Variación es una forma de decir que existen diferencias entre los

USO DE RAPDs PARA EVALUAR LA VARIABILIDAD GENÉTICA
DE LA CARPA COMÚN (Cyprinus carpio, Linnaeus, ) en MÉXICO
Hortencia Hernández; M. Rodríguez*; H. C. Ramírez**
*Departamento del Hombre y su Ambiente
Laboratorio de Reproducción y Genética Acuícola
**Departamento de Sistemas Biológicos, Laboratorio de Ecología Molecular.
Calzada del Hueso no. 1100, Col. Villa Quietud, C. P. 04960 México, D. F.
e-mail: [email protected]
RESUMEN
Para aclarar la identidad biológica en México sobre las especies del género Cyprinus carpio comúnmente
llamadas barrigona, europea y espejo, se realizó la evaluación de marcadores moleculares RAPDs, a partir de
una muestra de 100 organismos adultos, de los que se obtuvo aleta y branquia, DNA de alto peso molecular,
probándose 16 primers de los cuales sólo 9 codificaron con el DNA de las tres líneas de carpas (genoma
antiguo), encontrando también variabilidad especifica, que se corroboró con evaluación morfométrica.
INTRODUCCION
Los avances científicos ocurridos en los últimos 20 años en la biología molecular han permitido la evaluación
de la diversidad individual y poblacional (Cortinas, 1997). Esta variación en cualquier sistema, puede reflejar
una combinación de factores ecológicos, genéticos e históricos (González, 1998).
Dentro de la biología molecular, los marcadores moleculares presentan una serie de aplicaciones, tanto en el
mejoramiento genético como en otras disciplinas.
Así para poder entender la importancia de la selección genética de la carpa común en México, es necesario
remitirse a las múltiples ocasiones de cuando esta especie fue introducida, si bien, es difícil tener todos los
registros, una cosa si es segura, fue traída de diferentes países tanto de Europa como de Asia dando así origen
a líneas propias, las cuales tienen diferentes características que van desde morfométricas, de comportamiento
hasta reproductivas debido a la selección que en cada una de ellas se ha realizado (Rodríguez et al., 2003).
Debido a las numerosas veces que esta especie ha sido introducida en nuestro país, su cría y liberación
extencionista, ha traído como consecuencia la pérdida de las características originales de estos organismos; no
solo por la crianza indiscriminada de diferentes variedades, si no, por la capacidad que poseen para
aclimatarse (adaptarse) más y mejor que las especies nativas a condiciones ambientales nuevas o cambiantes
(Niinemets et al., 2003).
Por lo tanto es importante realizar en México, estudios encaminados a conocer con mayor profundidad la
identidad de las especies, o la variación que estas hayan sufrido, ya que la carencia de especialización les ha
permitido adquirir una plasticidad fenotípica de muchos tipos (Tenorio, 2003).
Metodología
El presente trabajó se realizó en el laboratorio de ecología molecular , los organismos muestreados pertenecen
al Centro Acuícola de Tezontepec de Aldama, Hidalgo, a quién agradecemos las facilidades para el desarrollo
de esta investigación.
Los análisis moleculares se realizaron mediante la técnica de PCR y el uso de RAPDs. Para esto se
seleccionaron 100 reproductores de ambos sexos de las tres líneas: barrigona, europea y china, a las cuales se
les tomaron las diferentes medidas de longitud y peso, posteriormente a 72 organismos se les corto 1.5 cm. de
aleta caudal y de estos mismos a 32 se les corto .3 - .5 cm. de branquia. Las muestras obtenidas se
conservaron en solución fisiológica a temperatura ambiente, la extracción de DNA se llevo a cabo con el Kit
Wizard Genomic DNA Purification. Extraído el DNA de cada una de las muestras, en geles de agarosa al 1%
se confirmo la presencia o ausencia de dicho ácido nucleico. Revelados los resultados de las electroforesis
realizadas, se prepararon los diferentes cócteles de reacción para PCR los cuales contenían: Agua MQ, Buffer
, MgCl, DNTPs , Primer para RAPDs , Taq Polimerasa y DNA. Para lograr la estandarización de la técnica se
probaron 16 primers de secuencia corta, con las 100 muestras.
Una vez obtenidos los productos de PCR se hicieron geles de agarosa al 1.5% y se observaron en el
software Gel Compar II (Aplied Maths, Bélgica), analizándose los fragmentos de DNA de acuerdo con su
longitud.
RESULTADOS.
