Microbiología: Extracción y Manejo Básico de Laboratorio

CURSO DE EXTRACCIONISTA Y
MANEJO BASICO DE
LABORATORIO
Ct. Tec. Buscazzo Gonzalo
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Microbiologia
.
• Es el estudio de los microorganismos y sus actividades. Esto concierne
a su forma, estructura, fisiología, reproducción, metabolismo e
identificación.
• El objetivo de la Microbiología es comprender las actividades
perjudiciales y beneficiosas de los microorganismos y mediante esta
comprensión, diseñar la manera de aumentar los beneficios y reducir
o eliminar los daños
• Es el puente entra la biología y la infectologia
Postulados de Koch
• El agente debe estar presente en cada caso de la enfermedad y ausente en
los sanos.
• El agente no debe aparecer en otras enfermedades.
• El agente ha de ser aislado en un cultivo puro a partir de las lesiones de la
enfermedad.
• El agente ha de provocar la enfermedad en un animal susceptible de ser
inoculado.
• El agente ha de ser aislado de nuevo en las lesiones de los animales en
experimentación.
De este modo se establecía un protocolo para considerar un patógeno como
causa directa de una lesión: mientras que muchas bacterias aparecen como
“parásitos” de lesiones provocadas por otros agentes, solo hay un agente
que la provoque realmente.
Fueron descriptos en un primer momento en relación a M. tuberculosis, y
luego generalizados a los microorganismos en general. Aunque la mayoría de
los agentes infecciosos causantes de enfermedad en humanos cumplen los
postulados, hay algunas excepciones. Por ejemplo: Mycobacterium leprae,
causante de la lepra, no se ha podido cultivar in vitro como cultivo puro, por
lo que no cumple el tercer postulado.
Microorganismos
• Es importante tener en cuenta la gran DIVERSIDAD
que existe entre ellos: diversidad de tamaño, de
caracteristicas biológicas, de características
patogénicas…
• Hay cuatro grupos:
- Bacterias
- Virus
- Hongos
- Parásitos
ÁREAS DE LA MICROBIOLOGÍA
• Bacteriología: Estudia las bacterias, microorganismos procariotas
unicelulares de estructura relativamente simple. Ejemplos:
Staphylococcus aureus, Bacillus subtilis, Escherichia coli,
Pseudomonas aeruginosa, etc.
Bacterias
• Son organismos unicelulares de vida libre que se reproducen por
fisión binaria. Contienen dentro de su membrana plasmática
toda la información genética, energía y maquinaria biosintética
para su crecimiento y reproducción.
• Son células procariontes (tienen núcleo, pero no tienen
membrana nuclear)
• La gran mayoría tiene pared celular, cuyas características las
divide en dos grandes grupos: Gram positivas y Gram negativas.
• Dependiendo de las condiciones en las que realicen la obtención
de energía, pueden ser aerobias o anaerobias.
• Pueden ser extracelulares o intracelulares (Chlamydias,
Mycoplasmas).
• Pueden o no tener movilidad propia. Si la tienen se debe a su
forma (espiroquetas) o a que poseen un flagelo.
• Pueden ser capsuladas (aumenta su virulencia) o no.
Bacterias
Según su morfología se agrupan en:
Cocos
Bacilos
Espirilos
Espiroquetas
(rígidas)
(flexibles)
Los bacilos pequeños, se llaman cocobacilos.
Si hay dos cocos asociados, se llaman diplococos.
Virus
• No son seres vivos: son agentes infecciosos.
• Son “parásitos intracelulares obligados”: no tienen la
maquinaria celular necesaria para reproducirse por si
solos, por lo que usan la de la célula huésped.
• Todos tienen una cápside viral, que recubre su ácido
nucleico. Cada virus tiene un solo tipo de ácido
nucleico, pero este varia de virus a virus. Así tenemos
virus con DNA y con RNA
• Algunos tienen una envoltura asociada, si la tienen se
los llama envueltos. Si no, desnudos.
ÁREAS DE LA MICROBIOLOGÍA
• Micología: Estudia los hongos, microorganismos eucariotas
quimioheterotrofos, pueden ser unicelulares o multicelulares.
Ejemplos: Aspergillus fumigatus, Histoplasma capsulatum, Candida
albicans, etc.
