MICROPROPAGACIÓN DE SEIS ESPECIES DEL GÉNERO

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MICROPROPAGACIÓN DE SEIS ESPECIES DEL GÉNERO Turbinicarpus Y
ANÁLISIS CON MARCADORES MOLECULARES DE LA VARIABILIDAD
GENÉTICA DE ONCE ESPECIES DEL MISMO GÉNERO
MANUEL SALVADOR DOMÍNGUEZ ROSALES1, EUGENIO PÉREZ MOLPHE-BALCH2
1. Egresado de la Maestría en Ciencias en Biotecnología Vegetal de la UAA.
2. Dpto. de Química. Centro de Ciencias Básicas. Universidad Autónoma de Aguascalientes.
INTRODUCCIÓN
La situación actual de las cactáceas mexicanas es
grave, debido a lo cual se hacen esfuerzos en
varios rubros con el fin de conservar y aprovechar
racionalmente estas plantas. Las técnicas de
propagación basadas en la biotecnología se ha
convertido en una opción para su multiplicación,
sobretodo en aquellas en las que los métodos
tradicionales son poco eficientes y además se
encuentran amenazadas. Este es el caso del género
Turbinicarpus. Dado que el cultivo in vitro se
trata de sistemas de propagación clonal, es
importante conocer la variabilidad genética del
material inicial con el fin de no permitir que esta
se pierda en el proceso de multiplicación. Los
marcadores
moleculares
pueden
aportar
información valiosa acerca del grado de variación
genética presente en las plantas a micropropagar,
así como de la posible variación adicional
generada por los sistemas de cultivo in vitro.
OBJETIVOS
1. Desarrollar sistemas para la generación in vitro
de brotes a través de la activación de areolas de
seis especies del género Turbinicarpus.
2. Determinar las condiciones óptimas para el
crecimiento, enraizamiento in vitro de los brotes
generados y adaptación a suelo de once especies
seleccionadas del género Turbinicarpus.
3. Adecuar una técnica eficiente para la extracción
de ADN y analizar la variabilidad genética de
once especies del género Turbinicarpus usando
las técnicas RAPD y AFLP.
MATERIALES Y MÉTODOS
Se establecieron 8 niveles de citocininas a probar
para cada una de las especies a propagar: 0.5
mg∙L-1 de BA, 0.5 mg∙L-1 de 2iP, 0.75 mg∙L-1 de
2iP, 1.0 mg∙L-1 de 2iP, 2.0 mg∙L-1 de 2iP, 3.0
mg∙L-1 de 2iP, 4.0 mg∙L-1 de 2iP. Cada
concentración se probó en los dos tipos de
explante (apical y transversal). Los brotes
obtenidos, fueron transferidos a medio MS sin
reguladores de crecimiento vegetal, después de 45
días de mantenerlos en las condiciones de luz
continua a 25C, se observó que la mayoría de los
brotes formaron raíces. Cuando los brotes
enraizados, adquirieron un tamaño adecuado para
su manejo y raíces vigorosas, se sometieron a un
proceso gradual de adaptación a suelo. Para
realizar el análisis de la variabilidad genética en
plantas micropropagadas de 11 especies del
género Turbinicarpus haciendo uso de las técnicas
de AFLP y RAPD.
RESULTADOS
De los tratamientos probados la respuesta más alta
se observó en la especie T. schmiedickeanus var.
schwarzii, con 11.86 brotes por explante en su
tratamiento más eficiente, mientras que la
respuesta menor fue para la especie T.
schmiedickeanus var. schmiedickeanus sinónimo
T. roseiflorus con 7.50 brotes por explante. El
análisis de la variabilidad genética se realizó
utilizando marcadores moleculares RAPD Y
AFLP. Para los RAPD se ensayaron 20
iniciadores de los cuales se eligieron 2 para
realizar el análisis con el ADN extraído de cada
una de las especies antes y después de la
propagación. El análisis de AFLP utilizó cuatro
combinaciones de iniciadores, con lo cual se
amplificaron 491 productos, de los que el 97%
fueron polimórficos, lo que coincide con la
diversidad de especies analizadas. Asimismo, se
encontró que el proceso de cultivo in vitro si
produjo algunos cambios, aunque mínimos, en los
patrones de bandas obtenidos por RAPD y AFLP.
CONCLUSIONES
1. Se desarrollaron sistemas de propagación in
vitro a través de la activación de areolas para seis
especies del género Turbinicarpus. En todos los
casos se observaron mejores resultados con
explantes transversales.
2. El enraizamiento de todas las especies se
obtuvo en medio MS sin reguladores del
crecimiento vegetal. Las eficiencias de
enraizamiento oscilaron entre 56 a 92%
3. Se consiguió la adaptación a suelo de las
plantas generadas in vitro, con eficiencias de 54 a
100%
4. Se adecuó una técnica eficiente para la
extracción de ADN de las plantas estudiadas.
5. Se obtuvieron datos acerca de la variación
genética en las plantas estudiadas usando para ello
la técnica RAPD. Se observó que la propagación
in vitro si es capaz de generar algunos cambios,
aunque mínimos, en los patrones de bandas
generados por estos marcadores moleculares.
6. Se obtuvieron datos acerca de la variación
genética en las plantas estudiadas usando para ello
la técnica AFLP. Se observó que la propagación in
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vitro si es capaz de generar algunos cambios,
aunque mínimos, en los patrones de bandas
generados por estos marcadores moleculares.
Además, se generaron datos acerca de la relación
filogenético existente entre las especies
estudiadas, los cuales podrían resultar valiosos
para hacer más clara la taxonomía en este género.