Detección y liberación de proteínas alergénicas en

Localización de proteínas alergénicas en Plantago lanceolata L.
González-Parrado, Z.; Vega-Maray, A.M; Fuertes-Rodríguez, C.R.; ValenciaBarrera, R.M; Monsalve, R. and Fernández-González, D.
Plantago lanceolata es una especie ampliamente distribuida en la zona templada de
Europa, Australia y América del norte. Diversos autores han indicado que alrededor del
30% de los pacientes que acuden a las consultas de los alergólogos resultan ser alérgicos
al grano de polen del género Plantago. Además, la mayoría de estos individuos son
polisensibles, es decir, son también alérgicos a otros tipos polínicos, principalmente al
polen de gramíneas.
Para la realización de este estudio hemos utilizado anteras maduras e inmaduras de
Plantago lanceolata que fueron recogidas en los alrededores de la ciudad de León (N.O.
de España). La hidratación y activación de granos de polen maduros fue inducida “in
vitro” durante 5 y 10 minutos a temperatura ambiente, generando las condiciones de
humedad y temperatura similares a las de recepción por el estigma. Después de estos
tiempos, el proceso fue interrrumpido, y las muestras se cotaron, fijaron y postfijaron.
Posteriormente, se hizo una deshidratación usando distintas concentraciones de acetona
y las muestras se incluyeron en resina Spurr. Las secciones de los bloques que contienen
las muestras se obtuvieron con un ultramicrotomo y se montaron en rejillas de níquel.
Para la detección del alergeno mayor Pl l 1, dichas secciones fueron incubadas con el
anticuerpo anti-Pl l 1 y después marcadas con el anticuerpo secundario anti-IgG de
ratón desarrollado en cabra, conjugado con oro coloidal de 18 nm de diámetro y diluido
1/20 en PBS. Finalmente, las secciones fueron contrastadas con acetato de uranilo y
citrato de plomo. Por último se observaron al microscopio electrónico de transmisión
(JEOL 1010).
Se ha observado marcaje significativo en la célula vegetativa y en la célula generativa
tanto de los granos de polen activados como en los granos de polen que estaban en las
anteras. Esto puede ser debido a que ambas células pueden estar involucradas en el
proceso de interacción polen-estigma.
La inmunolocalización de proteínas alergénicas en los orgánulos celulares de los granos
de polen de Plantago lanceolata después de los 5 y 10 minutos de la activación, indica
la presencia de proteínas implicadas en el proceso de activación.