LABORATORIO #4 CÉLULAS PROCARIOTAS: ESTUDIO DE BACTERIAS Consuegra S.1, Contreras A.1, Dominguez D.1, Dominguez M.1, Julio R.1, Olmos S.1Perez M. Ortiz J.2 1. Estudiantes de la Facultad de cEyN. 2. Docente de biología de la facultad de cEyN Cartagena De India, Colombia. JUNIO 2019 procedure is followed whereby the bacteria present in it are observed RESUMEN and qualitatively differentiate bacteria GRAM + (positive) or GRAM En esta experiencia se realizaron (negative) presenting this one stain procedimientos para observar different from the other, intense blue mediante el microscopio células and violet for the gram (+) and red or procariotas (bacterias), para así pink for the gram (-), for the cheese, identificar como estas bacterias están the meat and the fruit are touched presentes en varios alimentos de with the gram stain to identify all the uso cotidiano en buen o mal estado. bacteria In general, they present with Como ejemplo tomamos el yogurt, el a completely red stain. queso, la fruta y la carne, con el yogurt se siguió un procedimiento mediante el cual se llegaron a INTRODUCCIÓN observar las bacterias presentes en él y de manera cualitativa diferenciar Los Procariontes aparecieron antes bacterias GRAM + (positiva) o GRAM que los Eucariontes y, en alguna – (negativa) presentando estas una forma aún desconocida, estos últimos tinción distinta a la otra , azul intenso se originaron a partir de aquellos. Las o violeta para las Gram(+) y rojo o Bacterias son células procariotas muy rosado para las Gram(-), para el abundantes que pueden encontrarse queso, carne y fruta se trabajó con la en cualquier medio debido a la gran tinción de Gram para identificar todas variedad de metabolismos que las bacterias en general que se pueden presentar; En algunas presentaban con una tinción bacterias puede presentarse la completamente roja. formación de una capsula bacteriana constituida por polisacáridos, polialcoholes y aminoazúcares, ABSTRACT cumpliendo la función de resistencia a la desecación, ataque de células In this experience, it is a procedure of fagocíticas y anticuerpos del sistema daily use in poor condition. As an inmune y por último fijación a células example we take yoghurt, cheese, hospedadoras. Poseen pared celular fruit and meat, with yogurt a que les da forma y las protege de fuertes presiones osmóticas; Según la pared hay dos tipos de bacterias: Gram (+) y Gram (-) ambas poseen una capa de muereína (peptidoglucano), su parte glúcida está constituida por NAcetilmurámico y N-Acetilglucosamina. Al Gram (+) se le unen cuatro ácidos (LAlanina, D-Alanina, D-Acido glutámico, LLisina) y por su parte las Gram (-) se caracterizan porque en su capa externa sobre los peptidoglucanos aparece una capa de lipopolisacaridos y proteínas, mientras que las Gram (+) carecen de esta capa. En ocasiones hay bacterias que no poseen pared celular y se conocen como protoplastos; Las bacterias también poseen Membrana plasmática, Citosol, Cromosoma Bacteriano, Flagelo y pelos. Las bacterias responden con movimientos de aproximación o separación según las condiciones ambientales, composición química o las condiciones físicas del medio. En cuanto a su nutrición algunas son Fotoautótrofas, Fotoheterótrofas, Quimioatótrofas y Quimioheterótrofas. Su reproducción puede ser asexual, la cual se da por bipartición, originando dos células hijas a partir de un duplicado de ADN y Sexualmente que se da cuando existe recombinación genética. OBJETIVOS: OBJETIVO GENERAL Identificar algunas bacterias presentes en el yogurt y medios de cultivo, utilizando técnicas sencillas de coloración. OBJETIVOS ESPECÍFICOS Diferenciar de manera cualitativa las bacterias Gram (+) de las Gram (-). Conocer algunas técnicas de coloración básica utilizadas en el estudio de las bacterias. METODOLOGÍA MUESTRA DE YOGURT Prepare un extendido fino de la muestra de yogurt con una gota de agua utilizando un Asa bacteriológica y deje secar al aire, proceda a fijar la muestra pasándolo 3 o 4 veces por el mechero de alcohol, trate de que su muestra no se queme. Lave la preparación con la mezcla de Alcohol- cloroformo para arrastrar las gotas de grasa del yogurt y deje secar al aire. Coloque la lámina de forma vertical hasta que se escurra completamente el exceso de agua y seque el extendido. Finalmente