Hongos
ÁREAS DE LA MICROBIOLOGÍA
• La Parasitología: es el nombre que recibe aquella disciplina que forma
parte de la Biología y que aborda especialmente el estudio de los
parásitos. Cabe destacarse que el parásito es un tipo de organismo
animal o vegetal que se caracteriza por vivir de otra especie, es decir,
se alimenta de otro organismo.
Parásitos
• Protozoarios (unicelulares) o metazoarios (multicelulares). Eucariotas.
• NO TODOS SON MICROSCOPICOS!
Tamaños
V
B
parásitos
unicelulares
Parásitos
multicelulares
Hongos y
Impacto de los microorganismos en la
vida
• Los microorganismos pueden ser patógenos (causantes de
enfermedad) o no. Dentro de los microorganismos
patógenos tenemos que distinguir los que causan
enfermedades siempre que están presentes (patógenos
primarios) y los que causan enfermedad en situaciones
especiales del huésped (patógenos oportunistas).
• Es importante entender que un microorganismo puede ser
patógeno para una especie y no para otra.
• La mayoría de los microorganismos no son patógenos para
el hombre.
FLORA NORMAL
El problema surge cuando un microorganismo perteneciente a cierto
lugar del organismo (ej: E. Coli en el intestino) migra a otro lugar en
donde no estaba antes, o que debería ser estéril, es decir, libre de
gérmenes (ej: vejiga). En estos casos estos microorganismos que no son
patógenos en un lugar, pasan a serlo en otro, siendo causantes de
enfermedad.
Célula Eucariota
Célula Procariota
Conceptos de Infectología
• Infección: es la penetración y el desarrollo o
multiplicación de un agente infeccioso en el organismo de
un ser vivo. Puede o no dar enfermedad.
• Enfermedad Infecciosa: enfermedad clínicamente
manifiesta debido a la penetración y multiplicación de un
microorganismo.
• Periodo de incubación: tiempo que transcurre entre la
exposición a un agente infeccioso y la aparición del
primer signo o síntoma de la enfermedad.
• Periodo de transmisibilidad: lapso durante el cual el
agente infeccioso puede transferirse directa o
indirectamente de una persona infectada a otra.
CONCEPTOS
• Patogénesis: espectro de eventos desencadenados por un
microorganismo que conducen a daño y enfermedad.
• Virulencia: severidad con que se presenta la enfermedad
Conceptos de Infectología
Interacción huésped-microorganismo:
1. Encuentro: depende de las características del
microorganismo, de su reservorio (lugar donde permanece
en la naturaleza, ya sea un ser humano, un animal o el
ambiente) y de las condiciones que llevan al hombre a
establecer contacto con él.
2. Entrada: vías de transmisión:
- Inhalatoria: esporas, microgotas de saliva, filamentos,
microorganismo directamente.
- Por vectores: biológicos o fomites.
- Fecal-oral
- Sexual
- Sanguínea
- Por contacto directo con piel y/o mucosas
- Zoonótica
- Vertical
Conceptos de Infectología
• PATÓGENOS PRIMARIOS: los que inician enfermedades en
huéspedes previamente sanos y que no tenían ninguna
condición predisponente hasta ese momento, cuando lo
alcanzan por la puerta de entrada adecuada, y en
cantidades suficientes.
• PATÓGENOS OPORTUNISTAS: los que causan enfermedad
sólo en huéspedes con condiciones predisponentes
(inmunocomprometidos por cualquier causa, quemados,
gran destrucción o alteración de epitelios).
La muestra debe ser:
• Representativa: de la infección en curso. Por ejemplo: si tengo una
neumonía la muestra más representativa será el esputo, en una
meningitis el LCR, etc.
• Significativa: cantidad de muestra suficiente como para obtener un
resultado confiable. Deberá tener una cantidad suficiente de
microorganismos como para poder tener un resultado positivo.
• Tomada correctamente! Una muestra mal tomada puede llevar a un
diagnóstico errado o a la ausencia de diagnóstico.
• Tomada oportunamente! La muestra debe ser tomada en momentos
oportunos. Hay infecciones que tienen periodos ventana (periodo en
el cual el diagnóstico serológico (en el que se buscan anticuerpos o
antígenos ) será negativo aún en presencia de infección). Hay otras
infecciones crónicas en que encontraremos el microorganismo en
algunos períodos y en otros no. Es por este motivo que la persona que
pide la muestra (y la que la obtiene preferentemente también) debe
estar familiarizada con los ciclos de las enfermedades infecciosas para
saber si una muestra está siendo tomada en tiempo y forma o no.
