Manual_Biofarmacia_Ene2014 - eVirtual UASLP

UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE SAN LUIS POTOSÍ
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
INSTRUCTIVO DEL LABORATORIO
DE BIOFARMACIA
Aprobado por H. Consejo Técnico Consultivo
NOVENO SEMESTRE
CARRERA:
QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO
M.C. MA. ESTHER FLORES MORENO
M.C. LORENA LOREDO HERNÁNDEZ
QFB. CRISTIAN JAZMÍN RODRÍGUEZ PINAL
DRA. ROSA DEL CARMEN MILÁN SEGOVIA
SEMESTRE ENERO – JULIO 2014
CONTENIDO
Página
Objetivos
1
Programa general. Calendario de contenidos teóricos
y sesiones prácticas del curso de Biofarmacia
2
Material didáctico, actividades programáticas y evaluación
6
Indicaciones generales de observación en el laboratorio
7
Instrucciones de seguridad e higiene
8
Bibliografía
9
Validación de métodos analíticos
11
Determinación de fármacos en fluidos biológicos por HPLC
17
Tabletas de Ácido acetilsalicílico
19
Semivida de los salicilatos
22
Modelo Farmacocinético “in vitro”
29
BIOFARMACIA
SEMESTRE ENERO - JULIO 2014
OBJETIVOS GENERALES DEL CURSO:
Al finalizar el curso el alumno será capaz de:
Aplicar sus conocimientos, habilidades y actitudes adquiridos para participar en estudios biofarmacéuticos y
farmacocinéticos durante el desarrollo o aplicación de un fármaco de aplicación terapéutica y su influencia en la
administración medicamentosa.
Determinar diferentes parámetros farmacocinéticos de importancia en el diseño de regímenes de dosificación, en la
monitorización de fármacos y en el uso racional de los medicamentos promoviendo con ética su función como integrante
de un equipo de salud.
OBJETIVO GENERAL DEL LABORATORIO:
Al final del curso el alumno será capaz de obtener e interpretar parámetros farmacocinéticos para conocer su aplicación
en la terapia medicamentosa para la prevención y tratamiento de enfermedades.
Aplicar los procedimientos y criterios de calidad que especifica la FEUM y la NOM- 177-SSA1-1998 para demostrar
que los medicamentos cumplan con los requisitos sanitarios para uso humano.
Fomentar en el alumno una actitud de disposición y colaboración para trabajar en equipo con profesionales de otras
áreas de la salud.
Aplicar los procedimientos para tratar los desechos químicos generados durante la práctica, así como las medidas
básicas de seguridad e higiene, haciendo conciencia de su compromiso profesional para el cuidado ambiental y de la
salud.
UNIDADES PROGRAMÁTICAS:
.- BIOFARMACIA.
.- FARMACOCINÉTICA MONOCOMPARTIMENTAL
III.- FARMACOCINÉTICA BICOMPARTIMENTAL Y NO COMPARTIMENTAL.
IV.- FARMACOCINÉTICA CLINICA.
1
UNIDAD PROGRAMÁTICA I
BIOFARMACIA
Objetivo particular:
El alumno relacionará los aspectos fisicoquímicos y cinéticos con los requerimientos biofarmacéuticos de los
medicamentos de acuerdo a la normatividad vigente.
CONTENIDOS TEÓRICOS
Presentación del curso
Introducción a la Biofarmacia y a la
Farmacocinética.
FECHA
Enero 20 a
Febrero 20
Enero
20
21
Procesos de liberación y disolución de
fármacos. Teorías de la disolución.
22
Cinéticas de disolución. Orden cero y uno.
23
farmacopeica.
27 y 28
Biodisponibilidad y bioequivalencia y
biocomparabilidad.
29 y 30
Evaluación de la biodisponibilidad,
bioequivalencia y biocomparabiliad de
productos medicamentosos.
Febrero
4a6
Requerimientos estadísticos.
10 a 13
Interpretación de estudios de BD, BE y
BC.
Actividad y dinámica de equipos:
búsqueda de información en internet y
revisión de artículos científicos
FECHA
Enero 21 a
Febrero 20
No.1
Validación de un método
analítico.
20 y 21
NOM-177-SSA1-2013
Prueba de disolución
Resolución de problemas.
SESIONES PRÁCTICAS
17 y 18
19
EXAMEN.
20
2
Primera parte
Revisión
Validación de Métodos
Analíticos.
(NOM-177-SSA1-1998)
Taller de validación.
Enero
21 y 23
28 y 30
Segunda parte
Precisión del sistema, linealidad,
exactitud y repetibilidad del
método.
Práctica.
Febrero
4y6
Tercera parte
Reproducibilidad del método.
Práctica.
11y 13
No. 2
Cuantificación de fármacos en
fluidos biológicos por HPLC
Demostración y revisión de
artículos
18 y 20
UNIDAD PROGRAMÁTICA II
FARMACOCINÉTICA MONOCOMPARTIMENTAL
Objetivo particular:
Al finalizar la unidad el alumno aplicará procedimientos de farmacocinética compartimental para el cálculo e
interpretación de los principales parámetros farmacocinéticos de importancia clínica.
CONTENIDOS TEÓRICOS
Revisión de examen de la Unidad .
Modelos fisiológicos y modelos
farmacocinéticos. Conceptos.
Modelos compartimentales.
FECHA
Febrero 24 a
Abril 1
Febrero
24 y 25
No. 3
Tabletas de ácido acetilsalicílico
Febrero
25 y 27
25
Primera parte
Elaboración y discusión de plan
de trabajo.
Segunda parte y tercera parte
Realización de las actividades
correspondientes a cada rol
asignado
Marzo
4y6
Cuarta parte:
Presentación y discusión de
resultados
11 y 13
Farmacocinética lineal y no lineal.
26 y 27
Modelo monocompartimental.
Marzo
3a5
Administraciones intravasculares.
10 y 11
Datos Urinarios.
12 y 13
Cálculo de parámetros farmacocinéticos.
Resolución de problemas.
18 y 19
Administración extravascular.
20 y 24
Cálculo de parámetros farmacocinéticos
con datos plasmáticos y urinarios.
Resolución de problemas.
25 y 26
Factores que afectan los parámetros
farmacocinéticos
27 y 31
EXAMEN.
FECHA
Febrero 25 a
Abril 3
6
Cálculo de parámetros farmacocinéticos
con datos plasmáticos. Resolución de
problemas.
Actividad y dinámica de equipos:
búsqueda de información en internet y
revisión de artículos científicos
SESIONES PRÁCTICAS
No. 4
Tiempo de semivida de los
salicilatos
Primera parte
Análisis clínicos
Entrega de resultados
18 al 20
Certificado médico
24 al 28
29
Abril
1
Segunda parte
Administración oral de una
tableta de ácido acetilsalicílico.
