RELACION ESTRUCTURA-FUNCIÓN DE LA ONCOPROTEÍNA E1B

XIX Verano de la Investigación Científica y Tecnológica del Pacífico
RELACION ESTRUCTURA-FUNCIÓN DE LA ONCOPROTEÍNA E1B 55K.
Velázquez Anaya Fernando, ITTG, [email protected], Gonzalez García-Conde Ramón A.,
UAEM [email protected]
PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
Los adenovirus son una familia de virus que infectan a humanos y animales. Son virus
no envueltos, de ADN bicatenario, que pueden inducir infecciones en las vías
respiratorias, gastrointestinales y queratoconjuntivitis. Los adenovirus se han explorado
ampliamente como un vector viral para terapia génica y también como un virus
oncolítico; una estrategia novedosa para eliminar o revertir el desarrollo de un tumor
canceroso.
La proteína de adenovirus E1B 55kDa (E1B), inhibe al supresor tumoral p53, induce la
degradación de algunas proteínas celulares y modula la expresión de los genes virales
tardíos. Esta proteína es uno de los blancos más utilizados en el diseño de adenovirus
recombinantes con capacidad oncolítica; sin embargo, sus actividades durante el ciclo
de replicación viral no se conocen con detalle y existe muy poca información sobre su
estructura.
Para obtener información estructural de la E1B, en este proyecto se construyeron
plásmidos que portan el gen de la E1B para sobre-expresar la proteína en un sistema
heterólogo, buscando obtener preparaciones suficientemente enriquecidas con la
proteína que puedan utilizarse para su posterior estudio por cristalografía de rayos X, o
resonancia magnética nuclear.
METODOLOGÍA
Para lograr la sobre-expresión de la E1B en E. coli, se amplificaron por PCR las
secuencias de interés del gen de la E1B, las cuales incluyeron el gen que codifica para
la proteína E1B completa y fragmentos que codifican para las regiones amino (N) y
carboxilo (C) terminal y una región central. Los fragmentos obtenidos se insertaron en el
plásmido pET 22b(+). Estos plásmidos se transformaron en la cepa BL21 para inducir la
expresión del gen. Se obtuvieron lisados de bacterias y las proteínas fueron analizadas
por electroforesis en geles desnaturalizantes de poliacrilamida, que fueron
posteriormente teñidos con azul de coomassie. Los cultivos de BL21 que sobreexpresan a cada una de las proteínas, ya sea completa o alguna de las tres regiones de
interes, podrán utilizarse para análisis estructural.
CONCLUSIONES
La proteína E1B es un blanco importante en el diseño de vectores adenovirales
oncolíticos; sin embargo, se conoce muy poco sobre su estructura. Las construcciones
que se generaron en este proyecto deberán permitir realizar análisis estructural de la
proteína, aportando así información útil para aprender sobre su función.
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Pacífico
Agosto 2014