• Correctamente conservada y transportada: si no conservamos o
transportamos correctamente la muestra es lo mismo que no tomarla,
o tomarla mal. Puede terminar siendo inútil para su procesamiento, o
darme resultados errados.
Papel del laboratorio en la
microbiología
Dependiendo del área de la microbiología de la que
estemos hablando, el laboratorio tiene papeles muy
distintos:
- En la microbiología básica y médica se utiliza como método
de estudio de los microorganismos.
- En la microbiología técnica se lo usa aparte de cómo
método de estudio, como herramienta para la obtención de
los mayores beneficios posibles a través de la explotación de
un cierto microorganismo.
- En la microbiología clínica se utiliza como herramienta
para diagnosticar una infección por determinado
patógeno.
Diagnóstico Directo
BUSCA AL AGENTE CAUSAL, O FRAGMENTOS DE
ÉL (ANTÍGENOS, QUE PUEDEN SER PROTEÍNAS,
ÁCIDOS NUCLEICOS, HIDRATOS DE CARBONO)
Antes de procesar la muestra,
recordemos:
• Para poder realizar un buen diagnóstico en el laboratorio
es IMPRESCINDIBLE tomar una buena muestra. Ésta debía
ser:
- Representativa (qué)
- Significativa (cuánto y calidad)
- Correctamente tomada (cómo)
- Oportunamente tomada (cuándo)
- Correctamente conservada y transportada.
• El tipo de muestra dependerá de la localización de la
infección.
Tipos de muestras clínicas
• Sangre
• LCR
• Esputo y secreciones respiratorias
• Hisopado de fauces
• Orina
• Materia Fecal
• Saliva
• Tejidos (por biospia o raspado)
• Secreciones
• Líquido sinovial (articulaciones)
• Colecciones (absesos, derrames)
Infecciones de VAS (Vías
Aéreas Superiores)
Resfrío común o catarro de VAS.
• Los agentes más frecuentes son virus (rinovirus,
adenovirus, parainfluenza, coronavirus, etc).
• Clínica: Congestión y secreción nasal, fiebre, puede
acompañarse de conjuntivitis (los mismos virus son
también agentes causales).
• El diagnóstico es por la clínica.
• Se autolimitan en 5 a 10 días.
• El tratamiento es sintomático (antitérmicos, analgésicos).
Faringitis
AGENTE ETIOLÓGICO CLÍNICA
MEDIOS
DIAGNÓSTICOS
OTRAS
Streptococcus
pyógenes
Odinofagia, fiebre,
adenopatías,
secreción blanco
grisácea en fauces
HISOPADO!
Cultivo en Agar
Sangre (hacen
hemólisis)
IMPORTANTE:
tratamiento con
penicilina (evita
secuelas).
Es agente causal de
infecciones cutáneas
y de la escarlatina
por su toxina
Corynebacterium
diphteriae
Igual, produce una
seudomembrana que
puede causar
oclusión de la VAS
HISOPADO!
Cultivo en medio de
Loeffler (no crecen
streptococos)
IMPORTANTE
VACUNARSE!!
Neisseria
Gonorrhoeae
Igual, puede
HISOPADO (dacron o
acompañarse de ETS. alginato de calcio)
OJO niños!
Agar Thayer Martin
(selectivo)
Es una ETS!
Tratamiento del
paciente y de la
pareja!
Toma de muestra
Hisopado de fauces
• En infecciones de las vías aéreas superiores.
• Con hisopo de algodón (lo más comun), de dacron o
alginato de calcio (para N. gonorrhoeae).
• Se desliza el hisopo con cuidado por la zona afectada.
• Importante incluir en la muestra (si los hay): exudados,
seudomembranas.
• Se conserva a temperatura ambiente en MEDIO DE
TRANSPORTE (Stuart, AMIES, etc).
• Luego se utiliza para cultivo y tinciones.
• Para streptococos hay un test rápido (Streptotest o
Quicktest).
