Practica_2

LABORATORIO DE BIOLOGÍA CELULAR
PRÁCTICA 2.
MANEJO Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO COMPUESTO
OBJETIVOS:
1. El alumno experimentará los conceptos del uso y manejo del microscopio compuesto.
2. El alumno conocerá las partes ópticas, lumínicas y mecánicas del microscopio
compuesto.
3. El alumno aprenderá la iluminación de Kölher.
4. El alumno pondrá en práctica los cuidados y limpieza del microscopio compuesto.
5. El alumno aprenderá sobre los diferentes tipos de microscopios existentes.
INTRODUCCIÓN:
El estudio de los microorganismos inicio con Antonio van Leeuwenhoek cuando en
1683 describió miles de miembros de la flora microbiana en diversas muestras de origen
ambiental. Su afición por el pulido de lentes le permitió construir microscopios simples y
eficaces con los que hizo posible que la humanidad descubriera un mundo encantador de
“animalículos” de todas las formas y tamaños. El microscopio óptico compuesto es un
instrumento fundamental para el estudio de las células; cuenta con tres sistemas:
mecánico, de iluminación y óptico. En el sistema mecánico encontramos piezas como los
tornillos para desplazamiento micrométrico y macrométrico, platina, brazo, pie o base,
dispositivo de desplazamiento de muestras o “carro”, tubo, diafragma de condensador y
de base, etc. En el sistema de iluminación se encuentra la lámpara que puede ser de
diversos materiales y longitudes de onda, el condensador y, en algunos modelos antiguos,
el espejo. El sistema óptico cuenta con los oculares de diversas graduaciones, los
objetivos que generalmente son tres (10x ó seco débil, 40x ó seco fuerte y 100x u objetivo
de inmersión) y la lente del condensador.
Para ciertos modelos (K-7 de la marca Zeizz y otros que cuentan con diafragma en
la base y condensador móvil) es necesario realizar el enfoque de Khöler que consiste en
hacer coincidir el hexágono de luz proveniente de la lámpara, modificado por el diafragma
del pie, con el condensador cerrado del microscopio para obtener una imagen más
centrada y nítida de la muestra.
CUIDADOS QUE SE DEBERÁN TENER AL USAR EL MICROSCOPIO.
1. Maneje el microscopio con mucho cuidado, llévelo utilizando ambas manos en
posición derecha y no deje que se golpee.
2. Limpie los lentes expuestos cada vez que se use, hágalo con un material adecuado.
3. Nunca coloque el microscopio cerca del borde de la mesa del laboratorio. Asegúrese
de colocar el cordón eléctrico fuera de cualquier pasada y en una posición en la cual
no pueda ser jalado y tirar el microscopio al suelo.
4. Use sólo papel seda para limpiar las lentes. Usar los dedos, un pañuelo u otro material
podría rayar o dañar las lentes.
5. Siempre comience las observaciones con el objetivo de aumento más bajo (10x) y al
terminar la práctica deje el mismo.
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6. Nunca use el tornillo de movimientos rápidos (macrométrico) con el objetivo de mayor
aumento (100x).
7. Conserve siempre los portaobjetos y los cubreobjetos limpios para evitar
interpretaciones erróneas.
8. Cuando finalice sus observaciones apague la iluminación y rote el objetivo de menor
poder hacia la posición de observación. Nunca guarde un microscopio con el objetivo
de mayor poder en posición de observación.
9. Nunca juegue con el microscopio ni pretenda hacerle reparaciones.
10. No utilice microscopios defectuosos ni procedimientos equivocados.
MATERIAL:
Microscopio óptico compuesto. (1 por equipo)
Papel seda.
Trapo de limpieza (franela).
Papel higiénico.
METODOLOGÍA:
1. Observar las partes fundamentales del microscopio identificándolas en los tres
sistemas.
2. Limpiar el microscopio usando papel seda para la partes ópticas y papel higiénico para
las mecánicas y lumínicas.
