LOS MÉTODOS DE ESTUDIO DE LA CÉLULA Cuaderno 1 2 1.UNIDADES DE MEDIDA cuánto mide? Las células, salvo excepciones como las yemas de los huevos de las aves, no pueden ser observadas a simple vista y se debe recurrir a la ayuda de los microscopios. Por ese pequeño tamaño tampoco se utiliza como unidad de medida el milímetro pues deberíamos recurrir a cifras con muchos decimales (lo más pequeño que podemos ver a simple vista está en torno a 0,1 mm). El gráfico superior te muestra una comparativa de tamaños así como la resolución de los microscopios ópitos y electrónicos. Para evitar manejar engorrosas cifras con decimales se utilizan unidades inferiores como la micra () que es la milésima parte del milímetro, (también se denomina micrómetro (m)). 1mm = 1000 ó 1000m así, con la micra podremos referirnos al tamaño de las células y de algunos orgánulos: célula eucariota típica célula procariota mitocondria 20-30 0,5-1 0,5-1 cuando tenemos que referirnos a detalles de las células o de los orgánulos tales como la membrana, la micra resulta demasiado grande y entonces se utiliza una unidad inferior, el nanómetro (nm) que es la milésima parte de una micra : 1 nm = 1000 3 pero incluso esta unidad puede resultar excesiva si nos adentramos en el nivel molecular y queremos saber distancias entre las moléculas de una macromolécula (por ejemplo entre dos bases nitrogenadas del ADN ) o entre dos átomos de una molécula (por ejemplo entre los átomos de oxígeno e hidrógeno del agua). En estos casos se utiliza el ángstrom (Å ) que es 10 veces menor que un nanómetro: 1 nm = 10 Å 1 = 10.000 Å cuánto pesa? Por otro lado además de medir longitudes necesitamos conocer pesos, es decir, necesitamos unidades de masa que sean inferiores al miligramo. La más utilizada para células y orgánulos es el picogramo (pg): 1 pg = 10 –12 gramos y para macromoléculas el dalton: 1 dalton = 1,66 ·10-24 átomos de hidrógeno esta unidad se debe a que para expresar la masa de una macromolécula se indica su peso molecular, es decir, el número de veces que la molécula tiene más masa que el átomo de hidrógeno. Como en un gramo hay 6,023·1023 átomos de hidrógeno y, por definición, la masa de un átomo de hidrógeno se denomina dalton, resulta que 1 gramo son 6,023·1023 daltons (por ejemplo el peso molecular de la glucosa es de 180 daltons, y el del agua es de 18 daltons). Otra unidad que se utiliza para macromoléculas y pequeñas estructuras como los ribosomas es el svedberg (S) que también se utiliza como medida de tamaño. Esta unidad está relacionada con la velocidad de sedimentación de las partículas en la centrífuga (esa velocidad será proporcional al peso de la partícula). 1. Calcula cuanto mide en nanómetros: a) la bacteria Escherichia coli que mide 1 m b) el virus VIH que mide 0,1 m c) una célula epitelial humana que mide 40 m 2. ¿Cuál sería el tamaño en micrómetros de una bacteria que mide 0,01 cm? 4 2. EL MICROSCOPIO ÓPTICO Aunque seguramente ya has manejado este tipo de microscopio vamos a revisar las partes del microscopio óptico de luz visible y a conocer otros tipos. Microscopio óptico de luz visible En un microscopio óptico de luz visible se utiliza como radiación la luz visible que puede enfocarse mediante lentes de vidrio; en él encontramos las siguientes partes: *Fuente de iluminación que actualmente es una lámpara eléctrica colocada al pie del microscopio *Elementos mecánicos que son un conjunto de piezas para sostener la parte óptica y las muestras a observar (tubo óptico, platina, pie y asa) *Elementos ópticos que son tres sistemas de lentes: condensador, objetivo y ocular. **El condensador concentra los rayos de luz sobre la muestra, obteniéndose así una mayor iluminación; suele llevar un diafragma para regular la cantidad de luz y adecuarla a las necesidades de la observación. **El objetivo recoge los rayos de luz que atraviesan la muestra, y produce una imagen aumentada de la misma. Los microscopios suelen tener varios objetivos, de distintos aumentos, fijados a una pieza giratoria o revólver. **El ocular amplifica la imagen producida por el objetivo, y la enfoca sobre el ojo humano. 