Preparación de material y
soluciones
Abril
1y3
5
Tercera parte
Análisis de muestras urinarias y
análisis de resultados.
3
21
UNIDAD PROGRAMÁTICA III
FARMACOCINÉTICA BICOMPARTIMENTAL Y NO COMPARTIMENTAL
Objetivo particular:
Al finalizar la unidad el estudiante reconocerá la importancia y aplicación de la farmacocinética
bicompartimental y no compartimental en la estimación de los principales parámetros farmacocinéticos.
CONTENIDOS TEÓRICOS
FECHA
Abril 2 a 30
Revisión de examen de la Unidad II.
Abril
2
Modelos bicompartimentales.
3y7
Cálculo de parámetros farmacocinéticos.
Resolución de problemas.
8y9
Bases de la farmacocinética no
compartimental.
10
Administración intravenosa y extravasal.
Tratamiento no compartimental.
28
Momentos estadísticos. Tiempo medio de
residencia. Parámetros farmacocinéticos:
semivida y área bajo la curva.
28 y 29
Resolución de problemas.
30
4
SESIONES PRÁCTICAS
FECHA
Abril 8 a
Mayo 8
No. 5
Modelo farmacocinético
“in vitro”
Práctica
Abril
8 y 10
No.6
Programas Farmacocinéticos
Centro de Cómputo
Mayo
6y8
UNIDAD PROGRAMÁTICA IV
FARMACOCINÉTICA CLÍNICA.
Objetivo particular:
El estudiante adquirirá las bases farmacocinéticas para aplicaciones en el diseño de regímenes de
dosificación y la monitorización de fármacos en la clínica.
CONTENIDOS TEÓRICOS
FECHA
Mayo 5 a 28
Cinética de dosis múltiple.
Mayo
5a8
Resolución de problemas.
8 a 13
Monitorización de fármacos.
.
Resolución de problemas.
14 a 19
20 y 21
Tópicos de farmacocinética clínica.
22
Actividad y dinámica de equipos:
búsqueda de información en internet.
Actividad individual: Manejo de Excel
para cálculos farmacocinéticos.
26
EXAMEN.
27
5
SESIONES PRÁCTICAS
FECHA
Mayo 6 al 22
No.7
Cálculos Farmacocinéticos.
Revisión y presentación de
artículos.
Mayo
6y8
No. 8
Dosificaciones múltiples y
programa PKS
Centro de Cómputo
20 y 22
MATERIAL DIDÁCTICO:
Bibliografía básica.
Publicaciones recientes.
Diapositivas ppt, videos y software
ACTIVIDADES PROGRAMÁTICAS:
Elaboración de reportes de prácticas.
Resolución de ejercicios, problemas y tareas.
Revisión y discusión de artículos.
Revisión de monografías de fármacos.
Asistencia a conferencias, seminarios, congresos, etc.
EVALUACIÓN DE ACUERDO AL REGLAMENTO INTERNO DE LA FACULTAD.
La calificación parcial de cada Unidad comprenderá la calificación del exámen, tareas y revisión de artículos
y trabajos.
En el caso de que el promedio de calificaciones parciales sea igual o mayor a 6.0 (seis), éste se ponderará
en la evaluación final como el 90% y el otro 10% corresponderá a la calificación final de laboratorio.
Si el promedio de calificaciones parciales es menor a 6.0 (seis) no se considerará esta ponderación, siendo
ésta la calificación final del curso.
El laboratorio se calificará en base al promedio de la calificación de las prácticas.
La práctica se evaluará en dos partes: La primera parte, un 50% corresponde al desempeño del alumno
durante la sesión de laboratorio. La segunda parte, un 50% es la calificación del reporte.
Para la primera parte, el 50% se dividirá como sigue:
30% evaluación previa al desarrollo de la práctica en cuestionario oral o escrito.
20% evaluación durante el desarrollo de la práctica.
Para que una práctica sea ACEPTADA deberá tener una calificación mínima de 6.0 (seis). Una práctica
será NO ACEPTADA en el caso contrario.
NOTA: En el caso de las sesiones prácticas que comprenden varias partes para su realización, se
calificarán cada una de estas partes como una práctica individual.
Para ACREDITAR el laboratorio se necesita que el alumno tenga aceptadas al menos el 75% del total de
las prácticas y un promedio de calificación igual o mayor a 6.0 (seis).
Un alumno NO ACREDITARÁ el laboratorio cuando reúna más del 25% del total de prácticas como
prácticas NO ACEPTADAS o un promedio de calificación menor a 6.0 (seis).
La calificación final del curso integrará los conocimientos, habilidades y actitudes adquiridos y demostrados
por el alumno.
6
INDICACIONES GENERALES DE OBSERVACIÓN EN EL LABORATORIO
 Asistir puntualmente con una tolerancia de 5 minutos de retardo. Después de ese tiempo
se permitirá la entrada al alumno hasta 10 minutos de retardo en cuyo caso se sancionará
con 10 % menos en la calificación del reporte.
 La duración estimada de cada sesión práctica es de 3 horas.
 El alumno asistirá la práctica con el manual de laboratorio o con el protocolo de la
práctica a realizar. Cada alumno deberá trabajar con su propia calculadora durante el
procedimiento de las prácticas.
 Durante la sesión no se permitirá la entrada o salida de alumnos, excepto con previa
autorización del maestro. No se permiten visitas de alumnos ajenos a la práctica.
 Antes que el alumno abandone el laboratorio deberá entregar los resultados solicitados
por el maestro.
 Se deberá entregar el reporte de la práctica realizada, en la siguiente sesión de laboratorio.
La elaboración y presentación del reporte deberá reflejar la formación y criterios
académicos del alumno adoptados durante toda su formación académica, por lo tanto no
deberá complacerse en cuanto a preferencias de estilo. La calificación del reporte
principalmente es de FONDO y no de FORMA.
 El reporte deberá entregarse perfectamente LIMPIO y ORDENADO. En la portada del
reporte deberá indicar los siguientes datos: nombre de la práctica, nombre(s) del
alumno(s), día de laboratorio, horario y número de equipo.
 El reporte deberá contener cada una de las secciones solicitadas en el manual incluyendo
las referencias bibliográficas las cuales deberán ser citadas de acuerdo al Sistema
Vancuver.
 La elaboración de gráficas deberá ajustarse a los conocimientos bien definidos que el
alumno ha adquirido durante su formación académica.
 En el laboratorio existe bibliografía disponible para que los alumnos la consulten durante
los horarios de asesoría.
7
INSTRUCCIONES DE SEGURIDAD E HIGIENE
 El uso de bata limpia y abotonada, lentes de seguridad, guantes y cubre boca es
obligatorio durante las prácticas donde se manejen reactivos CRETI.
 El laboratorio cuenta con el siguiente equipo y áreas de seguridad: regadera, extintor,
botiquín equipado con medicamentos y material clínico para emergencias médicas,
campana de extracción para la preparación de reactivos corrosivos, ácidos y solventes y
salida de emergencia.