Infecciones Respiratorias
Bajas
Neumonía Aguda de la Comunidad (NAC)
• 50% Bacterianas: importante conocer el medio
epidemiológico ya que la mayoría de los tratamientos son
empíricos (sin hacer diagnóstico de certeza).
• En nuestro medio consideramos en pacientes
ambulatorios: Streptococcus Pneumoniae, Mycoplasma
neumoniae, Haemophilus influenzae
Toma de muestra
Esputo
• En infecciones respiratorias bajas (neumonías, bronquitis, bronquiolitis).
• Si el paciente es capaz de esputar, debe hacerlo en un frasco estéril. Se puede
estimular las secreciones y la expectoración con nebulizaciones.
• Se pueden aspirar secreciones del contenido estomacal en niños (no esputan y
por eso lo degluten).
• También se pueden hacer técnicas invasivas en pacientes internados:
- Lavado bronquioalveolar (BAL, se llena la vía aérea de solución fisiológica y
luego se retira).
- Cepillado bronquial: cepillo que viene con un cobertor, que se inserta en las
vías respiratorias desde la boca con el capuchón puesto para no contaminarlo
con la flora bucal. Se toma la muestra, se vuelve a tapar el cepillo por el mismo
motivo y se retira.
-Si el paciente está intubado, se puede aspirar secreciones desde el tubo.
• Lo más común es que se use esputo. Se considera un esputo significativo cuando
a la tinción de gram veo menos de 10 células epiteliales, y más de 25 leucocitos
por campo.
• REQUIERE REFRIGERACIÓN A 4° C si la muestra no va a ser procesada
inmediatamente.
• Se utiliza para realizar cultivos y tinciones.
NAC
AGENTE ETIOLÓGICO
MEDIOS DIAGNÓSTICOS
OTRAS INFECCIONES QUE
CAUSA
Streptococcus neumoniae
Agar Sangre (hace hemólisis) Sinusitis, otitis media,
meningitis, endocarditis
Haemophilus influenzae
Agar chocolate (sangre
calentada, libera nutrientes
que necesita)
Meningitis, otitis media
aguda, sinusitis,
conjuntivitis. IMPORTANTE
VACUNACION!
Pseudomona Aeruginosa
Agar chocolate
Infección urinaria
Staphylococcus aureus
Agar Chapman hipersalado
Infecciones cutáneas
Mucha resistencia!!!
Toma de muestra
Sangre
• Se puede usar en el diagnóstico de una infección hematológica, o para
cualquier tipo de infección. Hay infecciones localizadas que cursan con
microorganismos en sangre que pueden ser detectados. Si no busco el
microorganismo, puedo buscar la respuesta inmune que éste genera: así
puedo diagnosticar una hepatitis con una muestra de sangre.
• Se puede obtener por punción venosa. Generalmente no se utiliza
punción arterial. Siempre antes de punzar para obtener cualquier tipo de
muestra y por cualquier motivo hay que desinfectar la zona!!
• Para realizar estudios serológicos se toma sin anticoagulantes, pues
necesitamos sólo el suero.
• Si necesito sangre entera, la recojo con anticoagulantes, de manera
estéril.
• Si voy a realizar hemocultivo, inoculo la muestra directamente en el
frasco.
• Lo ideal es procesarla lo antes posible. Si vamos a tardar hay que
conservarla a temperatura ambiente, sin refrigerar, protegida de la luz.
• Puedo realizar con ella frotis, tinciones, cultivos, observción directa, etc.
Bonquiolitis
• Es el primer episodio de broncoespasmo en niños
menores de dos años.
• Causada por el Virus Sincicial Respiratorio (VSR).
• Clínica:
- Fiebre
- Insuficiencia respiratoria (de leve a grave)
- Tos (seca o con expectoración)
- Compromiso del estado general
- Alteraciones en la auscultación y en la radiografía de
tórax (pueden no encontrarse estas últimas)
• Diagnóstico: CLINICO. Puede hacerse aspirado
nasofaríngeo e IFI (inmunofluorescnecia indirecta) en él.
Toma de muestra
Asirado Nasofaríngeo
• Con una sonda (tamaño acorde al paciente!!).
• Se introduce la sonda por la nariz hasta la faringe (medirla
previamente).
• Se aspira (secreciones y células) y se colocan sobre un
portaobjetos.
• Se busca al agente (o partes de él) por medio de IFI.