3. Conectar los microscopios a una fuente de energía apropiada (110 v).
4. Encender los microscopios y practicar la iluminación según Kölher.
a) Acercar el condensador a la platina.
b) Cerrar el diafragma del pie.
c) Con el revolver, mover los objetivos de manera que el de 10x se enfrente a la luz del
pie.
d) Acercar el objetivo 10x con la platina.
e) Cerrar el diafragma del condensador.
f) Observar si el hexágono de luz está centrado y si se observa nítido.
g) Si no es así, mover el diafragma lateralmente mediante los tornillos de nivelación que
tiene éste de manera simultánea y observándolo por los oculares.
h) Una vez nivelado, el haz de luz deberá ser nítido y centrado, procediendo a abrir los
diafragmas e iniciar la observación de las muestras.
5. Iniciar el enfoque de las muestras proporcionadas por el maestro.
6. Para el enfoque se procederá de la siguiente manera:
a) Alejar el objetivo de 10x de la platina lo suficiente para insertar en el carro la laminilla a
observar.
b) Abrir los diafragmas del sistema de iluminación.
c) Centrar el lente (si lo tiene) del condensador.
d) Acercar el condensador a la platina. En los modelos K-4 y similares este paso no se
realiza pues el condensador es fijo.
e) Observar lateralmente el acercamiento del objetivo de 10x a la laminilla mediante el
uso del tornillo macrométrico, cuidando con ello que la lente no se estrelle con la
preparación.
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f)
g)
h)
i)
7.
8.
Una vez acercado el objetivo a la laminilla, proceder a observar en los oculares y
alejar el objetivo de la preparación lentamente mediante el tornillo de ajuste grueso o
macrométrico hasta la observación de manchas con formas poco definidas.
Continuar el enfoque moviendo suavemente el tornillo macrométrico hasta la
observación nítida de la muestra.
Hacer modificaciones con la entrada de luz moviendo el diafragma del condensador y,
si lo tiene, el dial del botón de encendido de manera que no lastime los ojos.
Modificar la distancia entre oculares acomodándola a sus ojos.
Hacer dibujos de lo observado haciendo énfasis en el tipo de aumento, objetivo,
colores, formas, etc.
Cambiar el objetivo mediante el revolver usando ahora el de 40x. Hacer las
observaciones.
ACTIVIDADES:
1. Investigar y hacer un resumen de la historia de los microscopios (desde los primeros
que se construyeron, las modificaciones que han sufrido y los que se utilizan
actualmente). Describir los tipos de microscopios existentes en la actualidad.
2. Hacer una breve descripción de las partes que forman un microscopio señalándolas
en el dibujo anexo.
3. Contestar las siguientes preguntas:
a) ¿Cuál es el aumento total resultante de un objeto visto a través de un microscopio con
oculares 10x en cada uno de los siguientes objetivos: 10x, 40x, 100x.
b) Explique la diferencia entre aumento y resolución.
c) ¿Qué parte del microscopio es más importante para determinar el poder de
resolución? ¿Por qué?
d) Usted está interesado en comprar un microscopio. El vendedor le muestra varios de
ellos, cada uno con alguno de los siguientes objetivos. ¿cuál desearía Usted comprar
y por qué?
43/0.20
160/0.16
40/0.50
160/0.16
(a)
(b)
40/0.70
160.016
(C)
e) La resolución del objetivo de un microscopio depende de la apertura numérica. ¿Es
mejor la resolución con una apertura numérica alta o baja? ¿por qué?
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f)
Suponga que su objetivo 10x tiene una apertura numérica de 0.25 y Usted está
usando un filtro verde que limita la longitud de onda de la luz incidente en el objetivo a
560 nm. ¿Cuál es el poder de resolución de este objetivo? ¿qué dimensiones tiene su
respuesta? Este es un valor teórico para la resolución, suponga que =260, ¿cuál
sería la resolución verdadera de su sistema?
g) ¿Qué entiende Usted por “diámetro de campo”? ¿qué pasa con el diámetro de campo
para cada aumento resultante al cambiar del objetivo 10x al 40x?
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