 No se permitirá la ingesta de bebidas y/o alimentos dentro del laboratorio.
 No se permitirá que el alumno pipetee cualquier sustancia con la boca.
 En caso de cualquier contingencia durante el manejo de sustancias farmacológicas y
reactivos químicos, se deberá dar aviso inmediato al maestro y atender a las indicaciones
necesarias.
 En caso de derrame químico se deberá:
o Despejar el área.
o Utilizar guantes de hule.
o Colocar los desechos generados en bolsa de plástico y etiquetados señalando el
nombre de laboratorio, tipo de desechos, cantidad y fecha.
o Mantener en resguardo, en un área designada del laboratorio, desechos de forma
provisional y entregar en los tiempos programados por la Comisión de Seguridad
e Higiene a la empresa designada para su posterior tratamiento.
o En caso de ácido o álcali antes de recoger, rociar con agentes neutralizantes, y
limpiar el área del derrabe con papel adsorbente haciendo movimiento circular de
afuera hacia adentro. Desechar el papel a la basura común.
o Lavarse las manos con jabón y abundante agua.
o En caso de derrame de fluidos biológicos, rociar con una solución de hipoclorito
de sodio al 5 %. Dejar actuar el desinfectante por unos minutos y proceder a
recoger con papel adsorbente y con movimiento circular de afuera hacia adentro.
Limpiar el área del derrame y desechar el papel a la basura común.
o En caso de ruptura de material de vidrio despejar el área. Utilizar recogedor y
escoba solo para recoger el vidrio roto y depositarlo en un contenedor rígido
destinado a la recolección de vidrio roto.
 Al término de la sesión la mesa de trabajo deberá limpiarse con detergente y un trapo
húmedo en agua, el material utilizado se entregará limpio y en orden.
 Si hubiese ruptura de material de cristalería del laboratorio, las piezas punzo cortantes se
depositarán en un contenedor rígido para vidrio. Los alumnos responsables deberán
reponer el material roto.
 Antes de abandonar el laboratorio el alumno deberá lavarse las manos con jabón y agua.
8
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Y ELECTRÓNICAS.
BIBLIOGRAFÍA BÁSICA
1. ABBOTTBASE; Pharmacokinetic System (PKS); Laboratorios Abbott; EUA, 2000.
2. Base de Datos Medline-PubMed de la Biblioteca Nacional del Congreso de los EUA
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/.
3. Cárdenas Rodríguez, Hilda Lilia; Aspectos biofarmaceúticos de la evaluación de
medicamentos; Universidad Autónoma Metropolitana; México, 1996.
4. Clark, Bruce; Introducción a la farmacocinética; Acribia; España, 1989.
5. Dipiro, Joseph T.; Blovin, Robert A; Concepts in clinical pharmacokinetics: a self
instructional course; 2a. Edición; American Society of Health System Pharmacocist
Product Development Office; USA, 1996.
6. Dipiro, Joseph T.; Blovin, Robert A; Concepts in clinical pharmacokinetics: a self
instructional course; 3a. Edición; American Society of Health System Pharmacocist
Product Development Office; USA, 2002.
7. EBSCO Industries; EBSCO Information Services. (Cinta de datos electrónicos:
www.ebsco.com); EBSCO Industries; USA, 2007.
8. Gibaldi, Milo; Farmacocinética; Reverté; España, 1982.
9. Gómez Almaraz, Liztli; López Arellano, Raquel; Bioequivalencia; 1ª. Edición; Universidad
Nacional Autónoma de México. Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán; México, 2005.
10. Goodman & Gilman; Las bases farmacológicas de la terapéutica; 11a. Edición; McGrawHill Interamericana; México, 2007.
11. Guía de Recursos de Farmacia, Farmacología y Toxicología THE “VIRTUAL”PHARMACY
CENTER
Martindale’s
Health
Science
Guide
–
2003
http://www.sci.lib.uci.edu/HSG/Pharmacy.html#PRACTICE.
12. Jung Cook, Helgi; Problemas de Biofarmacia; UNAM; México, 2002.
13. Katzung, Bertram G; Farmacología básica y clínica; 9a. Edición; El Manual Moderno;
México, 2005.
14. Kenneth R. Thomson; Thomson MICROMEDEX: Healthcare Series. (Cinta de datos
electrónicos: www.thomsonhc.com); Thomson Healthcare; USA, 2007.
15. Labaune Pierre, Jean; Manual de Farmacocinética; 1a. Edición; Masson; España, 1991.
16. NOM-177-SSA1-1998. Que establece las pruebas y procedimientos para demostrar que un
medicamento es intercambiable. Requisitos a que deben sujetarse los terceros autorizados
que realicen las pruebas; Secretaría de Salud; México, 1999.
17. Secretaria de Salud. Comisión permanente de Farmacopea de los Estados Unidos
Mexicanos; Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos; 8ª. Edición; Secretaría de
Salud; México, 2004.
18. Shargel, Leon; Applied biopharmaceutics and pharmacokinetics; 4a. Edición; McGrawHill; USA, 1999.
19. Skoog, Douglas A; Análisis instrumental; 4a. Edición; McGraw-Hill; Madrid, 1994.
20. Thompson, Judith; Práctica contemporánea en farmacia; McGraw-Hill; México, 2006.
21. United States Pharmacopeial Convention; Farmacopea de los Estados Unidos de América.
Formulario Nacional; 29a. Edición; United States Pharmacopeial Convention; USA, 2006.
9
BIBLIOGRAFÍA COMPLEMENTARIA
1. Banker, Gilbert S; Modern pharmaceutics; 2a. Edición; USA, 1990.
2. Beers, Mark H; El manual Merck de diagnóstico y tratamiento; 10ª. Edición; Harcourt;
España, 1999.
3. Birkett, Donald J; Pharmacokinetics made easy; McGraw-Hill; USA, 2002.
4. Boroujerdi, Mehdi; Pharmacokinetics: principles and applications; McGraw-Hill, 2002.
5. Bourne, D. W. A; Mathematical modeling of pharmacokinetic data; Technomic, 1995.
6. Consejo de Expertos; Farmacopea de los Estados Unidos de América. Formulario
Nacional; 29a. Edición; United States Pharmacopeial Convention; USA, 2006.
7. Council of Experts; The United States pharmacopeia. The national formulary; 25a.
Edición; United States Pharmacopeial Convention; USA, 2001.
8. Chamberlain, Joseph; The analysis of drugs in biological fluids; 2a. Edición; CRC; USA,
1995.
9. Chow, Shein-Chung; Enciclopedia of biopharmaceutical statistics; 2ª. Edición; Marcel
Dekker; USA, 2003.
10. Flores, Francisco Javier; Castañeda, Gilberto; Biodisponibilidad y bioequivalencia en los
medicamentos genéricos; Asclepius XXI; México, 2002.