5 ¿Por qué no lo podemos ver todo? El aumento al que podemos ver una imagen resulta de los aumentos debidos al objetivo y al ocular. Por ejemplo, si el objetivo es de 10 aumentos (10x) y el ocular es de 4 aumentos (4x), la imagen observada estará 4x10=40 veces aumentada. Si esto fuera lo único que influyese podríamos pensar que con lentes enormes y de buena calidad conseguiríamos un aumento enorme, pero la calidad de un microscopio no sólo viene determinada por el número de aumentos (lentes), sino también por el poder de resolución o distancia mínima para que dos puntos próximos se vean como puntos diferentes. Esto depende fundamentalmente de la longitud de onda de la luz utilizada: cuanto menor sea ésta, mejor es la resolución, es decir, el poder de resolución será menor. Así, como el principal factor limitante es la longitud de onda de la luz visible, es imposible construir un microscopio con un poder de resolución inferior a 0,2 micrómetros. Es decir, si dos estructuras están separadas a menos de 0,2 micrómetros, aunque utilicemos lentes muy potentes que produzcan muchos aumentos, no se mejorará la resolución, sencillamente veremos una zona borrosa mucho más grande. Por otro lado, además de la longitud de onda, en el poder de resolución también influye el llamado índice de refracción del medio, normalmente aire, que se encuentra entre el objetivo y la preparación. Cuanto mayor sea el índice de refracción, más disminuye la velocidad de la luz y más aumenta la resolución; por esta razón los objetivos de inmersión tienen un poder de resolución mayor, ya que utilizan una sustancia viscosa como el aceite (indice de refracción=1,5) frente al aire (índice de refracción=1). Otros microscopios ópticos Microscopio de contraste de fases. Utiliza luz visible. Se basa en que las diferentes estructuras celulares tienen distinta densidad y, por tanto, varía su índice de refracción. Pero las diferencias son muy pequeñas y en este tipo de microscopios se utilizan distintos sistemas para aumentarlas y mejorar la imagen. Microscopio de campo oscuro. Se emplea para observar microorganismos; en él un disco opaco bloquea la luz de forma que sólo la luz refractada por la muestra alcanza el objetivo y la muestra aparece iluminada sobre un fondo oscuro. Microscopio de luz ultravioleta. Utiliza como radiación la luz ultravioleta que , al tener una longitud de onda menor que la luz visible, proporciona un poder de resolución de hasta 0,01 micrómetros. Precisa lentes de cuarzo y la imagen se recoge en una pantalla. 6 Microscopios de rayos X Utilizan una radiación con una longitud de onda menor que la de la luz ultravioleta y son relativamente recientes ya que era preciso conseguir lentes capaces de focalizar los rayos X. Alcanzan un poder de resolución de 550 angstroms, mayor que el de los microscopios electrónicos, con la ventaja de que permiten mantener las muestras en aire o agua, es decir, en condiciones similares a las naturales. Microscopios de fluorescencia. Permiten observar células o componentes celulares capaces de emitir fluorescencia, bien sea natural o bien por adicción de una sustancia que tenga esa propiedad. Utilizan una lámpara especial capaz de producir la excitación de la sustancia fluorescente y un filtro que recoge y transmite las ondas emitidas por la muestra. Señala las partes en el siguiente dibujo: (p.1.) OBSERVACIÓN DE CÉLULAS DE PULPA DE TOMATE 7 Vamos a poner en práctica el manejo del microscopio óptico de luz visible a través de una sencilla práctica que no