CONTROL DE LA PRODUCCIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS EN HONGOS COMO CONTAMINANTES DE GRANOS EN EL BIOCONTROL Resumen ejecutivo Así como hay especies de hongos de los géneros Aspergillus, Rhizoctonia, Pythium, Phytophtora, Fusarium, Magnaporthe y Penicillium, que generan grandes pérdidas a la agricultura nacional porque parasitan cultivos y contaminan los granos con micotoxinas altamente tóxicas (como las aflatoxinas y las fumonicinas en el caso del maíz, y las acratoxinas, en el del café), hay hongos benéficos que se usan como agentes biocontroladores de insectos y hongos nocivos; tal es el caso de Trichoderma, que produce distintos antibióticos importantes para atacar a los hongos fitopatógenos y ejercer así su acción biocontroladora. La destinataria de este estudio es la comunidad científica. En este proyecto los científicos caracterizaron el gen CfwA en Aspergillius nidulans, cuya mutación afecta la síntesis de pigmentos, micotoxinas y antibióticos, e identificaron genes (aclA) que regulan sólo uno de esos procesos. Generaron o identificaron cepas de A. nidulans que están afectadas en la producción de micotoxinas y metabolitos secundarios, y purificaron e identificaron varios metabolitos secundarios de A. nidulans. La investigación giró en torno a cuatro objetivos: a) definir los factores que determinan la especificidad de la enzima CfwA (llamada también NpgA), con base en la caracterización genética y bioquímica detallada de distintos alelos de cfwA, sus supresores y genes relacionados; b) caracterizar los metabolitos secundarios de A. nidulans derivados de los PKS, NRPS y FAS, usando como herramienta las mutantes cfwA condicional y otros mutantes regulatorios afectados en la producción de micotoxinas y/o antibióticos; c) caracterizar los patrones de expresión de genes involucrados en el metabolismo secundario, generando microarreglos genéticos y usando mutantes regulatorias afectadas en la represión catabólica por carbono, nitrógeno, cfwA y aclA; y d) establecer el papel de los metabolitos secundarios en el control biológico de Trichoderma virens, a través de la clonación del gen homólogo de cfwA, la generación in vitro de alelos termosensibles, truncados y con mutaciones supresoras intragénicas, la obtención de cepas de T. virens con estos alelos y la evaluación de su potencial como agente de biocontrol. Demanda o problemática que atiende Control de la producción de los metabolitos secundarios, tanto dañinos como útiles. Para tal fin se conjuntaron las experiencias de varios grupos de investigadores con el fin de estudiar la regulación global de la producción de metabolitos secundarios derivados de policétidos (PKS), aminoácidos (NRPS) y ácidos grasos (FAS) en A. nidulans, así como el papel de dichos metabolitos en el control biológico por Trichoderma virens. Resultados obtenidos y/o descripción. Características de la tecnología generada El estudio del metabolismo secundario del genoma Aspergillus nidulans es indispensable para comprender y actuar sobre el crecimiento y la diferenciación celular de este hongo, que además está relacionada con funciones tan importantes como la reproducción asexual. Los resultados permitirán entender gran parte del metabolismo secundario de A. nidulans y otros hongos. Este conocimiento será importante para desarrollar estrategias que permitan manipular el metabolismo secundario en A. Nidulans, el agente de biocontrol T. virens y otros hongos. De manera puntual, este conocimiento permitirá: a) evaluar el potencial de CfwA como blanco para la inhibición generalizada del metabolismo secundario en los hongos; b) elucidar la estructura química de diversos metabolitos secundarios y sus posibles vías de síntesis; c) determinar los patrones de expresión de múltiples genes del metabolismo secundario y las posibles conexiones entre ellos y varios reguladores transcripcionales globales, y d) establecer el papel y posiblemente manipular el metabolismo secundario de T. virens con fines de control biológico. Impactos A futuro se puede utilizar el conocimiento derivado de este proyecto para patentar ideas sobre procesos que permitan hacer escrutinios masivos de bibliotecas químicas. Los resultados del estudio apoyan la idea de que la PPTasas tipo CfwA son un buen blanco para diseñar agentes antimicóticos y que su eliminación es una herramienta muy poderosa para evaluar el papel del metabolismo secundario en distintos hongos, aun sin conocer la identidad de los metabolitos involucrados. Es razonable esperar que las mutantes y los enfoques que derivan de este proyecto serán herramientas poderosas para explorar el vasto mundo del metabolismo secundario, así como diversos hongos de importancia agrícola y comercial. Costos estimados de la aplicación de los resultados y/o tecnología generada Los costos de producción que puedan resultar de emplear estos avances no pueden ser cuantificados, en tanto que son parte de un proceso científico. Ámbito de aplicación El ámbito de aplicación de esta investigación es la comunidad científica nacional e internacional. Información adicional o comentario Los investigadores señalan que resultados encontrados cuestionan la interpretación original de la mutación npgA1 (alélica de cfwA2) y sugieren que la región caboxilo terminal de CfwA es esencial para su actividad. Se planea generar una mutante con el gen cfwA deletado, introducir en su cepa los alelos cfwA truncados y demostrar si son capaces o no de resistir parte de la función CfwA. Clave del proyecto: SAGARPA 2002-C01-1713 Sistema Producto y/o línea estratégica de atención: biocontrol en granos Investigador: doctor JESÚS AGUIRRE LINARES Institución: Instituto de Fisiología Celular de la UNAM, teléfono (5255) 5622 5651, fax: (5255) 5622 5630, correo electrónico: [email protected]