11. Gibson, Mark; Pharmaceutical preformulation and formulation: a practical guide from
candidate drug selection to commercial dosage form; CRC / Interpharm; USA, 2004.
12. Klaassen Curtis, D; Casarett & Doull manual de toxicología : la ciencia básica de los
tóxicos; 5ª. Edición; McGraw-Hill Interamericana; México, 2001.
13. Martindale, William; The extra pharmacopoeia; 30a. Edición; The Pharmaceutical
Gran Bretaña, 1993.
14. McCabe, Beverly J; Handbook of food-drug interactions; CRC; USA, 2003.
15. Rosenstein Ster, Emilio; Diccionario de especialidades farmacéuticas; 51ª. Edición;
Thomson PLM; México, 2005.
16. Schoenwald, Ronald D; Pharmacokinetic principles of dosing adjustments: understanding
the basic; USA, 2001.
17. The Pharmaceutical Society of Grant Britain. Departament of Pharmaceutical Sciences;
Clarke's isolation and identification of drugs : in pharmaceuticals, body fluids and post mortem material; 2a. Edición; The Pharmaceutical; Gran Bretaña, 1986.
18. Vogel, Arthur I; Química analítica cualitativa; 6a. Edición; Kapelusz; Buenos Aires, 1983.
19. Wagner, John G; Farmacocinética clínica; Reverté; España, 1983.
20. Weiner, Murray; Adverse reactions to drug formulation agents : a handbook of excipients;
Marcel Dekker; USA, 1989.
21. WinNonlin; WinNonlin. Versión 4.0; Pharsight Corporation; California, 2003.
22. Winter, Michael E; Farmacocinética clínica básica; Díaz de Santos; España, 1994.
23. Zucchero, Frederic J; Evaluations of drug interactions; First DataBank; USA, 1999.
10
Sesión No 1.
VALIDACIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO
PRÁCTICA
INTRODUCCIÓN:
Para la cuantificación de un fármaco en fluidos biológicos es imprescindible la utilización
de un método analítico que permita cuantificar el principio activo. Para asegurar
confiabilidad, los métodos analíticos se someten a un proceso de validación, mediante el
cual se comprueba si el método es lo suficientemente confiable y si los resultados previstos
se obtienen dentro de las condiciones prefijadas.
Así, la validación de un método analítico se define como el proceso por el cual se establece
por medio de estudios de laboratorio, que un método es apropiado para el uso propuesto.
En la NOM-177-SSA1 se señalan los principales atributos para validar un método analítico
en fluidos biológicos.
OBJETIVO:
Validar el método analítico de Trinder para cuantificar salicilatos en orina como parte de
un estudio de farmacocinética.
DINÁMICA DE TRABAJO:
La práctica está dividida en tres partes.
Primera parte: Taller de validación.
Segunda parte: Precisión del sistema, linealidad, exactitud y repetibilidad.
Tercera parte:
Reproducibilidad intralaboratorio o Precisión intermedia.
Primera parte.
Taller de validación.
) Se desarrollará un taller para demostrar el cálculo de los diferentes parámetros de
validación estadística de un método analítico.
11
Segunda parte.
Precisión del sistema, linealidad, exactitud y repetibilidad del método.
MATERIAL:
- Solución de Trinder
- Ac. fosfórico al 85%
- Espectrofotómetro UV/VIS
- Centrífuga
- Vortex
- Micropipetas
- Tubos de ensaye de 10 mL
- Pipetas serológicas
- Pipetores
- Gradillas
PROCEDIMIENTO:
1) Para todo el grupo de laboratorio, se deberá traer aproximadamente 100 mL de orina
libre de fármacos.
2) Se determinarán los principales parámetros de validación para el método analítico de
Trinder para salicilatos:
Precisión del sistema. Realizar seis lecturas analíticas de un estándar de concentración
intermedia de la curva de calibración para salicilatos.
Selectividad. Obtener el espectro de absorción en el UV aplicando un “barrido” a una
alícuota de un estándar de AS en orina para verificar las longitudes de onda de máxima
absorbancia.
Linealidad. Analizar por triplicado una curva de calibración de estándares de AS en orina.
Precisión del método.
Repetibilidad. En un mismo día analizar por quintuplicado estándares de
concentración baja, media y alta respectivamente, diferentes a la curva de calibración.
Reproducibilidad Intralaboratorio o Precisión Intermedia. Analizar por
triplicado durante dos días las mismas concentraciones de estándares empleadas para la
repetibilidad del método.
Exactitud. Realizar cálculos con los datos de linealidad y precisión empleando tres
concentraciones de estándares.
Método analítico de Trinder para Salicilatos.
1) Solución patrón de AS en agua. Preparar una concentración de 1000 g/mL.
2) Estándares de calibración en orina. A partir de la solución patrón de AS preparar las
siguientes concentraciones de AS en orina:
Curva de calibración
Estándar
Concentración
No.
(g/mL)
1
50
2
200
3
400
4
600
5
800
6
1000
Estándares controles
Estándar
Concentración
No.
(g/mL)
12
1
100
2
500
3
900
3) Blanco de orina. Colocar en un tubo de ensaye 0.125 mL de orina, 0.125 mL de ácido
fosfórico al 85 %, 1mL de agua y 1mL de reactivo de Trinder. Mezclar perfectamente en
vortex.
4) Análisis de la curva de calibración y de las muestras problema. En un tubo de ensaye
colocar 1mL de agua destilada y añadir 0.15 mL del punto de la curva de calibración o de
la muestra urinaria. Mezclar en vortex y añadir 1mL de reactivo de Trinder. Mezclar
perfectamente y dejar reposar. Las muestras problema se analizarán por duplicado.
5) Leer la absorbancia de la curva de calibración y de las muestras tratadas a 540 nm
empleando el blanco de orina.
RESULTADOS:
Tabla 1.1
Precisión del sistema.
Equipo: _________________________
Fecha: ________________________
Nombre del analista: ________________________________________________
Concentración del estándar de AS analizada: _____________________________
Lecturas espectrofotométricas para la precisión del sistema
Lectura
Absorbancia
=_______
1
2
3
4
5
6
X = __________
DE = __________
CV = __________
Observaciones:
13
Tabla 1.2
Elaboración de estándares de AS
Equipo: ____________________________
Fecha: _____________________
Nombre del analista: ___________________________________________________
Preparación de la solución patrón
Pureza del estándar de AS:
_________
Preparación de los estándares y controles en orina a partir de la solución patrón.
Curva de calibración:
Estándar No.
Vol. medido de la
solución stock (l o mL)
Vol. de aforo final
(mL)
Concentración final
(g/mL)
Vol. de aforo final
(mL)
Concentración final
(g/mL)
Precisión: (Repetibilidad y Reproducibilidad)
Estándar control
No.