requiere ningún tratamiento especial de la muestra; se trata de observar células vegetales tratando de identificar algunas partes. Materiales Tomate Cuchilla y pinzas Porta y cubreobjetos Microscopio Procedimiento Cortamos el tomate en dos o más mitades. Con ayuda de unas pinzas extraemos un trozo pequeño (de unos dos milímetros de grosor) de la pulpa del tomate. Lo depositamos en el portaobjetos y lo cubrimos con el cubreobjetos comprimiéndolo suavemente hasta aplastarlo. A continuación lo llevamos a la platina del microscopio para realizar la observación, empezando con el menor aumento. Buscamos una zona donde las células se vean bien y la pasamos a más aumentos. Haz un dibujo de tu observación identificando los orgánulos celulares que reconozcas. Anota los aumentos a los que realizas la observación 3. LA TINCIÓN. 8 En la práctica anterior has hecho una observación de células sin someterlas a ningún tratamiento. En muchos casos la observación de una muestra se puede mejorar si aumentamos el contraste entre sus estructuras; una forma de hacerlo es mediante la tinción. Los colorantes que se utilicen dependerán de la naturaleza de lo que se quiera observar; por ejemplo, si pretendemos ver ácidos nucléicos debemos utilizar un colorante básico que se unirá a ellos, mientras que el citoplasma, de carácter básico se teñirá con colorantes ácidos. Existen ademas técnicas de tinción específicas que ponen de manifiesto distintos componentes celulares: *Técnica del PAS ( ácido peryódico de Schiff) se utiliza para teñir carbohidratos y revela la existencia del glicocáliz que aparece de color morado. *La tinción de Feulgen es específica para el ADN y tiñe el núcleo de color morado. *Los lípidos se pueden detectar con tetróxido de osmio (color negro) o con rojo de Sudán (rojo). *El almidón se detecta con la solución de Lugol y aparecerá de color violeta. *El colorante llamado verde brillante tiñe la lignina. Otro tipo son las técnicas de tinción diferenciales que utilizan al menos dos colorantes distintos; es el caso de la llamada tinción de gram que permite diferenciar bacterias gram + (color azul) de bacterias gram – (color rojo). (p.2.) TINCIÓN Y OBSERVACIÓN EPIDÉRMICAS DE CEBOLLA. DE CÉLULAS 9 En esta práctica vas a observar células epidérmicas del bulbo de cebolla realizando previamenete una tinción. Materiales Microscopio Porta y cubreobjetos Escalpelo o cuchilla , pinzas y aguja enmangada Frasco lavador Caja de Petri Cebolla Colorantes: azul de metileno o verde de metilo. Procedimiento. Separa una de las hojas internas de la cebolla y con las pinzas desprende la delgada membrana que está adherida a la cara interna (cóncava). Corta un trozo de esa piel de 1cm2 y colócalo sobre el portaobjetos donde previamente habrás añadido una gota de agua. Extiende la lámina de cebolla de forma que no tenga pliegues y escurre el agua sobrante en la caja de Petri. Deposita sobre la preparación unas gotas del colorante y déjalo actuar unos minutos. A continuación escurre el exceso de colorante y lava la preparación dejando caer agua sobre ella mientras la mantienes inclinada sobre la caja de Petri. Tápala con el cubreobjetos y seca los restos de agua. Ahora puedes mirarla al microscopio, empezando siempre por un aumento pequeño. Dibuja tu observación indicando los aumentos empleados. Señala las partes que identifique en las células ¿qué estructuras aparecen teñidas? ¿crees que se trata de una tinción específica? 4. EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO. 10 Ideado a principios del siglo XX utiliza un haz de electrones en lugar de un haz de luz. Como la longitud de onda de los electrones es menor que la de la luz, el poder de resolución aumenta considerablemente (unos 0,2 nanómetros). El haz debe proyectarse en un sistema al vacío y las lentes de cristal son sustituídas por lentes electromagnéticas (electroimanes). Existen dos tipos de microscopios electrónicos: el de transmisión (TEM) y el de barrido (SEM). Microscopio electrónico de transmisión (TEM) Se hace que el haz de electrones incida sobre la muestra; las zonas que permiten el paso de más electrones se ven claras mientras que las zonas densas se ven oscuras; es decir, se produce una imagen por contraste que es fotografiada u observada en una pantalla fluorescente. La muestra ha de estar totalmente deshidratada y ser muy fina (se realizan cortes con el ultramicrotomo) por lo que resulta imposible observar muestras “in vivo”; la muestra se coloca sobre una rejilla de cobre que permite el paso de los electrones y para aumentar el contraste se recubre con metales pesados, como el plomo, que hace que las distintas estructuras absorban diferentes cantidades de electrones. Microscopio electrónico de barrido (SEM). En este caso se suelen observar muestras enteras, por ejemplo células, sin cortar. La muestra se recubre con un metal pesado, generalmente oro, y el haz de electrones no atraviesa la muestra, sino que la “barre” reflejándose y recogiéndose en una pantalla. De esta forma ofrece una imagen tridimensional de la muestra. (p.3.) ANÁLISIS DE IMÁGENES DE MICROSCOPÍA. 11 En general, las imágenes con colores corresponden a microscopía óptica pues como ya vimos, se usan colorantes para resaltar estructuras o para diferenciar unas de otras. En microscopía electrónica las imágenes suelen verse en escala de grises aunque en muchos casos se colorean posteriormente con programas informáticos. 1 ¿de qué orgánulo se trata? 2 Esta microfotogragía te muestra distintos lisosomas ¿a qué podría deberse esta diferencia de tamaños? ¿qué crees que es? (lo viste en una práctica) 3 12 En esta imagen tienes retículo endoplasmático liso, rugoso y mitocondrias. 4 Y aquí ¿qué observas? 5 13 En esta microfotrografía se ve la traducción del RNAm 6 Esta imagen es un macrófago “comiéndose” a un estreptococo ¿crees qué es real o esta falseada? ¿qué es eso?! 7 8 ¿sabes de que tipo de células se trata? 14 9 ¿y esto? Si, también es de microscopio electrónico. Te doy una pista: se trata de una bacteria muy famosa...... 10 Aquì tienes otra célula sanguínea, en este caso un neutrófilo, fagocitando de nuevo a un estreptococo. 11 Esta imagen está hecha con TEM ¿Qué son? 15 12 13 esta imagen es del hongo Candida albicans hecha con SEM, muy frecuente en nuestra piel ..entérate dónde.. de nuevo la famosa bacteria vista con TEM ¿qué proceso observas? 16 14 La imagen superior es de el protozoo fotosintético Euglena realizada con SEM. Recuerda que la imagen coloreada es falsa, hecha después. La imagen que nos dará el microscopio será la segunda. 15 ¿qué eso? puede Glóbulo rojo en un capilar Idéntifica más partes ser 17 16 17 Realizada con TEM (ver siguiente) Virus entrando 18 Estas dos imágenes(17 y 18) realizadas con TEM son del virus de la herpes; en la superior el virus está dentro de una célula. Trata de reconocer alguna estructura de la misma. Identifica también las partes del virus. 18 indica que proceso celular observas y que partes reconoces 19 20 Este orgánulo (TEM) es conocido, que no te despiste la forma . El virus de la polio (TEM), ¿qué material genético tiene? 21 19 esta imagen ya la has visto en una práctica ¿la reconoces? 22 esta imagen es de los cromosomas en una fase determinada de la división celular ¿qué fase es? 23 ¿crees que la imagen es de microscopía electrónica? 24 la fotografía es de microscopio de fluorescencia ¿es microscopía óptica o electrónica? ¿cómo funciona? 