TÉCNICAS DE LABORATORIO Inmunología Se basan en disponer de un antígeno o anticuerpo puro cuya cantidad pueda medirse mediante una molécula indicadora Radioinmunoanálisis (RIA): Se marca en antígeno o el anticuerpo con un radio isotopo, y se cuantifican con instrumentos que detectan fenómenos de desintegración radioactiva. Enzimoinmunoensayo de adsorción (ELISA): El antígeno o el anticuerpo se una de forma cova­lente a una enzima y se cuantifique determinando con un espectrofotómetro la intensidad con que la enzima convierte un sustrato transparente en un producto coloreado El análisis en sándwich usa 2 anticuerpos diferentes reactivos con diferentes epítopos del antígeno cuya concentración se necesita determinar Identificación y purificación de proteínas Inmunoprecipitación: se usa un anticuerpo específico frente a un antígeno proteínico en una mezcla de proteínas para identificar este antígeno específico Cromatografía: Se apoya en anticuerpos unidos a un soporte insoluble con el fin de purificar antígenos de una solución Western blot/Inmunoblot Se utiliza para identificar y determinar la cantidad relativa y el peso molecular de una pro­teína La técnica de transferencia proteínica desde un gel a una membrana es Western blotting Southern, transferencia ADN desde un gel de separación hasta una membrana por transferencia capilar Northern, transferencia del ARN desde un gel hasta una membrana Western, trasnferencia de proteínas Marcado y detección de antígenos en células y tejidos El anticuerpo puede marcarse con radioisótopos, ligarse a una enzima y marcarse con fluorescencia Citometría de flujo y clasificación celular activada por fluorescencia Para determinar la etapa de maduración o el estado de activacion de las celulas, se analizan las moléculas que estas tienen en su interior o superficie. Se hace tiñendo las células con unas sondas marcadas con fluorescencia específicas frente a esas moléculas y midiendo después la cantidad de fluorescencia emitida por las células. Este método es realizado con un citometro de flujo, que analiza y separa poblaciones celulares mediante sondas Medida de las interacciones entre el antígeno y el anticuerpo La afinidad de un anticuerpo por su antígeno puede medirse directamente en caso de los antígenos pequeños por un método denominado diálisis de equilibrio GONZÁLEZ BAUTISTA JIMENA ALEJANDRA 6°B BIBLIOGRAFÍA: ABBAS AK, LICHTMAN AH, PILLAI S. INMUNOLOGIA CELULAR Y MOLECULAR. 10A ED. ELSEVIER; 2022.