Vol. medido de la
solución stock (l o mL)
Observaciones:
14
Tabla 1.3
Linealidad del método.
Equipo: _____________________
Fecha: ______________________________
Nombre analista 1: ___________________ Nombre analista 2: ____________________
Absorbancia  =________
Concentración
g/mL
A1
A2
A3
Promedio
DE
%CV
r=
r2 =
m=
b=
Tabla 1.4
Repetibilidad y reproducibilidad del método
Concentración (μg/mL)
100
500
900
1ª repetición
2ª repetición
3ª repetición
4ª repetición
5ª repetición
Media aritmética
DE
%CV
Concentración (μg/mL)
100
500
1ª repetición
2ª repetición
3ª repetición
Media aritmética
DE
%CV
Observaciones:
15
900
Tercera parte.
Reproducibilidad del método (día 2).
MATERIAL:
Indicado previamente.
PROCEDIMIENTO:
1) Se aplicará el método de Trinder.
2) Precisión del sistema. 6 lecturas de un mismo estándar de la curva de calibración de
estándares empleado el Día 1.
3) Reproducibilidad del método (Día 2). Análisis por triplicado de los estándares control
empleados en el Día 1 y los mismos analistas. Para conocer las concentraciones del análisis
de cada punto, se partirá de una curva de calibración elaborada el mismo día.
RESULTADOS:
Anotar los resultados en las tablas ya conocidas (precisión del sistema, elaboración de
estándares).
REPORTE:
Demostrar la validez estadística del método analítico presentando tablas de datos, gráficas y
toma de decisiones. Archivo en Excel.
Resumir en una tabla todos los criterios de validación obtenidos y emitir un dictamen
general de la validez estadística del método analítico. Esta tabla debe presentarse en una
sola hoja y diseñada en computadora. Deberá estar firmada por los miembros del equipo
indicando los nombres de los analistas que realizaron la validación.
16
Sesión No.2
CUANTIFICACIÓN DE FÁRMACOS EN FLUIDOS BIOLÓGICOS POR HPLC.
DEMOSTRACIÓN Y REVISIÓN DE ARTÍCULOS
INTRODUCCION:
La cromatografía puede definirse como una técnica que separa una mezcla de solutos
basada en la velocidad de desplazamiento diferencial de los mismos que se establece al ser
arrastrados por la fase móvil (líquida o gaseosa) a través de un lecho cromatográfico que
contienen la fase estacionaria, la cual puede ser líquida o sólida. Las dos fases se eligen de
tal forma, que los componentes de la muestra se distribuyen de modo distinto entre la fase
móvil y la fase estacionaria. Aquellos componentes que son fuertemente retenidos por la
fase estacionaria se mueven lentamente con el flujo de la fase móvil; los componentes que
se unen débilmente a la fase estacionaria, se mueven con rapidez.
En la figura se muestra cómo se separan los analitos en la muestra. “C” tiene más afinidad
por la fase móvil que “A” y “B”, por lo que eluye con mayor rapidez de la fase estacionaria,
finalmente “A” que tiene más afinidad por la fase estacionaria, eluye al final. Los
componentes de la muestra se separan en bandas o zonas discretas que pueden analizarse
cualitativa y cuantitativamente. En cromatogragía de líquidos de alta resolución (CLAR, o
HPLC por sus siglas en inglés High Performance Liquid Chromatographic), la separación
de los componentes de una muestra se observa en forma de un cromatograma. Las abcisas
indican el tiempo de retención del compuesto. Las ordenadas corresponden a la señal
analógica proveniente del detector (absorción, índice de refracción, fluorescencia, etc.). La
altura de la señal indica la intensidad de la respuesta, en general es proporcional a la
concentración del soluto (se evalúa por medición del área bajo la curva o altura de pico).
A
B
C
La distribución de los componentes de una muestra se debe a la interacción específica entre
moléculas de la muestra y las fases estacionaria y móvil, debido a varios tipos de fuerzas
intermoleculares. Algunos tipos de cromatografía son: adsorción, partición, exclusión,
intercambio iónico.
La cromatografía de partición está basada en el reparto de los componentes de la muestra
entre una fase móvil líquida y una fase estacionaria también líquida inmiscible, fijada en un
soporte sólido inerte siendo las diferencias de solubilidad la causa de la discriminación de
17
los solutos. Según la naturaleza de la fase móvil y la fase estacionaria, en cromatografía
líquida pueden distinguirse dos tipos:
 Cromatografía líquida “normal”: en ella la fase móvil es de naturaleza no polar,
mientras que la fase estacionaria es fundamentalmente polar. Se denomina así por
ser la modalidad que se desarrolló en primer lugar.
 Cromatografía líquida en “fase invertida o reversa”: modalidad en que la fase móvil
es polar y la estacionaria no polar. Actualmente tiene mayor importancia pues más
del 85 % de las aplicaciones en CLAR se basan en esta alternativa.
Su universalidad se basa en el hecho de que todas las moléculas orgánicas tienen
regiones hidrofóbicas más o menos amplias en su estructura y son capaces de interaccionar
con la fase estacionaria.
Polar
Cromatografía
en fase normal
Cromatografía
en fase reversa
Apolar
Polar
Apolar
Polaridad de fase móvil
La fase móvil puede ser: Composición constante durante el proceso cromatográfico
(modalidad isocrática), o formación de un gradiente de composición de la fase móvil
durante el proceso de separación (modalidad de gradiente).
Un equipo HPLC debe contar con inyector, reservorio para solventes, bomba, precolumna
y columna, detector, registrador de datos, colector de desechos, entre otros accesorios.
El tratamiento previo de una muestra biológica dependerá de la naturaleza de ésta antes de
inyectarla en el sistema cromatográfico.
OBJETIVO:
Observar y discutir el análisis cromatográfico de fármacos en una muestra biológica previo
al tratamiento y extracción de los analitos de interés. Analizar artículos de análisis
cromatográfico y la validación del método analítico.
DINÁMICA DE TRABAJO:
1 Se realizará una demostración del proceso de análisis de muestras biológicas que
contienen fármacos, desde su procesamiento previo hasta su separación en el cromatógrafo.
2 Se discutirán dos artículos científicos específicos del tema.
REPORTE:
Se elaborará de acuerdo a las indicaciones del profesor.
18
Sesión No.3
TABLETAS DE ÁCIDO ACETILSALICÍLICO.
PRÁCTICA
INTRODUCCION:
Las distintas formulaciones medicamentosas y los métodos de fabricación pueden alterar
las características de disolución, de absorción y de biodisponibilidad del principio activo
originando diferencias en la magnitud de su actividad terapéutica.
La calidad farmacopeica es uno de los primeros requisitos que debe cubrir un medicamento
para su uso en la clínica. En la FEUM están descritos todos los estudios y pruebas, así
como las especificaciones técnicas que los preparados farmacéuticos deben cumplir antes
de su salida al mercado.