20 5. MÉTODOS CITOQUÍMICOS. El objetivo de estos métodos es la localización e identificación de las sustancias químicas constituyentes de las células, para lo cual hay dos líneas de investigación: -obtención de fracciones subcelulares y su posterir análisis bioquímico, -determinación de diferentes compuestos químicos en el interior de la célula. En los métodos de fraccionamiento celular lo que se hace es destruir la célula por procedimientos mecánicos o químicos ( trituración, vibración ultrasónica, choque osmótico...) y luego se separan los distintos componentes que constituyen la célula. El método más usado es la ultracentrifugación diferencial, proceso durante el cual se somete a las células destruídas a una serie de centrifugaciones, con fuerzas centrífugas progresivamente mayores, de forma que las partículas se van separando en función de su tamaño; en cada fase se obtiene un precipitado que se recoge y un sobrenadante que se vuelve a centrifugar. Por este método separamos los distintos componentes celulares que podemos estudiar de forma aislada . La última fracción que se obtiene corresponderá a una fase soluble en la que tendremos todo tipo de moléculas. Para estudiar esta fase soluble, es decir, para separar distintas biomoléculas podemos recurrir a otras técnicas como la cromatografía y la electroforesis. La cromatografía permite la separación de biomoléculas basándose en la diferente velocidad de desplazamiento de los componentes de una mezcla a través de un medio determinado. La velocidad de desplazamiento dependerá de las características de las biomoléculas. Dentro de esta técnica existen distintas modalidades: -cromatografía en papel: se aplica una mezcla de biomoléculas sobre una hoja de papel adsorbente. Uno de los extremos se impregna con un disolvente que avanzará por capilaridad a través del papel. Aquellas moléculas que sean solubles en el disolvente serán arrastradas y avanzarán más rápido que las que no lo sean obteniéndose así una separación en función de la solubilidad. -cromatografía de intercambio iónico: la muestra se pasa por una columna con una resina cargada (positiva o negativamente) de forma que las moléculas de la muestra interaccionarán con la resina en mayor o menor grado en función de su carga y, por tanto, avanzarán a distinta velocidad. Al final podrán recogerse las distintas fracciones separadas en función de su carga. -cromatografía de filtración: se pasa la muestra por una columna de resina porosa sin cargas. Las moléculas pequeñas avanzarán más despacio pues tienden a entrar en los poros de la resina, mientras las grandes irán más rápido. La separación se hace, por tanto, en función del tamaño molecular. La electroforesis es una técnica derivada de la cromatografía que lo que hace es aplicar un campo eléctrico a una muestra colocada en la base de una lámina del gel agarosa. La electricidad forzará el desplazamiento de las moléculas en función de su carga, es decir, se moverán al polo positivo o al negativo según cual sea su carga neta y lo harán a una velocidad que dependerá de su masa y del número de cargas electricas. 21 (p.4.) SEPARACIÓN DE PIGMENTOS FOTOSINTÉTICOS. Como ya sabes el color verde de las células vegetales se debe a la presencia de la clorofila en los cloroplastos, pero además de la clorofila ( de tipo a y b) existen otros pigmentos en dicho orgánulo que son los carotenos y las xantofilas. Estos pigmentos tienen diferente composición química y peso molecular y por tanto distinta solubilidad, lo que nos va a permitir su separación. Para ello utilizaremos un disolvente que al desplazarse por capilaridad por un papel arrastrará los pigmentos moviéndolos tanto más lejos cuanto más solubles sean en él. Obtendremos distintas bandas cuya anchura dependerá de la abundancia del pigmento en la muestra. Materiales. Muestras vegetales Embudo Pipeta Tubos de ensayo y gradilla Vaso de precipitados Porta y cubre Mortero Papel de filtro Placa de Petri Alcohol etílico (90º) Mechero de gas clorofila Procedimiento 1º-Debemos extraer los