Los resultados obtenidos en este trabajo fueron los siguientes: de las 72 muestras analizadas de branquia; 29
tenían concentración baja,1 concentración media y 2 concentración alta. Con lo que respecta a las muestras de
aleta 3 presentaron una concentración muy baja de DNA, 58 concentración baja, 9 concentración media y 2
concentración alta.; pero ambos tejidos con DNA de alto peso molecular de 1300 a 2500 pb (figura 1 y 2).
Niveles de Concentración de DNA
Muestras de branquia de carpas
69
65
61
57
53
49
45
41
37
33
29
0
25
31
29
27
25
23
21
19
17
15
13
9
11
7
5
3
0
1
0.5
21
1
0.5
2
1.5
17
2
1.5
3
2.5
9
3
2.5
4
3.5
13
3.5
4.5
5
4
1
Calidad de concentración de DNA
4.5
1
Calidad de concentración de DNA
Niveles de Concentración de DNA
Muestras de aleta de carpa
Figura 1.- Calidad de concentración de DNA asignada con números; 1 muy baja, 2 baja, 3 media y 4 alta.
Figura 2. producto de la extracción de DNA y concentración del mismo.
Por otro lado de los 16 primers utilizados en las reacciones de PCR solo 9 codificaron con la información
genética de las tres líneas de carpas, a continuación en la figura 3 se muestra la acción de los oligos utilizados
y en la figura 4 se presentan los resultados de productos de PCR en un gel de agarosa al 1.5%
Nombre del primer
Secuencia
Amplificación
Línea o especie/ codificó
A-01A
A-02A
A-03A
A-04A
A-05A
A-06A
A-07A
A-08A
A-09A
A-10A
A-11A
A-12A
A-13A
A-14A
A-15A
A-16A
5’ – CAG GCC CTT C - 3’
Si
Espejo , Europea y Barrigona
5’ – TGC CGA GCT G - 3’
Si
Europea, Barrigona y Espejo
5’ – AGT CAG CCA C - 3’
Si
Espejo, Europea y Barrigona
5’ – AAT CGG GCT G - 3’
Si
Barrigona, Europea y Espejo
5’ - AGG GGT CTT G - 3’
Si
Europea, Barrigona y espejo
5’ – GGT CCC TGA C - 3’
No
5’ - GAA ACG GGT G - 3’
Si
Espejo, Barrigona y Europea
5’ - GTG ACG TAG G - 3’
Si
Europea, Espejo y Barrigona
5’ - GGG TAA CGC C - 3’
Si
Barrigona, Espejo y Europea
5’ - GTG ATC GCA G - 3’
Si
Europea, Barrigona y Espejo
5’ - CAA TCG CCG T - 3’
No
5’ - TCG GCG ATA G - 3’
No
5’ - CAG CAC CCA C - 3’
No
5’ - T CT GTG CTG G - 3’
No
5’ - TTC CGA ACC C- 3’
No
5’ - AGC CAG CGA A - 3’
No
Figura 3. Datos que muestran la acción de los oligonucleotidos utilizados
Figura 4. Productos de PCR
CONCLUSIONES
1. De los dos tipos de tejido de carpas utilizados en este trabajo , la aleta es el tejido que más
DNA presenta.
2. De las tres líneas de Carpa analizadas la europea es la que mostró mas resultados con casi
todas las muestras.
3. El uso de los RAPDs aplicados con la técnica de PCR son altamente sensibles.
BIBLIOGRAFIA
* Cortinas, H. 1997. Perspectivas de la biotecnología y los marcadores moleculares en el desarrollo de la
agricultura en México. Academia Mexicana de Ciencias. 48 (3): 51-56
* González, D. 1998.Marcadores moleculares para los estudios comparativos de la variación en ecología y
sistemática. Revista Mexicana de Micología. (14): 1-21.
* Niinemets, Ü., Valladares, F. y Ceulemans 2003. Leaf-level phenotypic variability and plasticity of invasive
Rhododentron ponticum and non-invasive Ilex aquifolium co-occurring at two contrasting European sites.
Plant, Cell and Environment.26:941-956.
* Rodríguez, M., Contreras, D., Cortés, A. y Rodríguez A. 2003. Manual de procedimientos para la
reproducción de crías mejoradas de Carpa Común Cyprinus carpio. Laboratorio de Reproducción y Genética
Acuícola.
* Tenorio-Colin, G. 2003. Caracterización isoenzimática de Oreochromis nilóticus y O. mossambicus
introducidos en México. Ciencia y Mar. 7 (19): 11-24.