UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR FACULTAD DE CIENCIAS QUIMICAS ESCULA DE QUIMICA DE ALIMENTOS MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL AISLAMIENTO, SELECCIÓN, PRODUCCION DE BIOMASA Y PRESERVACIÓN DE CEPAS QUERATINOLITICAS DE BACILLUS SPP. PARA LA DEGRADACION DE PLUMAS DE AVES DE CORRAL BUSTIILLOS BELEN ESPINOSA CAROLINA FEIJOO TATIANA PORRAS DIEGO NOVENO SEMESTRE ALIMENTOS 2009 - 2010 1. TEMA AISLAMIENTO, SELECCIÓN, PRODUCCION DE BIOMASA Y PRESERVACIÓN DE CEPAS QUERATINOLITICAS DE BACILLUS SPP. PARA LA DEGRADACION DE PLUMAS DE AVES DE CORRAL 2. PROBLEMA En la mayoría de las plantas avícolas los subproductos del procesamiento no son debidamente aprovechados, constituyendo un alto porcentaje de desechos. 3. ANTECEDENTES Generalmente las plumas son destinadas a la elaboración de harinas que son utilizadas como suplemento alimenticio para aves. Este producto es obtenido por una combinación de los tratamientos térmicos (cocción a altas presiones) con los químicos (ácidos o alcalinos), procesos que no fragmentan los enlaces disulfuro en la queratina convirtiéndola en una proteína resiste, que dificulta la degradación enzimática por parte de las aves. 4. JUSTIFICACION La producción nacional de aves es de 19,595.058, de los cuales se obtiene un rendimiento en el procesamiento de pollo de aproximadamente 75 %, lo que indica que el 25% restante corresponde a desperdicios del procesamiento, en donde las plumas constituyen la mayor parte. Una de las alternativas propuestas para el aprovechamiento de la plumas de pollo, es mediante tratamientos fermentativos con microorganismos queratinolíticos (Bacillus spp.) capaces de degradarlas, mejorando así su digestibilidad y calidad nutricional debido a su enriquecimiento con proteína microbiana. 5. OBJETIVOS 5.1 OBJETIVO GENERAL Aislar, seleccionar y preservar cepas queratinoliticas (bacillus spp) para la degradación de plumas de aves de corral 5.2 OBJETIVO ESPECIFICO Obtener muestras de plumas blancas de pollo y muestras de suelo de los galpones avícolas. Seleccionar el medio de cultivo más adecuado para el crecimiento óptimo de los microorganismos degradadores de queratina a partir de plumas de pollo. Aislar las cepa queratinolitica de Bacillus spp. utilizando el medio de cultivo adecuado. Seleccionar la cepa con mayor capacidad de degradación queratinolitica. Realizar pruebas bioquímicas para conformación de Bacillus spp. Preservar las cepas puras mediante la técnica de crioconservación. Realizar la medición del crecimiento celular o biomasa, y determinar los parámetros cinéticos. Realizar las gráficas de ln de biomasa (ln X), biomasa (X), velocidad específica (µ) y velocidad instantánea (rx), para la cepa seleccionada (bacillus spp) en los dos medios (MRS y medio diseñado). 6. HIPOTESIS 6.1 HIPOTESIS NULA A pesar de que las plumas de pollo son fuente de carbono, energía y nitrógeno propias de la flora queratinolitica, no se espera el aislamiento, selección y preservación de cepas de bacillus spp. 6.2 HIPOTESIS ALTERNATIVA Al ser las plumas de pollo al ser una fuente de carbono, energía y nitrógeno propias de la flora queratinolitica, se espera aislar cepas de bacillus spp con buenos rendimientos. 7. MARCO TEORICO 7.1 Plumas de Pollo 7.1.1 Características Morfológicas: 7.1.2 Usos 7.2 Microorganismos 7.2.1 Características: Nivel de Bioseguridad Taxonomía Tipo de Cepa Tipo de Enzima Condiciones Aeróbicas Forma Pared Celular Movilidad Esporulación Condiciones de Vida Categoría Nutricional 1 Bacterias / Firmicutes / Bacilos / Bacillales / Bacillaceae / Bacillus spp. Degradador de Queratina Queratinasa Aerobio Estricto o Anaerobio Facultativo Bastón Tinción Gram (+) Positiva - Flagelación perítrica Positiva Temperatura: 4 – 55ºC Óptima: 26ºC pH óptimo: 4,3 – 9,3 Óptimo: 7-7,5 Quimioautótrofo 7.2.2 Metabolismo de las bacterias queratinolíticas: sulfitolisis de la lana provocan la ruptura del enlace disulfuro, dando lugar a un resto de ácido cisteinsulfónico y a otro de cisteina. A pH ácido puede tener lugar la reformación de un nuevo enlace disulfuro. Por otro lado, el ácido cisteinsulfónico no se protona en medio acuoso en todo el rango de pH dando a la lana un carácter aniónico El tratamiento de sulfitolisis se Ilevó a cabo en solución acuosa de BS 0.5% s.p.b. a pH 4.2 en un baño termostatizado a 60% durante 1 h. La concentración de hidrolizado proteico en el baño de tratamiento fue 1% s.p.b. La relación de baño fue 1/30 para el tejido de punto y 1/40 para cinta. También se realizó un tratamiento en blanco en las mismas condiciones pero sin adición de productos químicos. Los tratamientos se denominaron: B(BS):Tratamiento en blanco. BS: Tratamiento solo con bisulfito sódico. BS1HC:Tratamiento con bisulfito sódico en presencia de hidrolizado de colágeno. BS1HCC:Tratamiento con bisulfito sódico en presencia de hidrolizado de colágeno cuaternizado. BS1HQ:Tratamiento con bisulfito sódico en presencia de hidrolizado de queratina. BS1HQC:Tratamiento con bisulfito sódico en presencia de hidrolizado de queratina cuaternizado. 7.2.3 Fisiología 8. MARCO METODOLOGICO 8.1 METODOS GENERALES DE ANALISIS 8.1.1 Muestreo 8.2 METODOS ESPECIFICOS DE ANALISIS 8.2.1 Selección del Medio de Cultivo 8.2.2 Enriquecimiento 8.2.3 Aislamiento de Cepas Queratinolíticas 8.2.4 Selección de Bacillus spp. 8.2.5 Producción de Biomasa 8.2.6 Preservación de los microorganismos 9. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. http://www.sica.gov.ec/cadenas/maiz/docs/produc_avicolamod.html 2. http://www.atcc.org/ATCCAdvancedCatalogSearch/ProductDetails/tabid/452/Default.aspx 3. http://es.wikipedia.org/wiki/Bacillus