
Esta es una medición del consumo de NADH a 340 nm. Es de uso muy frecuente.
La diferencia con el método de referencia es que este método requiere un tiempo de retardo no inferior
a 90 segundos antes de la reacción con cetoglutarato para permitir el consumo de cetoglutarato
endogeno y todo otro proceso que consuma NADH.
Además se recomienda un período de preincubación de 10 minutos con el cofactor piridoxal−5−fosfato.
Muestra.
• Suero
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MÉTODO ALTERNATIVO.
(método propuesto por la AACC)
A propuesto un método para los laboratorios pequeños de Química Clínica, el cual se diferencia del de
la IFCC en que:
1.− Se emplea un solo reactivo para evitar el procedimiento en dos pasos.
2.− La reacción se lee después de 150 segundos , durante los 180 segundos siguientes.
3.− No se agrega Fosfato de Piridoxal.
BIBLIOGRAFIA
Título: Procedimientos Técnicos de Laboratorio Clínico
Autor : Instituto de Salud Pública de Chile
Editorial: El Instituto
Santiago Chile 1994
Título: Química Clínica
Autor: Anderson, Shauna C.
Cackyne, Susan.
Editorial Interamericana.
Mexico 1995
Título: Química Clínica Métodos.
Autor: Pesce, Amadeo J.
Kaplan, Lawrence A.
Editorial Panamericana
B.A 1991 Argentina.
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