Meningitis
Meningitis
• Las mas frecuentes son las virales, que son mas banales y no
requieren tratamiento farmacológico (excepto las causadas
por Herpes Simplex). Sí se requiere un control estricto del
paciente
• Las bacterianas son mas graves, pero por suerte menos
frecuentes. Se realiza SIEMPRE diagnóstico de certeza
(aislamiento del agente en este caso), pero hasta obtener el
resultado del mismo se realiza tratamiento empírico; por eso,
al igual que en la neumonía, es necesario conocer el medio
epidemiológico:
- Pacientes de 0 a 2 meses: Patógenos adquiridos en el canal
de parto: Streptococcus agalactiae, Escherichia coli K1.
- Pacientes de 2 meses a 5 años: S. pneumoniae, N.
meningitidis, H. Influenzae.
- Pacientes mayores de 5 años y menores de 60: S.
pneumoniae, N. meningitidis.
- Pacientes mayores de 60: S. pneumoniae, N. meningitidis,
BGN, Lysteria monocitogenes.
Meningitis
AGENTE ETIOLÓGICO
MEDIOS DIAGNÓSTICOS
OTRAS
Streptococcus agalactiae
Agar Sangre (hace hemólisis) IMPORTANTE: se realiza
pesquisa en el ultimo
trimestre y se trata a la
madre!
E. Coli K1
Búsqueda de antígenos por
medios moleculares
N. Meningitidis
Agar sangre, chocolate,
thayer martin.
Toma de muestra
LCR
• En sospecha de cualquier infección meningoencefálica, o
en pacientes con alteraciones del sensorio sin causa clara.
• Se toma la muestra por punción lumbar, por debajo de la
cuarta vértebra lumbar, en donde con buena técnica ya
no hay riesgo de lesión medular. Debe hacerse con
técnica estéril!!!
• Se coloca una aguja especial, y se deja gotear la muestra
en un tubo de ensayo estéril. Luego esta muestra se
separa en dos tubos: uno se usará para cultivos, y el otro
para hacer el estudio físico-químico.
• Es importante observar el aspecto del liquido ni bien
comienza a salir por la aguja, así como la presión con la
que lo hace.
Infección urinaria
• CLINICA:
- Disuria (molestias al orinar)
- Dolor lumbar (en las altas) o suprapúbico (en las bajas).
- Fiebre
• El diagnóstico es clínico, y el tratamiento inicial empírico,
por lo que es necesario conocer el medio epidemiológico: el
agente más frecuente a cualquier edad (90% de los casos) es
la E. coli. Hay otros agentes menos importantes,
generalmente bacterias: Proteus spp., Klebsiella spp. Dentro
de los hongos, el más frecuente es Cándida spp.
• Al hacer el diagnóstico se comienza el tratamiento, y si
llegase a resultar un patógeno distinto en el cultivo, se lo
cambia. Lo mismo ocurre si en el antibiograma se encuentra
resistencia a el tratamiento instaurado.
Toma de muestra
Orina
• En infecciones urinarias altas o bajas. También se puede usar en
algunas ETS (uretritis).
• Muy importante explicarle al paciente cómo tomarla!!
1. Realizar higiene de la zona con un jabon sin usar (está estéril) y
agua para minimizar la contaminación por la flora normal. Secar
con una toalla limpia (para no contaminar). Las mujeres deben
colocarse un tampón vaginal para evitar la contaminación con
flora vaginal.
2. Según la patología se tomará chorro medio (IU, ya que de esta
manera por arrastre elimino la flora de la uretra) o primer chorro
(uretritis, para ver la flora existente en la uretra, y ver si hay
algún patógeno primario). Se debe tomar en un frasco estéril
especial para éste uso, ya no se recomienda utilizar frascos
caseros.
3. Debe ser la primera orina de la mañana o tener (de ser
posible) tres a cuatro horas de retención urinaria, para aumentar
las posibilidades de encontrar el microorganismo.
Toma de muestra
Orina
• En los niños se toma la muestra con micción al acecho: hay
que perseguirlo hasta que orine, y en ese momento juntar la
muestra en frasco estéril. Hay que higienizarlo de la misma
manera, y si tarda mucho repetir. Igualmente, es más
probable que la muestra este algo contaminada.