OBJETIVO:
Determinar el control de calidad y los parámetros biofarmacéuticos "in vitro" de tabletas de
ácido acetilsalicílico (AAS) y verificar si el producto cumple las especificaciones oficiales
para posteriormente realizar un estudio "in vivo".
DINÁMICA DE TRABAJO:
En esta práctica de laboratorio se aplicará el aprendizaje condicional cooperativo bajo la
siguiente estructura.
1. Aportación del laboratorio al perfil del egresado
Aplica sus conocimientos, habilidades y actitudes en el análisis
farmacopeico de tabletas de aspirina para determinar su calidad.
2. Habilidades, actitudes, valores y competencias a desarrollar en el estudiante
ii. Competencias:
Aplica metodologías para analizar medicamentos.
iii. Habilidades:
Plantea objetivos claros y alcanzables
Consulta y analiza información bibliográfica
Planea y desarrolla la metodología de investigación
Maneja material de laboratorio
Emplea recursos computacionales e informáticos
Elabora reportes e informes.
iv. Actitudes:
Se compromete con su equipo de trabajo.
Posee sentido de actualización continua.
19
Cumple en tiempo y forma con sus deberes.
Se interesa por los problemas de salud relacionados con
medicamentos.
Actividades del estudiante
1. Comprender el sistema gerencial y asignación de roles
2. Consultar bibliografía básica y actualizada para decidir el tipo de análisis a
aplicar
3. Plantear los objetivos
4. Proponer el plan de trabajo y la metodología que permita determinar el
cumplimiento de los requisitos farmacopeicos de un producto medicamentoso
(más adelante se describe con mayor especificidad), para lo cual contará con
a. Recursos humanos, equipo y materiales
b. Producto farmacéutico a analizar
c. Bibliografía
d. Preparación de soluciones a utilizar en su experimento.
e. Aplicación de metodología
2.
Obtención de resultados
3.
Análisis y discusión de Resultados
4.
Conclusiones y campo de aplicación
Actividades del instructor
a. Aplica un examen rápido con preguntas específicas del tema
b. Describe y explica el problema a resolver
c. Explica el sistema de trabajo con asignación de roles y responsabilidades de
cada estudiante
d. Da un tiempo de 300 min para que el equipo de estudiantes discutan como
realizarán el protocolo de la práctica
e. Es mediador en todas las etapas de la práctica
f. Observar y registra a través de rubricas de desempeño
g. Realiza preguntas que estimulen la reflexión
h. Evalúa: calificación obtenida en el examen escrito antes de la práctica, tabla
de cotejo del desempeño del estudiante y presentación oral del protocolo y
resultados con discusión
La práctica estará organizada en cuatro partes para su realización. Cada equipo elegirá un
líder para supervisar las actividades propuestas y para mantener una permanente
comunicación con el profesor del grupo.
Primera parte:
Elaboración y discusión de plan de trabajo.
Segunda y tercera parte:
Realización
de
las
actividades
correspondientes a cada rol asignado, de
manera cooperativa.
Cuarta parte:
Presentación de Resultados
20
Primera parte.
Elaboración y discusión de plan de trabajo.
1) Cada equipo revisará la Farmacopea de los Estados Unidos Mexicanos (última edición
disponible), para analizar y discutir la aplicación de las principales pruebas farmacopeicas
que determinen la calidad de un lote de tabletas de AAS.
2) Se consultará otras fuentes de información farmacológicas y toxicológicas para elaborar
una monografía del AAS con los aspectos más relevantes que debe conocerse acerca de
éste fármaco que posteriormente será administrado a un voluntario sano.
3) Con la información del análisis farmacopeico y los aspectos farmacológicos y
toxicológicos, se elaborará un protocolo de trabajo que se desarrollará experimentalmente
en las sesiones posteriores.
Segunda y tercera parte.
Realización de las actividades correspondientes a cada rol asignado.
MATERIAL:
El que cada equipo de alumnos indique en su protocolo.
PROCEDIMIENTO.
1) Cada equipo preparará una guía de trabajo, diagrama de procesos y organización de la
práctica.
2) Realizarán las actividades correspondientes a cada rol asignado, pero de manera
cooperativa.
3) Tomarán las decisiones requeridas, medirá tiempos invertidos, movimientos realizados.
Identificará la influencia de los factores no considerados en el desarrollo de sus actividades.
4) Registrarán datos, cálculos y resultados. Discutirán sobre la pertinencia de resultados y
aplicarán sus criterios para toma de decisiones.
5) Prepararán el reporte y la presentación de resultados.
Cuarta parte
Presentación de Resultados
PROCEDIMIENTO.
1
Cada equipo de alumnos realizará una presentación en power point acerca del
trabajo realizado, los datos, cálculos y resultados obtenidos, así como el dictamen de los
mismos. Seguirá las recomendaciones del líder y del profesor.
2
Se realizará la discusión global en todo el grupo y se decidirá sobre la calidad
farmacopeica del lote de tabletas de AAS analizado.
3
Cada equipo entregará un informe escrito de la práctica de acuerdo a las
instrucciones del profesor. La evaluación será aplicada bajo los conceptos de competencias
aplicadas y desarrolladas.
21
Sesión No. 4
TIEMPO DE SEMIVIDA DE LOS SALICILATOS
PRÁCTICA
INTRODUCCION:
Un fármaco administrado por la vía oral después de desintegrarse y disolverse en los
fluidos gastrointestinales, se absorbe hacia al torrente circulatorio y de ahí se dirige a
ocupar la biofase para producir su efecto farmacológico y finalmente eliminarse. La
intensidad del efecto farmacológico o tóxico que produce se relaciona con frecuencia con
la concentración del fármaco en los receptores localizados generalmente en los tejidos
celulares. Debido a que la mayoría de los tejidos están muy perfundidos por los fluidos
biológicos, se puede determinar indirectamente la intensidad y la duración de la respuesta
farmacológica al conocer la variación de los niveles plasmáticos o urinarios del fármaco
con el tiempo.
La farmacocinética aplica modelos matemáticos para estudiar el curso temporal de las
concentraciones de un fármaco y/o sus metabolitos en los diferentes fluidos biológicos,
tejidos y excreciones del organismo. Su estudio permite determinar parámetros
farmacocinéticos de gran utilidad en terapéutica como por ejemplo el tiempo de vida media
(t 1/2), el cual indica el período que debe transcurrir para que una cantidad de concentración
de fármaco se reduzca a la mitad; este parámetro indica con qué velocidad se remueve un
fármaco en el organismo mediante mecanismos de biotransformación y excreción. El valor
del t1/2 es un parámetro primordial en el diseño de regímenes de dosificación en
terapéutica.
OBJETIVO:
Determinar el tiempo de semivida de los salicilatos por el método de excreción urinaria
después de la administración oral de 500 mg de AAS en tableta.