pigmentos de las hojas; para ello troceamos las hojas procurando quitar las nerviaduras y las machacamos en el mortero. Pasamos las hojas machacadas a un tubo de ensayo y añadimos 8ml de alcohol etílico. Ponemos el tubo dentro del vaso de precipitados al baño María y sin dejarlo hervir observamos como el alcohol adquiere un color verde y las hojas se van quedando blancas. Entonces retiramos el tubo y lo dejamos enfriar. Como los pigmentos son solubles en el alcohol le dan un color verdoso mientras los restos de las hojas quedan en el fondo del tubo. 2º-filtramos esta solución de pigmentos a otro tubo de ensayo. 3º-cortamos un trozo de papel de filtro de 8x12cm y lo doblamos de forma alargada (ver figura) 4º- vertimos parte de la solución de pigmentos en la placa de Petri de forma que alcance una altura de unos 2 ó 3 mm. 5º- colocamos el papel de filtro en la placa de forma que quede vertical y evitando que toque los bordes de la placa. 22 Observa como el líquido comienza a subir por el papel. En unos 20 ó 25 minutos los pigmentos se habrán separado y observarás en el papel varias bandas de distintos colores según los pigmentos que tenga la planta usada. Las bandas que pueden aparecer y sus colores son las siguientes: PIGMENTO Clorofila a Clorofila b Carotenos Xantofilas Antocianos COLOR Verde azulado Verde amarillento oscuro Amarillo anaranjado Amarillo Rosado Anota los resultados (pega un trozo de la tira de papel identificando cada banda) ¿qué técnica has utilizado para obtener los pigmento? ¿y para separarlos? 23 ANEXO I 24 ANEXO II: INSTRUCCIONES GENERALES Para el desarrollo de las prácticas es conveniente tener en cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con toda escrupulosidad. 1. Antes de realizar una práctica, debe leerse detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y técnica. Los resultados deben ser siempre anotados cuidadosamente apenas se conozcan. 2. El orden y la limpieza deben presidir todas las experiencias de laboratorio. En consecuencia, al terminar cada práctica se procederá a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado. 3. Cada grupo de prácticas se responsabilizará de su zona de trabajo y de su material. 4. Antes de utilizar un compuesto hay que fijarse en la etiqueta para asegurarse de que es el que se necesita y de los posibles riesgos de su manipulación. 5. No devolver nunca a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin consultar con el profesor. 6. No tacar con las manos y menos con la boca los productos químicos. 7. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. 8. Los productos inflamables (gases, alcohol, éter, etc.) deben mantenerse alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, se hará al baño María, nunca directamente a la llama. Si se manejan mecheros de gas se debe tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. 9. Cuando se manejan productos corrosivos (ácidos, álcalis, etc.) deberá hacerse con cuidado para evitar que salpiquen el cuerpo o los vestidos. Nunca se verterán bruscamente en los tubos de ensayo, sino que se dejarán resbalar suavemente por su pared. 10. Cuando se quiera diluir un ácido, nunca se debe echar agua sobre ellos; siempre al contrario: ácido sobre agua. 11. Cuando se vierta un producto líquido, el frasco que lo contiene se inclinará de forma que la etiqueta quede en la parte superior para evitar que si escurre líquido se deteriore dicha etiqueta y no se pueda identificar el contenido del frasco. 12. No pipetear nunca con la boca. Se debe utilizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga en el Centro. 13. Las pipetas se cogerán de forma que sea el dedo índice el que tape su extremo superior para regular la caída de líquido. 