• En pacientes sondados, puede tomarse la muestra previo
cambio de la sonda para disminuir la contaminación, que en
parte existirá de todas maneras; o por punción suprapúbica,
método cruento pero que no debería dar una muestra
contaminada de ser tomada correctamente.
• HAY QUE REFRIGERARLA!!
• Puedo cultivar o realizar tinciones del sedimento.
Afecciones Intestinales
Parasitosis intestinales
AGENTE
CLÍNICA
DIAGNÓSTICO
Entamoeba hystolítica
(protozoo)
Diarrea mucosanguinolienta
Dolor
-Seriado de M. Fecal: fresco
-Indirecto
Giardia Lamblia
(protozoo)
Diarrea aguda
Diarrea crónica con
malabsorción y desnutrición
en niños
-Seriado de M. Fecal: fresco
-Puede realizarse sondaje duodenal si
el resultado es negativo (acá no se
hace)
-Importante: evaluar estado
nutricional y general
Teniasis (Taenia saginata Cuadro inespecífico: diarrea,
y T. Solium)
prurito anal, perdida de
(cestodes, platelmintos)
peso, aumento del apetito
Expulsión de proglótides
(segmentos del parásito)
-Seriado de M. Fecal: fresco
-Observación macroscópica del
parásito o sus proglótides expulsadas
por el paciente.
-Solium: carne de cerdo (menos acá).
Puede hacer neurocisticercosis.
-Saginata: carne de vaca
Hymenolepis nana
(cestodes, platelmintos)
Asintomática. Diarrea.
Prurito anal y nasal.
-Seriado de M. Fecal: fresco
-Muy frecuente en niños
Ascaris Lumbricoides
(nematodes, phasimidia)
Obstrucción intestinal
(ovillos)
- Seriado de M. fecal: fresco
Diarreas bacterianas y virales
• Sintomatología más aguda.
• Las virales se autolimitan en 5-7 días. Dan diarreas acuosas,
generalmente sin moco, pus o sangre. No se realiza
diagnóstico etiológico no tratamiento específico. Cuidar la
hidratación y nutrición de los pacientes!!
• Las bacterianas también se autolimitan, pero pueden tardar
algunos días mas. Dan diarreas acuosas, que pueden tener
mas frecuentemente moco, pus o sangre. No debe realizarse
tratamiento antibiótico, excepto que se CONFIRME que su
etiología es por bacterias invasivas como Yersinia
enterocolítica, Shigella spp. o Salmonella spp. Para realizar
el diagnóstico se realizan cultivos en medios selectivos
especiales para esas bacterias.
Toma de muestra
Materia Fecal
• Generalmente en infecciones por parásitos. En infecciones que se suponen
bacterianas no se hace porque debido a la gran cantidad de flora que tiene esta
muestra es muy difícil encontrar algo. En cambio, los parásitos al no ser flora normal
(excepto Entamoeba coli) pueden ser observados y dan diagnóstico. Puede usarse
en rotavirus, se busca su genoma por PCR.
• Se debe explicar correctamente la preparación al paciente, debe evitar:
medicamentos no absorbibles opacos (carbón, bismuto), contrastes baritados,
grasas, alimentos con muchos residuos (fibras).
• Se puede requerir muestra única o seriada:
- Única: se recolecta la materia fecal recién emitida en un frasco con fijador y otro
con solución fisiológica o agua. Esto es necesario ya que el fijador puede romper
algunas formas de algunas especies de parásitos, con lo cual no las vamos a
encontrar luego en la observación al microscopio.
- Seriada: de 3 a 7 muestras alternas en 7 días, en un frasco con formol. Explicar que
debe recoger las zonas que tengan algo particular (moco, sangre). El último día
recoger la muestra en solución fisiológica y llevarla al laboratorio. Esto se usa en
infecciones en las que por el ciclo del parásito o por el aumento del tránsito
intestinal suponemos que no encontraremos el parásito en una muestra única.
• Remitir rápidamente al laboratorio o conservar refrigerada!!
• Voy a observar al MO con o sin tinción, y puedo cultivar en medos especiales (esto
es de poco uso en la práctica).
Infecciones del tracto genital
Enfermedades del tracto genital
AGENTE ETIOLÓGICO
CLÍNICA
MEDIOS DIAGNÓSTICOS
Treponema pallidum (Sífilis)
Chancro (lesión ulcerada)
duro e indoloro. Luego se
generaliza.
