MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO

MANEJO Y USO DEL MICROSCOPIO ÓPTICO COMPUESTO
NOMBRE DEL ALUMNO (A)
OBJETIVO
El alumno reconocerá el microscopio compuesto, identificará cada una de sus partes y lo manejará
correctamente observando la Presencia de microorganismos en muestras biológicas
MATERIAL.
Microscopio compuesto
Porta y cubre objetos
Sol. de yodo-lugol
Sarro dental
Palillo, Hisopo
INTRODUCCIÓN.
El microscopio es el instrumento más frecuentemente utilizado y el más útil en un laboratorio de
microbiología, proporciona la amplificación o agrandamiento que nos permite ver organismos y
estructuras invisibles a simple vista. Los microscopios permiten una amplia gama de
amplificaciones, desde cien veces a cientos miles de veces.
Las dos categorías de microscopios disponibles son los microscopios ópticos y los microscopios
electrónicos. Los microscopios ópticos utilizan un sistema de lentes ópticas y comprenden los
microscopios de campo claro, campo oscuro, fluorescencia y contraste de fases. Los microscopios
electrónicos emplean haces de electrones en lugar de ondas de luz para producir una imagen
ampliada.
Manejo y uso del microscopio óptico
1. Colocar el objetivo de menor aumento en posición de empleo y bajar la platina completamente.
Si el microscopio se recogió correctamente en el uso anterior, ya debería estar en esas
condiciones.
2. Colocar la preparación sobre la platina sujetándola con las pinzas metálicas.
3. Comenzar la observación con el objetivo de 4x (ya está en posición) o colocar el de 10 aumentos
(10x) si la preparación es de bacterias.
4. Para realizar el enfoque:
a. Acercar al máximo la lente del objetivo a la preparación, empleando el tornillo macrométrico.
Esto debe hacerse mirando directamente y no a través del ocular, ya que se corre el riesgo de
incrustar el objetivo en la preparación pudiéndose dañar alguno de ellos o ambos.
b. Mirando, ahora sí, a través de los oculares, ir separando lentamente el objetivo de la
preparación con el macrométrico y, cuando se observe algo nítida la muestra, girar el
micrométrico hasta obtener un enfoque fino.
5.- Pasar al siguiente objetivo. La imagen debería estar ya casi enfocada y suele ser suficiente con
mover un poco el micrométrico para lograr el enfoque fino. Si al cambiar de objetivo se perdió por
completo la imagen, es preferible volver a enfocar con el objetivo anterior y repetir la operación
desde el paso 3. El objetivo de 40x enfoca a muy poca distancia de la preparación y por ello es fácil
que ocurran dos tipos de percances: incrustarlo en la preparación si se descuidan las precauciones
anteriores y mancharlo con aceite de inmersión si se observa una preparación que ya se enfocó
con el objetivo de inmersión.
PROCEDIMIENTO
TECNICAS DE MONTAJE HÚMEDO
La gota pendiente o las preparaciones húmedas permiten examinar organismos vivos suspendidos
en un fluido. Las preparaciones húmedas se hacen colocando una gota del fluido que contiene el
organismo sobre una lámina de vidrio y cubriéndola con una fina pieza de vidrio (cubreobjetos):
para reducir la tasa de evaporación y eliminar corrientes de aire, generalmente se rodea la gota
con vaselina.
Cuando se examinan las preparaciones húmedas por microscopía de campo claro, es importante
ajustar la fuente de luz de forma adecuada. Es posible disminuir la intensidad de la luz mediante la
utilización de filtros especiales.
MONTAJE EN SOLUCION SALINA FISIOLÓGICA (NaCl 0.85%) O AGUA
Utilizada para estudiar la movilidad de las bacterias
A)
1.- En el centro de un portaobjetos coloca una gota de solución salina
2.- Con un hisopo toma muestra de sarro dental de un compañero que no se haya lavado los
dientes y colócala en la solución salina mezclando cuidadosamente
3.- Examinar con objetivos de 40X y 60 X.
B)
1.- Centrífuga aproximadamente 10 ml de orina a 2,500 rpm durante 5 minutos.
2.- Desecha el líquido sobrenadante y procede a mezclar el sedimento urinario
3.- Coloca una gota del sedimento mezclado en el centro de un portaobjetos limpio y seco
4.- Sobre el sedimento pon un cubreobjetos y observa con el objetivo de 40X y 60X
MONTAJE EN SOLUCIÓN YODO LUGOL
Utilizada para identificar en Protozoos con sus organelos citoplasmáticos
1.- En un portaobjetos limpio y seco, coloca una gota de solución de yodo lugol.
2.- Con un palillo de madera toma una pequeña cantidad de muestra y deposítala en el
portaobjetos mediante movimientos de rotación y extendiendo la muestra por toda la gota
3.-Coloca un cubreobjeto sobre la preparación y observa en el microscopio
CUESTIONARIO:
1.- ¿Que es poder de resolución?_________________________________________________
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2.¿Qué
finalidad
te
proporciona
el
utilizar
microscopio
compuesto:
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3.- ¿Cuál es la importancia que tiene el diafragma en el microscopio?______________________
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4.- ¿Qué tipo de bacterias pudiste observar en las muestras que se estudiaron
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5.- ¿Qué importancia tiene el estudiar y observar los microorganismos en muestras biológicas?
