Práctica 1 GLUCOSA POSPRANDIAL OBJETIVO Conocer el fundamento y llevar a cabo la medición de la glucosa posprandial. INTRODUCCIÓN Los hidratos de carbono son ingeridos en la dieta diaria en forma de polisacáridos (almidón), disacáridos (sacarosa y lactosa) y una pequeña porción de monosacáridos (glucosa y otros). En el intestino por acción de diversas enzimas se convierten en monosacáridos, que son absorbidos hacia el torrente circulatorio. El metabolismo de los hidratos de carbono incluye procesos de glucogénesis, glucólisis, glucogenolisis y neoglucogénesis. Los niveles de glucosa en la sangre se mantienen entre unos límites muy estrechos y constantes, y se encuentran regulados fundamentalmente por dos hormonas: insulina y glucagón. La diabetes mellitus es una enfermedad metabólica caracterizada por un incremento en los niveles de glucosa en sangre, y que cursa de manera característica con poliuria, polifagia, polidipsia. La existencia de diabetes mellitus en una persona durante años lleva a complicaciones relacionadas con la vista, la circulación periférica, y el sistema renal. La prueba de glucosa posprandial es una prueba simple de detección que demuestra la habilidad del cuerpo para ajustar y disponer de una carga de glucosa. Por lo general, se extrae una primera muestra de sangre en ayunas, luego, se administra a la persona 75 g de glucosa, por dieta y exactamente dos horas después se toma una segunda muestra. En un individuo sano, los niveles de glucosa retornan a la normalidad, indicando una homeostasis; en cambio, si la concentración sanguínea no ha regresado al límite superior normal en la muestra tomada dos horas después de la carga de glucosa, el mecanismo se considera anormal y pueden requerirse más pruebas para identificar la naturaleza precisa del problema. Fundamento de la prueba La glucosa se determina después de una oxidación enzimática en presencia de glucosa oxidasa. El peróxido de hidrógeno formado reacciona, catalizado por la peroxidasa, con fenol y 4-aminofenazona para formar un indicador de quinoneimina rojo-violeta. GOD Glucosa + O2 + H2O ⎯⎯⎯⎯⎯⎯→ Ácido glucónico + H2O2 PAP 2 H2O2 + 4-aminofenazona + fenol ⎯⎯⎯⎯⎯⎯→ Quinoneimina + 4 H2O DESARROLLO EXPERIMENTAL Material y equipo • • • • • • • • • • 2 tubos al vacío para toma de muestras en sistema cerrado, con activador de coagulación, tamaño 13 X 100 mm, volumen para 6 mL de muestra, tapón hemogard rojo convencional 2 agujas para toma de muestras múltiple en sistema cerrado con dispositivo de seguridad calibre 21 X 31 mm, color verde convencional 1 soporte para aguja de toma de muestras en sistema cerrado Alcohol al 70º Torundas de algodón Tubos de ensaye de 13 X 75 mm 1 pipeta de 10 µL 1 pipeta de 1000 µL Centrifuga Espectrofotómetro Muestra Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma. La glucosa permanecen estable durante 24 horas entre 2 y 8 ºC si el suero o plasma se separa en los 30 min que siguen a su colecta. Reactivos 1. Reactivo de GOD-PAP (MARCA: Tampón fosfatos Fenol 4-aminofenazona Glucosa oxidasa Peroxidasa 2. Patrón de Glucosa mg/dL) ) 50.0 mmol/L, pH 7.0 11.0 mmol/L 0.77 mmol/L ≥ 1.5 k U/L ≥ 1.5 k U/L 5.55 mmol/L (100 Procedimiento 1.- Obtener una muestra de sangre sin anticoagulante de un paciente en ayunas y otra después de dos horas de haber ingerido una carga de glucosa de 75 g vía oral. 2.- Dejar que coagule la sangre, entre 10 – 20 min. 3.- Centrifugar el tubo con la sangre a 3000 r.p.m. durante 15 min. 4.- Separar el suero, pasándolo en un tubo de ensayo (10 x 75) previamente rotulado con el número correspondiente a la muestra. 5.