agréguele a la placa Azul de metileno durante un minuto y enjuague con abundante agua. Observe el extendido al microscopio con objetivo de inmersión (100x), las bacterias Gram (+) se observarán de color azul intenso o violeta y las bacterias Gram (-) se observarán de color rojo o rosado. Proceda a cubrir la superficie del extendido con safranina o fucsina (colorante contraste) durante un minuto. Lavar con agua destilada. Esquematice sus observaciones. MUESTRA DE QUESO, FRUTA Y CARNE: Se tomó un asa bacteriológica (que se calentó previamente con el mechero para eliminar cualquier residuo anterior) para hacer el tendido correspondiente en el portaobjeto, sea este el queso, la fruta o la carne. Se cubrió con cristal violeta, se esperó 1 minuto, y después se lavó con abundante agua. Se pasó por el mechero unas 3 o 4 veces sin afectar la muestra. Luego de esto se cubrió la muestra con Lugol, y pasado un minuto se “bañó” con alcohol acetona, se esperaron 10 segundos y se lavó con abundante agua. Se cubrió la muestra con Fuscina por un minuto, y se lavó con abundante agua. Se colocó la preparación verticalmente para escurrir la muestra al aire, y proceder a hacer las observaciones necesarias con el microscopio. continuó con el proceso de tinción. Se empezó agregando cristal violeta a la muestra, se dejó secar al aire por un minuto y se agregó abundante agua, se procedió a cubrir la muestra con una solución de lugol y luego de 1 minuto se enjuagó con abundante agua, se añadieron unas gotas de alcohol-acetona hasta eliminar el exceso de cristal violeta, luego de 10 segundos se lavó con agua y se cubrió la superficie con fuscina, se volvió a dejar por 1 minuto y se lavó con agua, se colocó en forma vertical y se esperó hasta secarse por completo el porta objeto con la muestra. Por último se le colocó el cubre objeto y se procedió a examinar la muestra en los objetivos de 4x, 10x, 40x, y 100x. MARCO TEÓRICO Se tomó un asa bacteriológica y se calentó para eliminar residuos anteriores, se procedió a tomar la muestra del queso con el asa bacteriológica y colocar en el porta objeto una capa muy fina del queso obtenido, se tomó con una pinza de palo el porta objeto y se empezó a calentar levemente para no ocasionar daño a la muestra, se repitió este procedimiento 4 veces, luego de fijar la muestra con el calentamiento se La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés Christian Gram (1853-1938), que desarrolló la técnica en 18841. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose bacterias grampositivas a las que se visualizan de color morado, y bacterias gramnegativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella. hubiera una especie de bacteria gram negativa, aparecería de color rosa. El resto son los leucocitos que atacan la infección. Bacterias Escherichia coli (gram negativas) vistas al microscopio tras ser teñidas con la tinción de Gram. Una tinción de Gram en la que se observa un mezclado de Staphylococcus aureus (coco gram positivo) y Escherichia coli (bacilo gramnegativo). Procedimiento -Recoger muestras para ubicarlas en el microscopio. Bacterias Clostridium (grampositivas). perfringens -Hacer el extendido con un palillo de madera. -Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero. -Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces aproximadamente). -Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto. Bacterias grampositivas de Bacillus anthracis (bacilos morados) que producen una enfermedad llamada carbunco, encontrados en una muestra de líquido cerebroespinal. Si -Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra -Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente. -Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración del reactivo (parte crítica de la coloración). (las gram se decoloran, las gram + no) -Enjuagar con agua. -Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Este tinte dejará de color rosado-rojizo las bacterias gram negativas. -Lavar levemente con agua. -Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión. Explicación El cristal violeta (colorante catiónico) penetra en todas las células bacterianas (tanto gram positivas como gram negativas) a través de la pared bacteriana. El lugol es un compuesto formado por I2 (yodo) en equilibrio con KI (yoduro de