14. Al enrasar un líquido con una determinada división de escala graduada debe evitarse el error de paralaje levantando el recipiente graduado a la altura de los ojos para que la visual al enrase sea horizontal. 15. Cuando se calientan a la llama tubos de ensayo que contienen líquidos debe evitarse la ebullición violenta por el peligro que existe de producir salpicaduras. El tubo de ensayo se acercará a la llama inclinado y procurando que ésta actúe sobre la mitad superior del contenido y, cuando se observe que se inicia la ebullición rápida, se retirará, acercándolo nuevamente a los pocos segundos y retirándolo otra vez al producirse una nueva ebullición, realizando así un calentamiento intermitente. En cualquier caso, se evitará dirigir la boca del tubo hacia la cara o hacia otra persona. 16. Cualquier material de vidrio no debe enfriarse bruscamente justo después de haberlos calentado con el fin de evitar roturas. 17. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen. 25 ANEXO III: RELACIÓN DE IMÁGENES DE MICROSCOPÍA. 1. M.E. cisternas del Aparato de Golgi 2. M.E. Lisosomas en distintas fases de la digestión 3. M.O. Célula de pulpa de tomate con cromoplasto 4. M.E. Retículo endoplasmático liso, rugoso y mitocondrias 5. M.E. Retículo endoplasmático rugoso con sus ribosomas 6. M.E. Traducción del ARN 7. M.E. de barrido. Imagen coloreada. Abajo, a la derecha se ve al Estreptococo 8. M.E. de barrido. Imagen coloreada de los eritrocitos 9. M.E. imagen de Escherichia coli 10. M.E. neutrófilo fagocitando estreptococo. Imagen coloreada. 11. M.E. bacteriofago 12. M.E. hongo Candida albicans 13. M.E. Escherichia coli en división 14. M.E. Euglena, imagen real y coloreada 15. M.E. Célula de endotelio capilar con su núcleo; dentro un glóbulo rojo. 16. M.E. De arriba abajo tenemos la membrana nuclear, poro nuclear, aparato de Golgi, lisosoma, cromatina 17. M.E. Virus de la herpes dentro de una célula; arriba, a la derecha se puede reconocer una cisterna del Aparato de Golgi 18. Virus de la herpes entrando en la célula 19. M.O. mitosis en celula de cebolla, en metafase, se observa claramente el huso acromático 20. M.E. mitocondria 21. M.E. Virus de la polio 22. M.O. Imagen de epidermis de cebolla 23. M.O. Anafase en mitosis de célula de cebolla 24. Imagen de microscopio óptico de fluorescencia 26 Bibliografía -Antonio Jimeno, M. Ballesteros, A. Pardo; L, Ugedo; Biología COU, Editorial Santillana, 1992 -Carlos A, Miguel González, Araceli del Cañizo, Angel Costa Pérez; Biología 2º Bachillerato; Editorial Everest 1999 -Juan Ängel España, José G. Conde Dominguez, Antonio Fernandez Diez...Actividades Prácticas de Ciencias Naturales /1 Editorial Dossat, s.a. , 1980 -J: Cañeque, J. Martínez, C. Pulido, J. M. Roiz; Carpeta de actividades de laboratorio, Biología E. Secundaria, volumen V y VI, Editorial TSD Enosa, 1998 -Rafaela López Módenes, Tomás Romero Martín, Carlos Salamanca Nuñez, Juan Manuel Velasco Santos; Biología 2º bachillerto; Editorial Editex, 1988 -Juan E. Panadero, M. Rosario Fuente Floórez, Rosa Mª González Casado, Aurora Lozano Montero, Antonio Olazabal Flórez, Blanca Razquín Peralta; Biología 2º bachillerto; Editorial Bruño, 1998 -Miguel Sanz, Susana Serrano, Begoña Torralla; Biología 2º bachillerato; Editorial Oxford Educación, 1999 Páginas de internet: www.crosswind.net www.cellsalive.com www.cellbio.com www.100cia.com www.nyu.edu www.eibe.info www.bioxeo.com www.joseacortes.com 27 INDICE 1. Unidades de medida 2. El microscopio óptico (p.1) Observación de células de pulpa de tomate 3. La tinción (p.2) Tinción y observación de células epidérmicas de cebolla 4. El microscopio electrónico (p.3) Análisis de imágenes de microscopía 5. Métodos citoquímicos (p.4) Separación de pigmentos fotosintéticos Anexo I : material de laboratorio Anexo II: instrucciones generales Anexo III: relación de imágenes de microscopía Bibliografía 2 4 7 8 9 10 11 20 21 23 24 25 26