Determinación de proteínas

CASAALTIEMPO
PRACTICA DE LABORATORIO 2
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS
INTRODUCCIÓN
El termino proteína fue utilizado por primera vez por el químico alemán Gerardus Mulder, en 1838 , tomo este
nombre del vocablo griego PROTERIOS , que significa primordial nivel primario .
Las proteínas son un grupo de biopolímeros constituidos de aminoácidos que exhiben una amplia gama de
estructuras y funciones .
Las proteínas como un grupo de biomoleculas , desempeñan una gran variedad de funciones , algunas
participan en la contracción muscular y sirven para dar soporte estructural, otras trasportan y almacenan
moléculas pequeñas.
Los anticuerpos (moléculas que sirven para como protección inmunológica ) son proteínas al igual que las
enzimas (catalizadores biológicos) y algunas hormonas.
Las proteínas pueden llevar a cavo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de combinaciones en la
composición y secuencia de aminoácidos.
Las proteínas también se clasifican según su composición , las que se forman solo de residuos de aminoácidos
y no tienen otras biomoleculas son PROTEÍNAS SIMPLES; no odas las proteínas son solubles en agua , de
hecho las proteínas insolubles son esenciales para dar soporte y mantener la integridad estructural de las
células y organismos.
DESARROLLO
METODO DE BIURET
Material por equipo
• 1 proveta de 50ml.
• 2 gradillas
• 2 pipetas de 10ml
• 3 pipetas de 5ml
• 1 pipeta de1ml
• tuvos de15x100−12 piezas
• 1 vaso de presipitados de 100 ml
• 12 tubos de 16x150
• 1 balanza granataria
• papel parafilm para 10 tubos
• papel embudo y un filtro
REACTIVOS POR EQUIPO
• Agua destilada
1
• Solucion de acido acetico 0.1 N
• Solucion de Acetato de sodio 0.1 N
• Solucion de caseina (contenido 4 mg/ml)
• Reactivo de Biyret 50ml
MATERIAL TRAIDO POR EQUIPO:
• 6 gramos aprox. De leche en polvo descremada
• 1 plumon indeleble
• masking tape
• javon y franela para limpiar
DETERMINACIÓN DEL PUNTO ISOELECTRICO
En la preparación de tubos con solucion amortiguadora de acetatos en la grailla se colocaron 6 tubos de
15x100 rotulados con numeros consecutivos , se adiciono a caadad tubo las soluciones de acido acetico y
acetato de sodio con el siguiente orden :
TUBO SOLUCION DE ACIDO SOLUCION ACETATO DE
ACETICO 10.1 N SODIO 0.1N
1 5ml −
2 4 ml 1 ml
3 3ml 2ml
4 2ml 3ml
5 1ml 4ml
6 − 5ml
el volumen de cada tubo deberá de ser de 5 ml 1:30
PREPARACIÓN DE LA LECHE
En un vaso de precipitados de 100 ml se disolvieron 6 gr de leche en polvo descremada con 50 ml de agua
destilada incorporándola poco a poco para que no se formaran grumos .
En un tuvo de ensaye de 16x150 mm se midio 2ml de leche reidratada y añadimos 8ml de agua destilada
agitando cuidadosamente por inversión. 1:5
PUNTO ISOELECTRICO
Añadimos 1 ml de leche diluida (1:5) a cada tubo de la solución amortiguadora , después mezclamos
cuidadosamente todos los tubos y dejamos reposar por 10 minutos .
En el tubo 1 donde observamos los grumos de leche suspendidos en la solución se solubilizaron las proteínas
de leche
TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6
TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6
Después se separo el sobrante y se transfirió a los tubos limpios de 15x100 rotulados con el numero de tubo
que le correspondia.
2
• Tubo 1: CLARO
• Tubo 2 : CLARO CON SOBRENADANTE
• Tubo 3: CLARO CON SOBRENADANTE
• Tubo 4: CLARO CON SOBRENADANTE
• Tubo 5: TURBIO
• Tubo 6: TURBIO
DETERMINACIÓN DE PROTEINAS CON EL METODO DE BIURET
Se colocaron en una gradilla 11 tubos de 16x150 mm, rotulando a un tubo con el numero cero el cual llevo los
reactivos para calibrar el espectrofotometro , los siguientes 4 tubos los rotulamos de I al IV , y los restante los
rotulamos de 1 al 6.
Se añadio a cada tubo de reactivos para determinar las proteinas en la curva de calibración (I IV) y los
sobrenadantes en los tubos del 1 al 6 .
Mezclamos cuidadosamente cadad reactivo y los dejamos en reposo por 30minutos para favorecer el color .
TUBO 1 TUBO 2 TUBO 3 TUBO 4 TUBO5 TUBO 6
AZUL AZUL Y MORADO AZUL AZUL AZUL AZUL
TUBO I TUBO II TUBO III TUBO IV TUBO V TUBO VI
AZUL CLARO INTERMEDIO MORADO MORADO MORADO MORADO
RESULTADOS
En la siguente tabla estan los resultados que obtuvimos de absorvancia o densidad optica.
TUBO
I
II
III
IV
V
1
2
3
4
5
6
• Calcula el contenido proteico de los tubos I al IV deacuerdo al volumen empleado de la solucion en
estandar de caseina y colocalos en el eje x.
• Coloca los valores O.D obtenidos para cada uno de estos tubos en el eje y y traza la curva
correspondiente.
• Interpola los valores de O.D de los tubos 1−6 , calcula la cantdad de proteina precente en cada sobre
nadante
TABLA DE RESULTADOS.
PROTEINA
Sobrenadante1
Sobrenadante2
Sobrenadante3
Sobrenadante4
Sobrenadante5
Sobrenadante6
Mg/ ml
5.1
0.6
0.24
0.24
0.57
6.9
Mg/ 100 ml
510
60
24
24
57
690
3
• haciendo uso de la ecuación de HEENDERSON HASELBACH calcula el pH del tubo de donde
observaste la mayor precipitación de caseína.
0.4 mg proteina x 5x6x2 =24 mg proteina/ml
6g 1000 ml =120 g leche
30 ml 1 L L
2 ml + 8 ag
1 ml +5 = 6 ml 0.5+0.5 = 1 ml
24 g proteina
L = 0.2 g proteina
120 g leche g de leche
L
• Describa brevemente la ley de lambert y beer y cuales son sus limitaciones.
BIBLIOGRAFÍA
• Conceptos de bioquímica de Rodney Boyer
CONCLUSIÓN
Con el metodo de Biuret se le quitaron a la leche muchas de sus propiedades y al meter os resultados al
centrifugado la leche salio muy clarita cambiando su aspecto natural , cumpliéndose el objetivo pudimos sacar
el punto isoelectrico exacto
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