potasio) y Sl (Siulterio), los cuales están presente para solubilizar el yodo, y actúan de mordiente, haciendo que el cristal violeta se fije con mayor intensidad a la pared de la célula bacteriana. El I2 entra en las células y forma un complejo insoluble en solución acuosa con el cristal violeta.. La mezcla de alcohol-acetona que se agrega, sirve para realizar la decoloración, ya que en la misma es soluble el complejo I2/cristal violeta. Los organismos gram positivos no se decoloran, mientras que los gram negativos sí lo hacen. Para poner de manifiesto las células gram negativas se utiliza una coloración de contraste. Habitualmente es un colorante de color rojo, como la safranina o la fucsina. Después de la coloración de contraste las células gram negativas son rojas, mientras que las gram positivas permanecen violetas. La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la técnica. Sirve para hacer una tinción de contraste que pone de manifiesto las bacterias gram negativas. Al término del protocolo, las gram positivas se verán azulvioláceas y las gram negativas, se verán rosas (si no se hizo la tinción de contraste) o rojas (si se usó, por ejemplo, safranina). Algunos microorganismos retienen el colorante violeta, aún después de tratarlos con un decolorante, y el color no se modifica al añadir éste; otros pierden con facilidad el primer tinte, y toman el segundo. Los que fijan el violeta, se califican de gram positivos, y los que pierden la primera coloración y retienen la segunda, de gram negativos. Basándonos pues, en la reacción gram, podemos clasificar a los microorganismos en uno de los dos grupos. Los colorantes de p-rosanilina son los que mejores resultados dan en la coloración gram. Los representantes más usados de este grupo son violeta de metilo y violeta cristal o de genciana. En realidad, violeta de metilo es el nombre atribuido al compuesto tetrametil-p-rosanilina. El matiz de color de la p-rosanilina se intensifica al aumentar el número de grupos metilo en la molécula; por consiguiente, de los tres grupos, el tono más oscuro es la hexametil-prosanilina (violeta cristal), y el tinte más ligero, la tetrametil-p-rosanilina (violeta de metilo). Los nombres violeta de metilo 3R, 2R, R, B, 2B, 3B, etc., se refieren al número de grupos metilos contenidos. La letra R indica matices rojos, y la letra B, tonos azules. El violeta de cristal contiene seis grupos metilo, y se considera como el mejor colorante primario para teñir por el método de Gram. La facultad de las células para tomar la coloración gram no es propia de toda sustancia viviente, sino que se limita casi en absoluto a hongos y bacterias. Así vemos que las células de plantas y animales superiores no conservan la primera coloración; los mohos se tiñen con cierta irregularidad; los gránulos de micelios propenden retener el colorante. La reacción de Gram no es infalible ni constante; puede variar con el tiempo del cultivo y el pH del medio, y quizá por otras causas. Bacterias resistentes a la tinción de Gram Las siguientes bacterias de naturaleza gram positiva se tiñen como gram negativas: Mycobacterias (están encapsuladas). Mycoplasmas (no tienen pared). Formas L (pérdida ocasional de la pared). Protoplastos y esferoplastos (eliminación total y parcial de la pared, respectivamente). Utilidades En el análisis de muestras clínicas suele ser un estudio fundamental por cumplir varias funciones: Identificación preliminar de la bacteria causal de una infección. Utilidad como control calidad del aislamiento bacteriano. Los morfotipos bacterianos identificados en la tinción de Gram se deben de corresponder con aislamientos bacterianos realizados en los cultivos. Si se observan mayor número de formas bacterianas que las aisladas hay que reconsiderar los medios de cultivos empleados así como la atmósfera de incubación. A partir de la tinción de Gram pueden distinguirse varios morfotipos distintos: Los cocos son de forma esférica. Pueden aparecer aislados después de la división celular (micrococos), aparecer por pares (diplococos), formar cadenas (estreptococos), o agruparse de manera irregular (estafilococos). Los bacilos poseen forma alargada. En general suelen agruparse en forma de cadena (estreptobacilos) o en empalizada. También pueden distinguirse los espirales, que se clasifican