Directo por microscopía de
fondo oscuro.
Indirecto: VDRL
Chlamydia Trachomatis
(Clamidiasis)
Secreción transparente
uretral (hombre) o cervical
(en la mujer). Tracoma.
Conjuntivitis.
Indirecto: PCR, Elisa, IFI
Es intracelular! No se cultiva
Neisseria gonorrhoeae
(Gonorrea)
Secreción purulenta uretral o Hisopado (dacron o alginato)
cervical. Conjuntivitis.
Transporte en Stuart
Cultivo en Thayer Martin
Gardnerella vaginalis
(vaginosis)
Flujo blanco grisáceo con
olor a pescado podrido,
ardor, prurito
Agar chocolate (CLINICO)
Cándida spp. (Candidiasis
vaginal)
Flujo blanco con aspecto de
“leche cortada”, prurito,
ardor
Directo: MO
Cultivo en medioo Lactrimel
o Stuart
Toma de muestra
Secreciones en Enfermedades del
tracto genital
• Si se ve secreción desde la uretra se puede tomar
por cepillado o espontáneamente.
• Si hay secreción en el endocérvix hay que colocar
un espéculo y tomar la muestra con un hisopo.
• Recordar que si la sospecha es N. gonorroheae,
el hisopo debe ser de Dacron o Alginato de
Calcio. Debe colocarse en medio de transporte.
• Se realizan extendidos, que luego se tiñen, o
cultivos
Toma de muestra
Secreciones en Enfermedades del
tracto genital
• VDRL: Venereal Desease Research
Laboratory.
Método indirecto de diagnóstico de sífilis. Se
buscan anticuerpos en suero. Muy sensible y
poco específico.
• Se confirma por medio de otro método de
diagnóstico indirecto, que busca anticuerpos
más específicos (FT-abs).
Toma de muestra
Tejidos
• En infecciones mucocutáneas. Sus agentes etiológicos sueles
ser hongos (dermatofitos, Cándida) y bacterias (Streptococos,
Staphylococos, y otros).
• En las exantemáticas (sarampión, rubeóla, sexta, quinta que
son virales; o escarlatina que es bacteriana) no suele hacerse
diagnóstico microbiológico: es CLINICO.
• Cuando es necesario tomar escamas de piel o de uñas, se
debe pedir al paciente que tres dias previos no utilice talcos,
cremas ni antifúngicos. Si la muestra a tomar es de una uña
del pié, debe hacerse baños de agua y sal los tres días previos,
y concurrir con zapatos cerrados a la consulta.
• Puede ser por raspado o por biopsia.
• Se tiñe y observa al microscopio óptico, o se puede cultivar.
• Los tejidos deben refrigerarse o guardarse en un conservante
(formol), las escamas pueden conservarse a temperatura
ambiente.
Toma de muestra
Líquido Articular y colecciones
• Artritis sépticas: generalmente bacterianas. El agente mas
frecuente es el Staphylococo.
• Se recolectan por punción, guiada por métodos por
imágenes o no.
• El líquido articular es estéril, por lo que cualquier
microorganismo encontrado indica una infección.
• Se realiza cultivo, y tinciones.
Infecciones
intrahospitalarias
Son las que se dan en pacientes internados que
no estaban presentes al momento de la
internación y que aparece durante ella o al alta.
Infecciones intrahospitalarias
• La más frecuente de todas es la infección urinaria,
causada por el uso o la manipulación de sondas. Ya que
algunas bacterias hacen biofilms, y colonizan la sonda.
• Los patógenos causales mas frecuentes son la E. coli,
BGN, Enterococcus spp., Cándida spp.
• Se previenen mediante:
- Uso racional de sondas
- Técnica aséptica en su colocación y manipulación
- Manipularla lo menos posible
- Sacarla lo antes posible!
• De ser posible para tomar la muestra cambiar la sonda y
obtenerla desde la sonda recién colocada.
Infecciones intrahospitalarias
Infecciones de herida quirúrgica
• S. aureus, S. epidermidis, Enterococcus spp. son los más
frecuentes.
• Si se desencadena en menos de 24 horas pensar en
Clostridium spp. o S. agalactiae.
• Se previenen con una buena técnica quirúrgica, y con el
baño previo con jabón con iodo los tres días previos.