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6.- Dibuje y escribe el nombre de cada una de las partes del microscopio compuesto__________
OBSERVACIONES
Dibuja lo observado en los diferentes objetivos para cada muestra que
preparaste durante el experimento.
CONCLUSIONES
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MONTAJE DE PREPARACIONES FRESCAS Y TEMPORALES
NOMBRE DEL ALUMNO (A):
ANTECEDENTES
Para poder observar al microscopio células, tejidos animales o vegetales y microorganismos es
necesario hacer preparaciones sobre portaobjetos.
Hacer una preparación consiste por lo tanto en colocar y extender el tejido o la muestra sobre un
portaobjetos, cubriéndolo después con un cubreobjetos.
Las preparaciones pueden ser temporales, frescas y permanentes. Las primeras son aquellas que
solo se van a utilizar durante la práctica, unos días; las frescas se usan solo durante la práctica y
posteriormente se lavan. Y las permanentes son aquellas preparaciones que duran “para siempre”,
por lo que deben hacerse con un material especial (bálsamo de Canadá) para que el cubre-objetos
permanezca perfectamente adherido al porta-objetos, durante años.
OBJETIVOS:
• Aprender a montar preparaciones frescas y temporales.
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Portaobjetos y Cubreobjetos
Aguja de disección
Solución fisiológica
Bálsamo de Canadá
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Microscopio compuesto
MATERIAL
• Agua de charco
• Moho de pan, de tortilla o de cualquier fruta
• Tejidos meristemáticos
• Barniz de uñas
• Navaja de bisturí
PROCEDIMIENTO:
• Para hacer preparaciones frescas, simplemente coloca un corte muy delgado de tejido
meristemáticos, una gota de agua de charco o una muestra pequeña de moho (extendida con la
aguja de disección) sobre el portaobjetos.
• Si el material utilizado es moho o tejidos meristemáticos, coloca sobre tu muestra una gota de
agua o solución fisiológica.
• Cubre tu muestra con el cubreobjetos dejándolo caer suavemente para que no haga burbujas.
Observa la figura:
A) Células vegetales (Epidermis de cebolla)
1. Se corta la cebolla por la mitad y se separa una de las capas de la misma.
2. Marca con el bisturí o con las tijeras una cuadrícula de pequeño tamaño (0.5 cm de lado) en la
parte interna o cóncava de la capa.
3. Separa el fragmento de epidermis con las pinzas y colócalo en el centro del portaobjetos.
4. Coloca el portaobjeto en la placa de Petri, añade unas gotas de colorante sobre la muestra y
déjalo actuar durante cinco minutos.
5. Lava con cuidado el exceso de colorante y sécalo con un poco de papel de filtro.
6. Añade una gota de agua a la muestra.
7. Coloca el cubre apoyándolo por un lado y dejándolo caer para que no queden burbujas.
8. Observa la preparación al microscopio, utilizando varios objetivos, realiza un dibujo detallado de
las células e indica el aumento del mismo.
B) Células animales (Epitelio de la mucosa bucal)
1. Raspa suavemente el interior del carrillo con las pinzas o con un palillo (siempre por la parte
roma, procurando no cortarse). Coloca la mucosa blanca que se obtiene en el portaobjetos.
2. Realiza una extensión (frotis) deslizando el borde de un porta sobre el que tiene la muestra.
3. Calienta suavemente con el mechero (¡que no llegue a quemar!) la parte inferior del porta que
contiene la mucosa.
4. El resto del procedimiento es idéntico al de la epidermis de cebolla.
• Esta preparación está lista para que hagas observaciones microscópicas. Su duración es de
aproximadamente una hora ya que al evaporarse el agua con el calor de la lámpara del
microscopio, las células o los organismos morirán.
• Para hacer preparaciones temporales, coloca un corte o una muestra sobre el portaobjetos y
añade agua o colorante según se te indique.
Cubre tu muestra con el cubreobjetos dejándolo caer suavemente para que no haga burbujas; con
un pincel de barniz de uñas cubre los cuatro lados del cubreobjetos, déjalo secar y tendrás una
preparación temporal.
• Esta preparación está lista para que hagas observaciones microscópicas. Su duración es de
aproximadamente de un mes o mas dependiendo de la muestra.
Esquematiza el procedimiento que seguiste para obtener tus preparaciones.
RESULTADOS:
Esquematiza aquí tus resultados.
CUESTIONARIO:
1.- El hacer estudios biológicos con preparaciones frescas es muy importante, ¿explica por
que?______________________________________________________________________
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2.- Investiga por qué debe ponerse una gota de agua o de solución fisiológica a la
muestra.___________________________________________________________________
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3.¿Cuál
es
el
medio
de
montaje
en
una
preparación
fresca?__________________________________________________________________________
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CONCLUSIONES: