Desinfección de Semillas de Orquídeas y Cultivo In Vitro

Orchidaceae
Epidendrum
radicans
Protocolo de
Desinfección
Medio
Resultados
Fuentes
 Se lava la cápsula cepillándola con jabón y
enjuagándola al chorro de agua corriente,
posteriormente se colocó dentro de un vaso
de precipitados con una solución de
hipoclorito de sodio al 0.5% de cloro
disponible y adicionado con una gota de jabón
líquido, colocándolo dentro la campana de
flujo laminar. Se mantuvo en agitación
constante
durante
10
minutos,
posteriormente se decantó la solución de
cloro y se realizaron tres enjuagues con agua
destilada estéril para eliminar los restos de la
solución; a continuación se sumergió en
etanol al 70% y con ayuda de una pinza se
retiró y se incendió hasta que se consumió el
alcohol, posteriormente, se colocó sobre una
caja Petri estéril para realizar un corte
longitudinal con ayuda de un bisturí
previamente esterilizado, quedando dos
secciones de la cápsula con las semillas
expuestas.
 Medio Ms (en el experimento se usan
otros medios).
Se adiciono Carbonactivado y Peptona
como sustituyentes orgánicos.
Ca y P fueron adicionados con 2 gL-1.
Todos los medios de cultivo fueron
semisólidos, se utilizó agar gel como
agente gelificante (5gL-1). El pH se
ajustó a 5.7 y fueron esterilizados en
autoclave.
 El mayor porcentaje de geminación se
 https://www.zaragoza.una
m.mx/wpcontent/Portal2015/Licenci
aturas/biologia/tesis/tesis_
rodriguez_farfan.pdf
 Para la desinfección de semillas de cápsulas  Medio Ms
E. secundum y
E.ibaguense.
maduras, las semillas se depositaron en tubo
de centrífugo estéril de 50 ml, luego se
agregaron 20 ml de alcohol antiséptico al 70%,
se agitó suavemente durante 5 segundos,
posteriormente se lavaron con agua destilada
estéril, a continuación se colocó hipoclorito 20
ml y una gota de Tween 20, se agitó
suavemente por 5 minutos. Para finalizar se
realizó tres lavados con agua destilada estéril
y con una microespátula se colocaron en los
medios de cultivo.
obtuvo en el tratamiento T6 con el medio
de cultivo Mitra, adicionado con carbón
activado y peptona, donde las semillas
alcanzaron el 87% de germinación;
mientras que, el menor porcentaje
obtenido fue en el tratamiento T10 que
corresponde al medio nutritivo con el
fertilizante orgánico comercial con Humus,
donde alcanzaron 38% de germinación.
 A los 15 días después de la siembra (DDS)
se observó que los embriones de E.
secundum solo un promedio del 9% de
semillas comenzaban a hidratarse,
mientras que para E. ibaguense el 100% de
las semillas habían tomado un color verde.
Para los 30 días las semillas mostraron el
siguiente paso del desarrollo en el cual
aumenta el embrión, pero en el día 51 de
observación en esta especie se logró un
99% de semillas germinadas, para E.
secundum la germinación fue más, con un
promedio de 55% de éxito en la
germinación.
 https://repository.unimilita
r.edu.co/bitstream/handle
/10654/35949/DelgadoCas
troDianaPaola2019.pdf?isA
llowed=y&sequence=1
 Se empleó el medio de cultivo MS  En las fases de crecimiento de hojas y de  https://www.redalyc.org/pdf
 No especifica
Prosthechea
citrina
(Murashige y Skoog, 1962) suplementado
con 30 g l-1 de sacarosa, 2 g l-1 de
Phytagel, el pH se ajustó a 5.70 ± 0.01. Se
utilizaron los reguladores de crecimiento
vegetal 6-bencil-aminopurina (BAP) y
ácido naftalenacético (ANA), resultando
la
combinación
BAP/ANA
en
concentraciones de 1.0–0.1 a 3.0-0.3 mg
l-1 para organogénesis y para
enraizamiento la combinación ANA/BAP,
en concentraciones de 1.0–0.1 a 3.0- 0.3
mg l-1. Se utilizaron frascos tipo Gerber®
de 100 (ml) a los cuales se agregaron 20
ml del medio de cultivo. Estos se
esterilizaron a 120 °C, 15 psi por 20 min.
enraizamiento la combinación ANA3.0/BAP
0.3 mg l-1 fue la que mostró el mayor
desarrollo de hojas y raíces nuevas, ya que
hubo incrementos en los parámetros de
evaluación en el tamaño de hojas con una
longitud máxima de 20.6 mm y raíces de
38.37 mm. Las plantas aclimatadas con el
sustrato S3 (corteza de encino + tezontle +
carbón en relación 1:1:1) fueron las que
mostraron mayor supervivencia con 85%
durante 30 días.
/674/67446178003.pdf
 Para realizar la siembra en medios de cultivos,  El medio de cultivo basal fue el MS  Se consiguió el cultivo in vitro por semillas de  https://www.researchgate.n
se desarrolló la asepsia superficial de las
cápsulas bajo un procedimiento ya establecido
(Ávila y Salgado-Garciglia, 2000), que consistió
en colocarlas en una solución de detergente
neutro (Hyclin® 15%, 15 min), enjuague con
agua corriente, ponerlas en etanol 70% por 2
min, posteriormente en agua oxigenada 3% por
1 min y por último en hipoclorito de sodio
comercial 1.2% por 20 min. En área estéril se
enjuagaron tres veces con agua destilada
estéril y fueron seccionadas con un corte
transversal y otro longitudinal, separando las
semillas con una espátula y cultivándolas sobre
el medio nutritivo.
(Murashige y Skoog, 1962) con 30 g litro1 de sacarosa, 7 g litro-1 de agar, con un
pH 5.75. Para optimizar la germinación,
regeneración, desarrollo de plántulas y
lograr la conservación de plántulas, se
adicionaron reguladores de crecimiento
(ácido
naftalenacético,
ANA;
benciladenina, BA; ácido giberélico, GA3;
y ácido abscísico, ABA) en diferentes
dosis según la planta y el tipo de
respuesta in vitro. Los cultivos fueron
mantenidos en cuarto de incubación con
condiciones controladas de luz (16 h
fotoperíodo, 2000 lux) y temperatura
(25°C).
todas las orquídeas en estudio. En general se
ha obtenido un 100% de germinación
utilizando el medio completo MS, con o sin
reguladores de crecimiento, al cultivarlas en
condiciones de luz. Se ha observado que al
adicionar BA en una dosis relativamente baja
(0.05 mg litro1 ), el proceso de germinación
en general se acelera y es homogénea, no
importando si se incuban en la oscuridad o en
la luz.
et/publication/233799527_P
ropagacion_y_mantenimient
o_in_vitro_de_orquideas_m
exicanas_para_colaborar_en
_su_conservacion