Unidade de Masas E PROTEÓMICA Edificio CACTUS Campus Vida

UNIDADE DE MASAS E PROTEÓMICA
Edificio CACTUS
Campus Vida
15782
Santiago de Compostela (España)
Tel. 981563100 - ext. 16242
Fax.-981547077
E-mail: [email protected]
SOLICITUD PROTEÓMICA
INFORMACIÓN DEL USUARIO:
Nombre:
Departamento:
Teléfono:
Universidad:
Director de Investigación:
E-mail:
Fecha:
/
/
INFORMACIÓN DE LA MUESTRA:
Número de muestras
Gel
1D-PAGE
2D-PAGE
Adjunta imagen del gel
Realizar Reducción-Alquilación
Tinción
Coomassie
Plata
Fluorescencia
Concentración Proteína Total
Taxonomía
Muestra
grado de tinción (1)
Punto Isoeléctrico
Peso Molecular aproximado
(1)* tp: transparente, pt: poco teñido, tn: tinción normal, bt: bastante teñido, mt: muy teñido.
(2) Máximo de banda de 1x3 mm para 1D y 1-2 mm de diámetro para bandas 2D. El procedimiento está optimizado
para geles de 1-1.5 mm de grosor.
*** Para realizar muestras urgentes contactar con la unidad.
Técnica solicitada:
PMF por MALDI TOF
Fragmentación MSMS por MALDI TOF/TOF
Digestión Tríptica
nLC-ESI-Trampa
ESPACIO A CUBRIR POR LA UNIDAD:
Técnico:
Técnica:
Fecha en la que se recibe:
Observaciones:
/
/
Fecha de finalización:
/ /
nLC-MALDI
Desalado Zip-Tip
NORMAS DE ENVÍO DE MUESTRAS:
La unidad emplea el Kit, In-Gel DigestZp kit, de la casa Millipore, para digerir las proteínas. Las condiciones
necesarias que tienen que cumplir las muestras, para que se adapten al kit de digestión y a las técnicas de análisis de la
unidad son las siguientes:
-
Enviar las bandas recortadas ajustándose al contorno de la proteína, usando material limpio. Las bandas
recortadas se deben enviar en tubos eppendorf cubiertas de agua milli-Q.
Junto con las muestras enviar una banda del fondo y un marcador de peso molecular de ese mismo gel,
que se usarán como controles del gel.
Tamaño de las bandas del gel: 1x3 mm (1D) y 1-2 mm (2D).
Enviar imagen del gel, señalando las bandas a analizar.
Métodos de teñido: Coomasie normal, Coomasie coloidal, Plata (sin emplear Glutaraldehido), Fluorescencia.
Tipos de geles compatibles: geles de poliacrilamida con un porcentaje de acrilamida del 4-20% y un grosor
entre 1-1,5 mm.
Concentración de proteína: la cantidad de proteína necesaria será de unos pocos femtomoles de proteína
aislada en el gel.
Se debe tener en cuenta que las proteínas de baja masa molecular (<20 KDa) pueden resultar difíciles de
identificar debido al bajo número de péptidos que originan su digestión enzimática.
Controless realizados por el laboratorio:
 Control de la digestión: - digestión de una banda de un marcador de peso del propio gel
 Control de contaminantes: - digestión de un fondo del propio gel
- digestión en un pocillo del kit vacío, sin gel.
 Control de sensibilidad de los espectrómetros de masas: - Identificación de un Standard de
BSA de baja concentración: 50 fmol
Para más información podéis consultar nuestra página web. En caso de alguna duda o cualquier consulta,
poneros en contacto con la Unidade de Espectrometría de Masas e Proteómica, en la extensión 16242 o por Email, [email protected].