en espirilos (si son de forma rígida) o espiroquetas (si son blandas y onduladas). Si por el contrario, poseen forma de «coma» (o curvados) entonces se los designa vibrios. Fundamentos de diferenciación de gram positivo y gram negativo Los fundamentos de la técnica se basan en las diferencias entre las paredes celulares de las bacterias gram positivas y gram negativas La pared celular de las bacterias gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, además de dos clases de ácidos teicoicos: anclado en la cara interna de la pared celular y unido a la membrana plasmática, se encuentra el ácido lipoteicoico, y más en la superficie, el ácido teicoico que está anclado solamente en el peptidoglicano (también conocido como mureína). Por el contrario, la capa de peptidoglucano de las bacterias gram negativas es delgada, y se encuentra unida a una segunda membrana plasmática exterior (de composición distinta a la interna) por medio de lipoproteínas. Tiene una capa delgada de peptidoglicano unida a una membrana exterior por lipoproteínas. La membrana exterior está hecha de proteína, fosfolípido y lipopolisacárido. Por lo tanto, ambos tipos de bacterias se tiñen diferencialmente debido a estas diferencias constitutivas de su pared. La clave es el peptidoglicano, ya que es el material que confiere su rigidez a la pared celular bacteriana, y las gram positivas lo poseen en mucha mayor proporción que las gram negativas. La diferencia que se observa en la resistencia a la decoloración se debe a que la membrana externa de las bacterias gram negativas es soluble en solventes orgánicos, como por ejemplo la mezcla de alcohol/acetona. La capa de peptidoglucano que posee es demasiado delgada como para poder retener el complejo de cristal violeta/yodo que se formó previamente, y por lo tanto este complejo se escapa, perdiéndose la coloración azul-violácea. Por el contrario, las bacterias gram positivas, al poseer una pared celular más resistente y con mayor proporción de peptidoglicanos, no son susceptibles a la acción del solvente orgánico, sino que este actúa deshidratando los poros, cerrándolos, lo que impide que pueda escaparse el complejo cristal violeta/yodo, y manteniendo violeta. la coloración azul- Factores que alteran la tinción de Gram Edad de la bacteria. Errores del operador. Uso de antibióticos A pesar de la gran utilidad de la tinción de Gram, este método debe ser valorado con precaución, ya que la reacción puede variar según la edad de las células (cultivos viejos de bacterias gram positivas pueden perder capas de peptidoglicanos y teñirse como gram negativos) y la técnica empleada (al decolorar por un tiempo muy prolongado se puede correr el riesgo que bacterias gram positivas se tiñan como gram negativas). Por esta situación, junto a la muestra deben teñirse controles con bacterias gram positivas (por ejemplo Staphylococcus aureus) y gram negativas (por ejemplo, Escherichia coli). Tomado de https://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3 %B3n_de_Gram como Aristóteles, sin embargo, defendían una continuidad en la materia, donde no habría espacios vacíos. Desde esta época hasta el siglo XVII hubo científicos y pensadores que se posicionaron en uno u otro bando, tanto al referirse a la materia inanimada como a la animada. La historia del descubrimiento de las partes más pequeñas de las que están formados los seres vivos es la historia del descubrimiento de la célula. ésta comienza cuando a principios del siglo XVII se fabrican las primeras lentes y el aparataje para usarlas, apareciendo los primeros microscopios. El concepto de célula está estrechamente ligado a la fabricación y perfeccionamiento de los microscopios, por tanto a la tecnología. Es curioso, sin embargo, que el inicio de la fabricación de lentes y microscopios fue impulsado por la necesidad de comprobar la calidad de las telas, no la de estudiar organismos vivos. Algunos de los descubrimientos y proposiciones conceptuales más relevantes en el descubrimiento de la célula se describen a continuación por orden cronológicos. Siglo XVII La idea de que la materia se subdivide en unidades pequeñas se remonta a los griegos. Leocippus y Demócrito dijeron que la materia se componía de pequeñas partes a las que llamaron átomos (sin parte), que ya no podían dividirse más. Otros 1590-1600. A. H. Lippershey, Z. Janssen y H. Janssen (padre e hijo). Se les atribuye la invención del microscopio compuesto, es decir, colocar dos lentes de aumento, una a cada lado de un tubo. El perfeccionamiento de esta organización y de sus componentes permitiría observar más tarde a las células. Figura 1. Este dibujo hecho por R. Hooke representa a láminas de corcho vistas al microscopio. A cada una de las estructuras huecas que forman el entramado a modo de panal de abeja las llamó celdillas o células. Apareció en Micrographia. 