SAMR
• Primer aislamiento: un año después de la aparición de la
meticilina (antibiótico que no se usa en la clínica, pero
representa a las penicilinas en la confección de
antibiogramas).
• En hospitales su prevalencia es de hasta 40- 50%.
• Todas las cepas son resistentes a meticilina y
cefalosporinas. Algunas cepas son resistentes a
aminoglucósidos, quinolonas y macrólidos.
• El tratamiento de elección actualmente es la vancomicina.
Aunque…
Procesamiento
Procesamiento
• Nos llega al laboratorio una muestra correcta y
oportunamente tomada que es a su vez correctamente
transportada. Es representativa, y suponemos que será
también significativa (esto último lo terminaremos de
averiguar durante el procesamiento).
• El médico que nos envía la muestra tiene una sospecha
diagnóstica, que nos informa. A partir de esto tenemos
que procesar la muestra. Generalmente la persona que
remite la muestra nos informa lo que quiere que hagamos
con ella en el laboratorio, es decir, donde quiere que la
sembremos y lo que quiere que busquemos. También es
posible que en el laboratorio haya un protocolo que nos
indique dependiendo del tipo de muestra, qué técnicas
debemos aplicar.
Procesamiento de la muestra
Microscopía
• 1- Con tinción
• 2- Sin tinción
Cultivo
Otros
• 1- Medios
líquidos
• 2- Medios
sólidos
• Búsqueda de
antígenos
• Diagnóstico
indirecto
Medios de cultivo
Crecimiento microbiano
• Engloba todos los procesos que llevan al aumento de número de un
microorganismo, ya sea en la naturaleza, en una infeccion o en un
cultivo.
• Es necesario que haya un adecuado metabolismo, en un marco de
regulación de los procesos metabólicos para llegar a la división
celular.
Medios de Cultivo
• Un medio de cultivo es una solución de nutrientes que
permite el crecimiento de un microorganismo (bacteria,
hongo o parásito). Pueden ser sólidos o líquidos.
• Para “cultivar” un virus debemos realizarlo en células
(cultivo celular), recordemos que los virus son parásitos
intracelulares obligados.
• La introducción del microorganismo en el medio se
denomina “inoculación”.
Medios de Cultivo
• Pueden ser sólidos o líquidos.
• En un medio sólido veo colonias. En un medio líquido
mediré la turbidez del mismo para determinar el
crecimiento.
• Siembra semicuantitativa: Se realizan 3 o 4 estrías, y se
evalúa cuántas estrás presentan crecimiento de colonias.
• Siembra cuantitativa: con una micropipeta se inocula una
cantidad conocida de muestra y se evalúa cuántas
colonias crecieron con esa cantidad.
En bacteriología se cuantifica como unidades formadoras
de colonia (UFC) por mililitro.
Medios de Cultivo
• La elección o el armado del medio de cultivo dependerá
de la sospecha que yo tenga acerca del microorganismo
causante de la infección. Las infecciones suelen ser
causadas por un número restringido de microorganismos
cuando pensamos en un tipo de infeccion en un paciente
con ciertas características y teniendo en cuenta la
epidemiología del lugar. Entonces, pensando en los
microorganismos que pueden causar la infección en
cuestión, sembraré la muestra en determinados medios.
• Es importante tener en cuenta el metabolismo del bicho
sospechado: si yo pienso en anaerobios, debo cultivarlo
en medios especiales para el caso.
Cultivo
LOS CULTIVOS SON MUY
UTILIZADOS EN BACTERIOLOGÍA Y
EN MICOLOGÍA, NO TANTO EN
PARÁSITOS Y EN VIROLOGÍA (CASI
NADA).
Medios de Cultivo: Bacteriología
Medios sólidos
Medios líquidos
Medios de Cultivo: Bacteriología
Siembra en tres estrías
Agar Nutritivo Medios todo
Agar Sangre
propósito
Agar Chocolate
(enriquecido)
Medios de Cultivo: Diferencial y selectivo
Agar Mc. Conkey: Violeta
de Genciana (inhibe Gram
negativos) + lactosa +
colorante sensible al ácido
Agar Levine: Eosina + Azul de metileno (inhibe cocos
positivos) + lactosa
Cultivo de hongos: microcolonias
antibiograma