Sede de las actividades de investigación.

FICHA TIPO “E”
PROYECTOS DE INVESTIGACIÓN BIOMÉDICA Y EDUCATIVA
(Consignar exclusivamente los que se desarrollan actualmente en la carrera
en forma total o significativa)
Número: 22......
Denominación del proyecto de investigación.
”Producción
de Enzimas Exocelulares de Origen Microbiano. Optimización
de la Producción de Enzimas”
Resumen del proyecto. Indicar especialmente la relación con los contenidos, cátedras, áreas de
práctica o demandas sociales con las que se vincula.
Se intenta el desarrollo de un proceso de producción de enzimas exocelulares por acción coordinada sobre
el genoma (mejoramiento genético de cepas) y sobre el medio de cultivo (ambiente). La optimización de
la producción enzimática se basará en un procedimiento dinámico utilizando computadora y sensores
adecuados, técnica esta aplicable para cualquier otro proceso.
En base a experiencia previa, se estudiará la producción de penicilinacilasa, determinando los parámetros
de crecimiento óptimos para la máxima productividad de la enzima y desarrollando técnicas automáticas
de dosaje de la actividad enzimática.
Se estudiará la producción de otras enzimas de importancia médico-farmacológicas a medida que se
vayan poniendo a punto los procedimientos de optimización dinámica por acoplamiento de fermentador a
computadora.
Este tema surgió como continuación de estudios de post-grado llevados a cabo por el Doctor Carlos
Germán Núñez (Director del presente Proyecto) en la Universidad Tecnológica de Compiègne (Francia) y
en la Universidad de Hannover (Alemania).
Dado que numerosas industrias utilizan enzimas en sus procesos productivos, es importante desarrollar en
nuestro medio una tecnología adecuada a fin de poder prescindir, en un cierto porcentaje, al menos
inicialmente, de estos productos importados, y así lograr una producción competitiva con miras al
mercado internacional.
A través de la continuidad de este Proyecto en Desarrollo, se debe seguir intensificando el trabajo en
conjunto de varios años, entre el Institut fur Technische Chemie de la Universidad de Hannover, la
Cátedra de Bioquímica de la Facultad de Medicina y el INSIBIO de la Universidad Nacional de Tucumán
Estado actual de desarrollo y resultados obtenidos.
 Para trabajar específicamente en la producción controlada de enzimas bacterianas exocelulares, la
metodología que se usa depende de la enzima a producir, siguiendo el siguiente esquema general :
a) Aislamiento y selección de cepas hiperproductoras utilizando diferentes medios de cultivo selectivo
diferenciales y dosajes de la actividad específica de la enzima, implementando para ello la metodología
adecuada.
b) Puesta a punto del proceso de fermentación mediante la evaluación de la cinética de crecimiento
asociado a la producción de exoenzimas, dosando su actividad específica en el sobrenadante.
La calidad del producto estará dada no sólo por su actividad enzimática específica, que será determinada
según la metodología conveniente, sino también, teniendo en cuenta los criterios de pureza química,
pureza biológica y microbiológica de las preparaciones comerciales, usando para ello los estándares
internacionales aceptados. Los datos obtenidos serán sometidos a análisis estadísticos.
El presente Proyecto tiene una duración de tres años, estructurándose en ocho actividades según el
cronograma siguiente :
Actividad 1 : Determinación de las condiciones de cultivo mediante instrumentación convencional.
Actividad 2 : Optimización de los medios de cultivo desde el punto de vista de la productividad.
Actividad 3 : Utilización de un sistema FIA con biosensores de GOD y galOD para la determinación de
la fuente de carbono en los cultivos.
Actividad 4 : Desarrollo de nuevos biosensores.
Actividad 5 : Desarrollo de un reactor a células inmovilizadas (diferentes cepas del género Bacillus) y
otro a enzimas inmovilizadas (penicilinacilasa y otras).
Actividad 6 : Utilización del “software” CAFCA de procedencia alemana para la optimización dinámica
de la fermentación.
Actividad 7 : Estudio de las condiciones de extracción y purificación de enzimas teniendo en cuenta :
a) refrigeración : una vez terminada la fermentación, es necesaria la conservación del
produto en frío.
b) separación de la fase que contiene las enzimas por filtración o centrifugación.
c) purificación/concentración : se desarrollarán las operaciones necesarias para la
obtención de un producto que responda a las condiciones de pureza que requiere el
mercado, en base a su valor comercial de venta.
Actividad 8 : Evaluación económica de las operaciones involucradas en el proceso para establecer el
costo operativo de la producción. Siendo necesario tener una evaluación de los montos de inversión para
poder determinar los costos fijos y precio de comercialización del producto elaborado.
A la fecha prácticamente se cumplieron las etapas 1 a la 6 quedando para finalizar las etapas 7 y 8