1664. 1610. Galileo Galilei describe la cutícula de los insectos. Había adaptado lentes del telescopio para inventar de manera independiente el microscopio compuesto. 1625. Francisco Stelluti describe la superficie de las abejas. Hasta ahora sólo se veían superficies. 1644. J. B. Odierna observa y describe las primeras disecciones de animales. 1664. Robert Hooke (físico, meteorólogo, biólogo, ingeniero, arquitecto) publicó un libro titulado Micrographia, donde describe la primera evidencia de la existencia de las células. Estudió el corcho y vio una disposición en forma de panal de abeja. A cada camarita la llamó celdilla o célula(Figura 1), pero él no tenía consciencia de que eso era una estructura similar a la que conocemos hoy en día como células. En realidad creía que esos espacios eran lugares por donde se moverían los nutrientes de las plantas. Aunque no intuyó que aquellas celdas eran la unidad funcional de los seres vivos, la denominación de célula ha permanecido para nombrar a lo que había dentro de esas camarillas y luego se aplicó también para descubrimientos en los animales. 1670-1680. N. Grew y M. Malpighi extendieron estas observaciones a otras plantas. Pero aún pensaban que eran saquitos llenos de aire. N. Grew describió lo mismo que R. Hooke y los llamó burbujas de fermentación (igual que en el pan). Introdujo el término de parénquima vegetal y realizó muchos dibujos de tejidos vegetales. M. Malpighi puso nombre a muchas estructuras vegetales como las tráqueas (por su similitud con las tráqueas de los insectos). También trabajó con tejidos animales y estudió la red capilar pero de forma muy rudimentaria. Estos autores establecieron de forma detallada la organización de las estructuras microscópicas de los vegetales, que quedó bien descrita. Sin embargo, seguían sin dar importancia a las celdas, a las que veían como cámaras de aire y nada más. Como curiosidad, al contrario que Maphigi, que pensaba que las celdas eran espacios aislados, Grew pensó que las cavidades de las celdas eran igual que los huecos en los tejidos dejados por los hilos. Así, Grew comparó el entramado de las celdas que vio en sus muestras con los encajes de los tejidos de las prendas de vestir. Se ha sugerido que esto llevó al error de llamar tejidos al conjunto de células y matriz extracelular. Igualmente desafortunado fue la adopción del nombre de celda para la unidad funcional de los organismos. Las lentes eran de muy mala calidad, con grandes aberraciones cromáticas, y los microscopistas aportaban mucha imaginación. Así, Gautier d'Agoty consiguió ver niños completamente formados en la cabeza de un espermatozoide, el homúnculo. Sin embargo, durante este periodo se producían avances constantes en el tallado de lentes y por consiguiente en una mayor nitidez y poder de resolución de los microscopios. Destacaron J. Huddle (1628-1704) que fue maestro de A. van Leuweenhoek y J. Swammerdan. Se cree que la primera célula animal en ser observada con el microscopio fue la sangre, cosa que ocurrió antes de 1673. Pero no se sabe si fue Malphigi, Swammerdan o Leuweenhoek quien fue el primero. A. van Leeuwenhoek 1670. A. van Leeuwenhoek construyó en la misma época microscopios simples, con una sola lente, pero con una perfección que le permitió alcanzar los 270 aumentos, más de lo que los microscopios compuestos ofrecían por aquella época. Puede ser considerado como el padre de la microbiología puesto que fue el primero en publicar observaciones de bacterias y protistas. Realizó descripciones de multitud de materiales biológicos con unos detalles hasta entonces desconocidos. Observó gotas de agua, sangre, esperma, glóbulos rojos, etcétera. Llegó a pensar que todos los animales estaban formados por glóbulos, pero no alcanzó a