Universidad Autónoma de Durango Campus Alamedas 18-5-2023 Práctica de laboratorio Tinción de Gram Integrantes: Sandra Daniela Ramírez Pérez Estrella Mariel Fraire Cervantes Mario Cisneros Ibarra Chiristian Balan Alvarado Mesa Zulet Danae Ortiz Aguilar Materia: Ecología y Microbiología Introducción Las tinciones diferenciales son de las más utilizadas en el área de Microbiología por las amplias aplicaciones que posee para la salud. Este tipo de tinción es cuando se visualiza más de un color porque se utiliza más de un colorante y sirven para poner de manifiesto las características de afinidad por ciertos colorantes de microorganismos. Se basan en el hecho de que distintos tipos de células tienen distinta composición química, y por lo tanto reaccionan de forma diferente frente a una tinción, lo que permite clasificar los microorganismos en diferentes grupos, según su capacidad de tinción Por medio de la tinción a estudiar en esta práctica, nos va a permitir observar que los microorganismos se dividen en dos grandes grupos, Gram positivos y Gram negativos. Podremos observar estas diferencias según retenga o no el cristal violeta utilizado en la tinción. Las diferencias en la composición de las paredes de las células Gram positivas, que contienen una capa gruesa de peptidoglucano con numerosos enlaces cruzados de ácido teicoico, y las paredes de las células Gram negativas, en las que la capa de peptidoglucano es más delgada, explican las diferencias de tinción de Gram entre estos dos grupos principales de bacterias. Fundamento y materiales de la tinción de Gram Materiales: Asa bacteriológica Portaobjetos Mechero Bunsen con manguera Piseta Goteros para cada reactivo Encendedor Gradilla Microscopio Cronómetro digital Solución de cristal violeta Solución de yodo Solución de alcohol acetona Safranina Aceite de inmersión Agua Los principios de la tinción de Gram están basados en la composición y estructura de la pared celular de las bacterias, la cual le confiere propiedades determinantes a cada microorganismo. Esta técnica de tinción se basa en: 1. Colocar como colorante primario cristal violeta, el cual se une a la pared celular bacteriana ya que tiene afinidad con el peptidoglicano de ésta. 2. Posteriormente, se coloca lugol, el cual funciona como mordente, para la unión o fijación del colorante e impide la salida del cristal violeta de algunas especies de bacterias, incluso luego del tratamiento con un decolorante, debido a la formación de un complejo cristal violeta-lugol que satura los espacios del peptidoglicano de la pared bacteriana. 3. Posteriormente, se coloca una mezcla de alcohol acetona, la cual deshidrata la pared bacteriana y cierra los poros de ésta, así como también destruye la membrana externa de las bacterias Gram negativas debido a que ésta es soluble a la acción de disolventes orgánicos, como la mezcla de alcohol acetona. Las bacterias Gram positivas, al contener una gran cantidad de peptidoglicano, retienen con mayor fuerza este complejo, mientras que las Gram negativas no lo pueden retener por tener menos cantidad de peptidoglicano en su pared. 4. Por último, se coloca safranina, la cual funciona como colorante secundario o de contratinción y sirve para teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-lugol. Evidencias: En esta sección añadirán, fotografías del procedimiento, así como fotografías de los resultados. Conclusiones: El tamaño de las bacterias dificulta su visión del microscopio, por eso la tinción de estas en la microbiología es un apartado sumamente trascendente. La técnica de tinción tiene como propósito crear un contraste entre la célula y el medio que la rodea, y una de las más importantes, tanto por su aplicación clínica para hacer una identificación preliminar de la bacteria causal de la infección y por su practicidad, es la tinción de Gram. La tinción de Gram es el estudio que nos permite tener un preámbulo para poder diferenciar frente al microscopio los diferentes tipos de microorganismos. Sin embargo, no hay que pasar por alto que es de suma importancia tener un completo estudio previo de los organismos y su rección a la tinción para poder dar una respuesta certera ante el cuestionamiento de la naturaleza de un microorganismo.