- Realizar la determinación de glucosa en suero de cada muestra de acuerdo al ensayo de glucosa GOD-PAP sin desproteinizar. Pipetear en tubos de ensayo Patrón o muestra Reactivo Blanco Patrón o muestra 10 µL ---- Reactivo 1000 µL 1000 µL Mezclar, incubar durante 10 min. entre 15 – 25 ºC ó 5 min. a 37 ºC y medir la absorbancia del patrón (A patrón) y de la muestra (A muestra) frente al reactivo blanco, a 500 nm, antes de 60 min, con una cubeta de 1 cm de espesor. Interpretación (De acuerdo a la ADA, 2019) Cálculos A muestra Concentración de glucosa (mg/dL) = ⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯⎯ A patrón X Concentración del patrón Valores de referencia Linealidad El método es lineal hasta una concentración de glucosa de 400 mg/dL. Para muestras con valores superiores a dichas concentraciones diluir 1+2 con agua destilada y multiplicar el resultado por 3. RESULTADOS OBSERVACIONES DISCUSIÒN DE RESULTADOS Práctica 2 PRUEBA DE TOLERANCIA ORAL A LA GLUCOSA (TTGO) OBJETIVO Conocer el fundamento y llevar a cabo la prueba de Tolerancia Oral a la Glucosa (TGO). INTRODUCCIÓN Si existe patología en el metabolismo de los hidratos de carbono, el organismo es incapaz de metabolizar una sobrecarga de glucosa en un tiempo determinado persistiendo la hiperglucemia al cabo de ese tiempo. Fundamento de la prueba Se debe emplear cuando se sospeche la existencia de diabetes mellitus, especialmente en aquellas condiciones en las que exista una alteración de la glucemia en ayunas (valores entre 100 -125 mg/dL). Es útil para evaluar, tras el parto, a las mujeres que hayan desarrollado una diabetes gestacional. En situaciones en las que la glucemia basal es normal, pero concurren factores de riesgo para desarrollar una diabetes mellitus: antecedentes familiares de diabetes, obesidad, dislipidemia importantes, presencia de manifestaciones tardías de diabetes (retinopatía, nefropatía, neuropatía), presencia de lesiones arterioscleróticas precoces, abortos de repetición sin causa aparente, partos prematuros, alta mortalidad perinatal, toxemia o fetos con sobrepeso, etc. DESARROLLO EXPERIMENTAL Material y equipo • • • • • • • • • • 3 tubo al vacío para toma de muestras en sistema cerrado, con activador de coagulación, tamaño 13 X 100 mm, volumen para 6 mL de muestra, tapón hemogard rojo convencional 3 agujas para toma de muestras múltiple en sistema cerrado con dispositivo de seguridad calibre 21 X 31 mm, color verde convencional 1 soporte para aguja de toma de muestras en sistema cerrado Alcohol al 70º Torundas de algodón Tubos de ensaye de 13 X 75 mm 1 pipeta de 10 µL 1 pipeta de 1000 µL Centrifuga Espectrofotómetro Muestra Suero, plasma heparinizado o EDTA plasma. La glucosa es estable durante 24 horas entre 2 y 8 ºC si el suero o plasma se separa en los 30 min que siguen a su colecta. Reactivos 1. Glucosa 75 g 2. 1. Reactivo de GOD-PAP: (MARCA: Tampón fosfatos Fenol 4-aminofenazona Glucosa oxidasa Peroxidasa 3. Patrón de Glucosa mg/dL) ) 50.0 mmol/L, pH 7.0 11.0 mmol/L 0.77 mmol/L ≥ 1.5 k U/L ≥ 1.5 k U/L 5.55 mmol/L (100 Procedimiento 1.- Se administran 75 g de glucosa oral. Deben disolverse en 400 mL de agua e ingerirse en menos de 5 minutos. Se realizan tres tomas de muestra, la primera en ayuno, la segunda a la hora después de haber administrado la carga de glucosa y la tercera a las dos horas posterior a la administración de la carga de glucosa. En el embarazo alternativamente se administran 100 g de glucosa y en este caso se toman cuatro muestras, ayuno, a la hora, a las dos horas y a las tres horas después de la administración de la glucosa. En los niños la dosis es de 1.75 g/Kg. de peso 2.- La obtención del suero se tiene como se indica en glucosa posprandial 3.- La determinación de glucosa en suero se realiza igual que la descrita en glucosa posprandial. Interpretación (De acuerdo a la ADA 2019) RESULTADOS OBSERVACIONES DISCUSIÒN DE RESULTADOS
