UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE MÉXICO FACULTAD DE ESTUDIOS SUPERIORES ZARAGOZA INFORME CARRERA DE BIOLOGÍA Laboratorio de Investigación Formativa III Sección: Biología Molecular de la Célula Práctica 3 Cuantificación de azúcares totales por el método de DuBois FOLIO CÓNDOR ZARAGOZA:20240206 Grupo: 2302 Equipo: 5 Integrantes: B ● eltrán Juárez Brenda Odeth ● Resendiz Fonseca Daniela ● Torres Flores Aurora Introducción. os carbohidratos son sustancias químicas orgánicas de amplia distribución en la L naturaleza. En las plantas son producidosporelprocesodelafotosíntesiseincluyenala celulosa como ejemplo de un carbohidrato estructural y al almidón como carbohidrato de almacén.Enlascélulasanimalesloscarbohidratos-enformadeglucosaoensupolímero dealmacén,elglucógeno–sirvencomofuenteimportantedeenergíaparalasactividades vitalesdelamayoríadelasespeciesvivientesquehabitanelplaneta(Bermudez,Valmore. 2007). La glucosa es el principal monosacárido en la naturaleza que proporciona energía a las células de una amplia gama de organismos, que va desde los más simples como la levadurahastalosmáscomplejoscomoelserhumano.Estohacequeeltransportedeeste azúcaralinteriorcelularconstituyaunprocesoesencialparaelmetabolismoenergéticoyen consecuencia,paralosprocesosquemantienenlavida.Eltransportedelaglucosaatravés de la membrana celular se lleva a cabo por dos familias de proteínas de membrana: los transportadores de glucosa acoplados a sodio (SGL T) y las proteínas facilitadoras del transporte de glucosa (GLUT), (Catrejon V. 2007). Existe una variedad de métodos colorimétricos los cualesutilizanreactivosdistintoscomo antrona, fenol, orcinol o resorcinol. El método colorimétrico para la determinación de la concentración de carbohidratos más ampliamente utilizado es el desarrollado por DuBois debido a la facilidad del procedimiento, sensibilidad, rapidez de los resultados y por ser apropiado para cuantificar diferentes azúcares como monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos carbohidratos (Lopez, X. 2017). ElmétododeDuBoisetal.demostrósersimple,estableyreproducible,lograndoacortarel tiempo necesario para la determinación de carbohidratos comparado con otros métodos colorimétricos. Por ejemplo, la cuantificación con antrona es limitada puesto que este reactivo es inestable; debido a su degradación y el consecuente oscurecimiento de la soluciónquealterasulecturacolorimétrica,ademásdeposeerunamenorcapacidadenel análisisdepolisacáridosconformadospormezclasdeazúcares.Porotraparte,elmétodo establecido por Monsigny, utilizando resorcinol yácidosulfúrico,proponeprocedimientosmáscomplejosydelargaduración,presentando sensibilidades menores en la lectura de las absorbancias de soluciones acuosas de carbohidratos (Lopez, X. 2017). Objetivo. eterminar la concentración de azúcares presentes en diferentes muestras de glucosa, D mediante el método DuBois. Método. Sepreparóunasoluciónblancocon200μldeaguadestilada,yseleagregaron500μlde ● fenol, se agitó y posteriormente se agregó 1 ml de ácido sulfúrico concentrado. ● Se preparó una muestra patrónde8tubosdeensayecon 6mgdeglucosay15mlde agua destilada. ●Seprepararon2muestrasproblema:Alaprimeraseleagregaron90μldeglucosa,110μl deaguadestilada,500μldefenoly1mldeácidosulfúrico,alasegundamuestraproblema se le agrego 110 μl de glucosa, 90 μl de agua destilada y 500 μl de fenol. ● Posteriormente se agitaron y se le agregó 1 ml de ácido sulfúrico, se volvió a agitar suavemente y se dejó reposar 30 minutos. ● Se llevaron las muestras problema pasado los 30 minutos al espectrofotómetro para analizar su lectura a 490 nm. Resultados Se preparó la solución patrón en diferentes concentraciones yabsorbanciaconocidapara r ealizar la curva patrón Seagregó1mldeácidosulfúricoconcentradoaunadelasmuestrasproblemaencampana e extracción deslizando el ácido por las paredes del tubo d Se obtuvo la concentración y absorbancia para realizar la curva patrón. con los datos : lucosa 6 μl / 15 mL de H2SO4 siendo esta la gráfica g TUBO CONCENTRACIÓN OBSERVANCIA 1 0.008 0.073 2 0.016 0.148 3 0.024 0.179 4 0.032 0.189 5 0.040 0.199 6 0.048 0.349 7 0.056 0.753 8 0.064 0.790 Tabla1 Tubos de Curva Patrón Gráfica 1. Curva Patrón espués se realizó una cuantificación de resultados con los demás equipos con sus D respectivos resultados siendo estos inconclusos en algunos equipos Análisis de resultados. nlacuantificacióndelaunióndelaglucosaconelfenolconnuestrasmuestrasproblema E por medio del espectrofotómetro obtuvimos como resultado de la muestra 1 un total de 0.572 y de la muestra 2 un total de 0.171 Conclusiones. a cuantificación de azúcares totales se determinó por el método de Dubois utilizando L glucosacomoestándarendóndepodemosobservarlosresultadosenlatabla1observando así que la absorbancia aumenta en respuesta a la concentración de las muestras problema. Bibliografía ● BERMUDEZ, Valmore et al. Biología molecular de los transportadores de glucosa: clasificación, estructura y distribución. AVFT [online]. 2007, vol.26, n.2, pp.76-86. ISSN 0798-0264. Castrejón V, Carbó R, Martínez M. Mecanismos moleculares que intervienen en el ● transporte de la glucosa . Rev Educ Bioquímica. 2007;26(2):49-57. ● López-Legarda, Xiomara, Taramuel-Gallardo, Andony, Arboleda-Echavarría, Carolina, Segura-Sánchez, Freimar, & Restrepo-Betancur, Luis Fernando. (2017). Comparación de métodos que utilizan ácido sulfúrico para la determinación de azúcares totales. Revista Cubana de Química, 29(2), 180-198. Recuperado en 29 de agosto de 2023, de http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2224-54212017000200 002&lng=es&tlng=es.