Sede de las actividades de investigación.
Laboratorio de Investigaciones de la Cátedra de Bioquímica, Departamento Biomédico, Facultad
de Medicina, UNT.
 Fecha de comienzo
 Fecha de finalización

01/01/98
31/12/00
Director(a).
Dr.
Carlos Germán Núñez
Otros investigadores participantes (especificar si son docentes o alumnos de la carrera o
becarios).
Aguirre de Bleckwedel, Laura B. (Docente)
Duca de Cena, Gladys L. Del V.(Docente)
Piro Magariños, María B. (Docente)
Rojo Hebe Patricia (Docente)
Sant Yacumo, Roque A. (Docente)
Senestrari de Espeche, Ileana M. (Docente)
 Describir las condiciones de las becas.

Financiamiento.
Monto del proyecto:
 15.000
Fuentes.
X
agencias financiadoras
fundaciones donatarias
otros (especificar)
Consejo de Investigaciones de la Universidad Nacional de Tucumán (CIUNT)
Consignar si se han desarrollado convenios con otras instituciones y describirlos.
(1) Convenio de Cooperación entre el Instituto de Tecnología Química de la Universidad de Hannover
y el Laboratorio de Investigaciones de la Cátedra de Bioquímica, Facultad de Medicina, UNT.
Firman el acuerdo el Dr.Carlos G. Núñez en representación de la Prof.Dra.Rita Waserman de Cunio,
Decana de la Facultad de Medicina, UNT y el Dr.Thomas Scheper, Director del ITC, en representación
del Prof.Dr.H.Seidel, Presidente de la Universidad de Hannover. Fecha : 15 de febrero de 1996.
(2) Gestión y firma de Acuerdo de Cooperación entre la Facultad de Medicina, UNT y el Institut fur
Biochemie, Medizinische Hochschule Hannover , 24/04/98.
(3) Gestión y firma de Acuerdo de Cooperación entre el laboratorio de Investigaciones de la Facultad de
Medicina, UNT y .Departamento de Bioquímica y Biología Molecular de la Universidad del País Vasco,
España. 15 de mayo de 1998.
Trabajos publicados derivados de la investigación en los últimos 3 años.
“Local Bacillus strains selection without beta-Lactamase Activity”Senestrari I.M., Aguirre L.B.,
Márquez C.R., Núñez C.G. Biocell Vol.22, 29, número 1, april 1998
“Isolation and Identification of Bacillus strains with penicillin amidase productivity” Senestrari I.M.,
Aguirre L.B., Duca G., Sant Yacumo R., Núñez C.G. Biocell Vol. 22, 51, número 1, april 1998.
“6-Aminopenicillanic acid production by immobilized whole cells of locally isolated Bacillus” Aguirre
L.B., Senestrari I.M., Núñez C.G. Biocell Vol. 22, 52, número 1, april 1998.
“On Line Monitoring of Galactoside Conjugates and Glycerol by Flow Injection Analysis” Félix Amárita
Vega, Carlos Germán Núñez, Beate Weigel, Bernd Hitzmann, Juan Carlos Díaz Ricci, Analytica Chimica
Acta 373 (1998) 57-62
“Instrumentación Virtual en Biotecnología” Melián J., Martínez R., Núñez C.G., Díaz Ricci J.C., Revista
del XII Congreso Argentino de Bioingeniería (1999) Vol.1 , 279-281.
Incluir las referencias bibliográficas completas.
Trabajos inéditos derivados de la investigación.

Otros resultados .

…………………………………….
Firma y aclaración del responsable