DINAMICA DE TRABAJO:
Este estudio se ha dividido en tres partes:
Primera parte:
Análisis e historia clínica.
Segunda parte:
Administración oral de una tableta de AAS.
Preparación de material y soluciones.
Tercera parte:
Análisis de muestras urinarias y de resultados.
Primera Parte
Análisis clínicos y certificado médico.
Participantes:
Un voluntario sano por cada equipo.
22
PROCEDIMIENTO:
1) Por cada equipo participará un voluntario sano, al cual se le administrará por vía oral
una tableta de 500 mg de AAS del lote previamente analizado.
2) El voluntario deberá mostrar un estado de salud normal y no deberá mostrar reacciones
alérgicas a los medicamentos. El estado de salud normal se verificará previamente con
análisis clínicos y certificado médico.
A) Cada equipo realizará, interpretará y reportará los siguientes análisis clínicos del
voluntario: general de orina, biometría hemática, química sanguínea y depuración de
creatinina. Esta fase del estudio se trabajará con el Laboratorio de Análisis Clínicos de la
Facultad.
B) Los resultados y la interpretación de los mismos deberán entregarse ANTES de
proceder a la toma de la tableta, dado que se requieren como base del certificado médico
del voluntario. Esto se realizará en el Centro de Salud Universitario.
RESULTADOS:
Los resultados de los análisis clínicos se entregarán en el Laboratorio de Bifarmacia en la
fecha establecida. Deberán firmarse por los integrantes del equipo que realizaron los
análisis en el laboratorio de Química Clínica y con el Vo. Bo. de uno de los profesores de
dicha materia.
Segunda parte.
Administración oral de una tableta de 500 mg de AAS.
Preparación de material y soluciones.
MATERIAL:
- Tabletas de 500 mg de AAS
- Tubos de ensaye de 10 ml
- Probeta de 250 ml
- Papel indicador de pH
PROCEDIMIENTO:
1) La práctica comenzará a las 7:45 a.m. y la toma de la tableta por parte del voluntario
será a las 8 a.m. El resto del equipo proveerá el material necesario para la recolección de
muestras urinarias y preparará la dieta que consumirá el participante.
2) El participante deberá atender las siguientes indicaciones y firmar su consentimiento.
23
Indicaciones para el estudio de Vida Media de los Salicilatos en orina.
1.- Mostrar un estado de salud normal mediante la realización de análisis clínicos y certificado
médico.
2.- Evitar tomar alcohol, té, café, bebidas de cola, medicamentos y de fumar 48 horas antes y
durante el estudio.
3.- Abstenerse de ingerir alimentos después de las 23:00 hrs. del día anterior al estudio y antes
de las 12:00 a.m. del día de la toma de la tableta.
4.- Tomar 100 mL de agua natural en los siguientes tiempos: - 2, -1 hrs. y 75 mL de agua a las
1, 2, 3 h. La hora cero (0) tomar la tableta de AAS de 500 mg con 100 mL de agua.
5.- Recolectar la totalidad de orina a los siguientes tiempos: 1, 2, 3, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 22, 24,
26, 28 y 30 horas.
6.- Medir el volumen total y el pH de la orina excretada en cada tiempo de muestreo. Anotar
los datos en la Tabla 4.1.
7.- Guardar aproximadamente 3 mL de cada muestra de orina en un tubo de ensaye y taparlo.
8.- Colocar en el refrigerador los tubos perfectamente etiquetados.
9.- Guardar reposo preferentemente durante el estudio sobretodo durante el período de toma
de muestras.
10.- Tomar un refrigerio ligero a las 12 a.m. del día del estudio: 2 sandwiches sin grasas,
irritantes ni picantes, fruta de la temporada, agua de frutas ad libitum y gelatina. Consumir
una comida ligera a las 16:00 p.m. El resto de las comidas se harán normalmente.
3) Cada equipo preparará el material y soluciones que se necesitan en la fase analítica de
las muestras urinarias recolectadas.
24
Laboratorio de Farmacología y Biofarmacia.
Facultad de Ciencias Químicas. UASLP
Carta de consentimiento informado
Yo,__________________________________________________________de
_______
años de edad, estudiante del 9 semestre de la carrera de QFB y alumno(a) del curso de
Biofarmacia, en pleno uso de mis facultades, declaro participar voluntariamente, en la
realización de la práctica de laboratorio titulada VIDA MEDIA DE LOS SALICILATOS.
Como alumno del curso mencionado, he estudiado los procesos de liberación, absorción,
distribución, metabolismo y eliminación de fármacos. Conozco los objetivos y
procedimientos de la práctica en la que participaré, así como la naturaleza farmacológica
del ácido acetilsalicílico, informando además que no soy alérgico(a) a este fármaco.
Previamente he realizado los principales estudios farmacopeicos de control de calidad de
tabletas de aspirina, de las cuales se me administrará en ayuno una tableta por vía oral y
recolectaré muestras de orina durante 30 horas para cuantificar los salicilatos excretados y
determinar su tiempo de vida media de eliminación.
Tengo conocimiento de que este estudio no representa un daño a mi salud y que puedo
retirar mi consentimiento de participar como voluntario en el momento que yo desee sin
que ello represente sanción alguna.
San Luis Potosí, S.L.P., a________de_________________de 20____.
Nombre y firma del voluntario __________________________________________
Nombre y firma de la Maestra __________________________________________
Nombre y firma del Testigo
__________________________________________
Nombre y firma del Testigo
__________________________________________
25
RESULTADOS:
Tabla 4.1
Hoja de datos de recolección de orina.
Equipo: _____________________
Fecha: ________________________
Nombre del voluntario: ___________________________________________________
Edad: _________________ Estatura: _______________
Hora
del día
Tiempo
(h)
Volumen de orina
(ml)
8:00
0
Toma de Tableta
9:00
1
10:00
2
11:00
3
12:00
4
14:00
6
16:00
8
18:00
10
20:00
12
22:00
14
6:00
22
8:00
24
10:00
26
12:00
28
14:00
30
Observaciones:
26
Peso:
_____________
pH
Tabla 4.2
Preparación de soluciones para el análisis de muestras por el método de Trinder.
Equipo: __________________
Fecha: _______________
Solución de Acido fosfórico
Solución de Trinder
Observaciones:
Tercera parte.
Análisis de muestras urinarias y de resultados.
MATERIAL:
- Solución Trinder
- Espectrofotómetro
- Centrífuga
- Vortex
- Micropipetas
- Pipeteador
-Tubos de ensaye de 10 ml
-Pipetas volumétricas de 1, 5 y
10 ml
-Gradillas
PROCEDIMIENTO:
1) Analizar las muestras por duplicado por el método de Trinder previamente validado
para determinar la concentración de fármaco en orina a los diferentes tiempos. Se requerirá
de aproximadamente 100 ml de orina libre de fármaco aproximadamente para la
elaboración de la curva de calibración.
2) Elaboración de la curva de calibración de estándares de salicilatos en orina. Emplear el
formato de tabla ya conocidas.
RESULTADOS:
27
Tabla 4.5
Absorbancias de las muestras de orina a los diferentes tiempos después de la
administración de una tableta de AAS.
Equipo: _____________________
Tiempo
(h)
Dilución
Fecha: __________________
A1
C1
A2
C2
Cprom ( DE)
Observaciones:
REPORTE:
1.- Incluir los análisis clínicos y el certificado de salud.
2.- Añadir la hoja de consentimiento firmada.
3.- Elaborar todos los cálculos en excel, tablas y gráficas para calcular
a) la cantidad total en mg de salicilatos excretados en la orina en el intervalo de
0 a 30 horas. Relacionar este dato con la dosis de aspirina administrada.
b) la semivida de los salicilatos por el método de velocidad de excreción
urinaria. Encerrar en círculos los puntos de la gráfica que se empleen para el cálculo de la
constante de eliminación y semivida biológica.
c) Comparar el t½ AS obtenido en este estudio con el de la bibliografía y
discutir los resultados.
4. Entregar archivos de Excel, Word y hoja impresa de resumen de resultados de acuerdo a
las instrucciones de las maestras.
28
Sesión No. 5
MODELO FARMACOCINÉTICO “IN VITRO”
PRÁCTICA
INTRODUCCIÓN:
La utilización de modelos en farmacocinética supone al organismo dividido en diferentes
regiones, unidas entre si, en las cuales el fármaco se distribuye después de su entrada al
torrente circulatorio. Los modelos farmacocinéticos describen el organismo de forma
simplificada, permitiendo cuantificar la velocidad de los procesos LADME mediante la
utilización de funciones matemáticas sencillas. En estos modelos el sistema biológico está
representado como una serie de zonas o compartimentos que se encuentran conectados
entre sí de forma reversible.
Un compartimento no es una región fisiológica o anatómica real, sino que representa un
tejido o conjunto e tejidos con flujo sanguíneo similar y con la misma afinidad por el
fármaco. Dentro de cada uno de los compartimentos se asume distribución uniforme e
instantánea.
Los modelos son sistemas abiertos, existiendo transferencia de fármaco entre dicho
compartimento y el exterior. El modelo más simple es el llamado modelo abierto de un
compartimiento. El término "abierto" se refiere al hecho de que existe un sentido
unidireccional de entrada y salida (absorción y eliminación). El modelo abierto de un
compartimiento supone al organismo como un todo homogéneo en el cual se distribuye el
fármaco en forma semejante y casi instantánea. Este tipo de compartimiento estaría
formado principalmente por el volumen sanguíneo y los tejidos altamente irrigados, tales
como el hígado, los pulmones, los riñones, etc. Este modelo supone también que las
velocidades de intercambio entre las diferentes partes del mismo compartimiento, por
ejemplo, desde la sangre hacia el hígado, así como el proceso inverso, serían idénticas.
Por otra parte, es posible visualizar también modelos de dos o más compartimientos,
representados por tejidos u órganos en los cuales el intercambio es más lento. Estos
constituyen los compartimientos periféricos, formados por el tejido adiposo, los
tegumentos, los huesos, etc., tejidos donde el intercambio de fármacos con la sangre no se
realiza a la misma velocidad que con los del mismo compartimiento. En otros casos, la
sangre engloba, ella misma, dos compartimientos diferentes: la fracción proteica,
susceptible de fijar rápidamente el medicamento, y el líquido plasmático. Se ha
comprobado que una inmensa mayoría de los fármacos se pueden ajustar adecuadamente a
modelos con uno o dos compartimentos. Incluso cuando se administran dosis múltiples y se
alcanza el equilibrio dinámico, salvo contadas excepciones se utiliza el tratamiento
monocompartimental.
29
OBJETIVO:
Utilizar un sistema hidráulico para demostrar la farmacocinética monocompartimental y sus
cálculos a través del empleo de un colorante.
MATERIAL:
- Bolsa de nutrición parenteral de 1000 mL
- Parrilla de agitación
- Soporte universal
- Matraz Kitasato de 500 mL
- Matraces volumétricos
- Vasos de precipitado
- Jeringa de 3 mL
- Barra de agitación magnética
- Probeta
- Micropipetas
- Cronómetro
- Jeringas de insulina
PROCEDIMIENTO:
Se empleará el azul de metileno para estudiar el modelo monocompartimental. Esta
simulación consiste en observar la disminución de la coloración a diferentes tiempos. El
sistema tiene un dispositivo que representa la vía de excreción urinaria, de la cual se
tomarán muestras a diferentes tiempos para los datos urinarios; para los datos plasmático se
tomarán muestras con pipeta serológica directamente del matraz.
En un soporte se coloca una bolsa de nutrición parenteral la cual contendrá agua en su
interior. La sonda se introduce en el matraz Kitasato (el cual simula el compartimento del
organismo) para alimentarlo con el agua de la bolsa de nutrición parenteral a una velocidad
de 20 mL/min. Este matraz se coloca sobre una parrilla con agitación constante en el nivel
3. El sistema hidráulico se mantendrá en equilibrio antes de proceder a la administración
del colorante, para tal efecto se deberá mantener en 900 o 1000 mL el nivel de agua en la
bolsa.
La administración del colorante se realizará por inyección rápida (directamente al contenido
acuoso del matraz). La dosis a administrar será de 2 mL medidos a partir de una solución de
1 mg/mL.
Se tomarán muestras sanguíneas y urinarias a los tiempos indicados en la tabla 5.1.
El volumen de muestra de sangre será de 2 mL en cada tiempo programado y en el caso de
la orina se medirá el volumen total excretado en un intervalo de 2 minutos de muestreo.
Solamente conservar 2 mL para su análisis.
Cada muestra de sangre y orina se analizará al espectrofotómetro a λ = 665 nm contra una
curva de calibración de azul de metileno.
30
La curva de calibración se preparará a partir de una solución cuya concentración será de 25
µg/mL. Esta dilución podrá obtenerse de la solución stock de 1000 µg/mL. Para cada
estándar de la curva se prepararán 5 mL.
RESULTADOS:
Tabla 5.1 Datos de muestras sanguíneas
T
(min)
Abs
Conc
µg/mL
0.5
2
5
10
15
25
30
45
60
Tabla 5.2 Datos de muestras urinarias
T
(min)
1-3
4-6
9 - 11
14 - 16
24 - 26
29 - 31
44 - 46
59 - 61
Abs
Conc
µg/mL
REPORTE :
1. Presentar en archivo excel la curva de calibración del colorante y sus datos de
linealidad.
2. Realizar los cálculos correspondientes a los parámetros farmacocinéticos obtenidos
de un MAUC con datos plasmáticos y urinarios. Graficar e interpretar cada uno de
ellos y discutir resultados.
31