asociarlos con las celdas de las plantas. Incluso, cuando se consiguieron estudiar tejidos animales con más detalle, tuvo que pasar tiempo antes de que se hiciera una asociación entre los "animalúnculos" que había descrito Leeuwenhoek y las células de los tejidos animales. En el siglo XVIII se produjeron grandes avances en el tallado de las lentes que consiguieron imágenes más nítidas. Durante mucho tiempo tener microscopios fue un capricho de la alta sociedad donde su uso para investigación no era relevante. Por ello la corrección de los defectos o aberraciones en las lentes no eran una prioridad. La tecnología para hacer mejores lentes que mejoraron sustancialmente los microscopios comenzó en el siglo XVIII y continuó durante el XIX. Se atribuye a C.M. Hall (1729) el descubrimiento de un método para eliminar las aberraciones cromáticas de las lentes, es decir, defectos por descomposición de la luz al pasar por la lente. Se aplicó primero a los telescopios. De 1791 a 1806, F. Beeldsnijder y H. Van Deyl, construyeron los primeros objetivos sin aberraciones para el microscopio. En 1812, D. Brewester utiliza por primera vez objetivos de inmersión. En 1820-1837, G.B. Amici perfeccionó las lentes para microscopios, corrigiendo sus aberraciones, y diseñó objetivos con un poder de resolución y nitidez antes nunca alcanzado en los microscopios compuestos. El diseño de sus objetivos se utiliza en los microscopios modernos. En 1830, J.J. Lister eliminó las aberraciones esféricas de las lentes. En 1846, E. Abe y C. Zeiss crearon los objetivos apocromáticos. 1792. L. Galvani establece la naturaleza eléctrica de la contracción muscular. 1827. G. Battista Amici corrigió muchas aberraciones de las lentes de los microscopios. 3. Siglo XVIII 1757. Von Haller propone que los tejidos animales estaban formados por fibras. 1759. La primera aproximación para colocar en el mismo plano a los animales y a las plantas la hizo C.F. Wolf, que dijo que existía una unidad fundamental de forma globular en todos los seres vivos. ésta sería globular al principio, como en los animales, y luego aire que después se llenaría con savia, como en los vegetales. También dijo que el crecimiento se produciría por adición de nuevos glóbulos. Sin embargo, es posible que lo que observara con sus microscopios fueran artefactos. En su obra Theoria generationis argumenta con sus observaciones que los organismos vivos se forman por desarrollo progresivo y las estructuras aparecen por crecimiento y diferenciación de otras menos desarrolladas. Estas ideas eran contrapuestas a la que por aquella época existía: la teoría preformacionista, la cual proponía que los gametos llevaban organismos minúsculos ya formados y que llegaban a su estado adulto sólo por el aumento de tamaño de cada una de sus partes. Figura 2. F.V. Raspail Figura 3. Dibujo de tejido graso que aparece en Chemie organique fondé sur des méthodes nouvelles d'observation por F. V. Raspail (1833). 4. Siglo XIX 1820-1830. La gestación de la teoría celular comenzó en Francia con H. Milne-Edwards y F. V. Raspail (Figuras 2 y 3), que observaron una gran cantidad de tejidos de animales diferentes y publicaron que los tejidos estaban formados por unidades globulares pero con desigual distribución. Incluyeron a los vegetales y además dieron a estas vesículas un contenido fisiológico. R. J. H. Dutrochet, también francés, escribió "si uno compara la extrema simplicidad de esta estructura chocante, la célula, con la extrema diversidad de su contenido, está claro que constituye la unidad básica de un estado organizado, en realidad, todo es finalmente derivado de la célula " (Figura 4). Estudió muchos animales y plantas y llegó a la conclusión de que las celdas de los vegetales y los glóbulos de los animales eran la misma cosa, pero con morfología diferente. Fue el primero que les asignó alguna función fisiológica y propuso que unas células se creaban dentro de las otras (en contra de la teoría de la generación espontánea). F.V. Raspail era químico y propuso que cada célula era como un laboratorio gracias al cual se organizan los tejidos y los organismos. Pero creía que cada célula, a modo de muñeca rusa, poseía nuevas vesículas que se iban independizando, incluso propuso que tendrían sexo (la mayoría eran hermafroditas). él dijo, y no R. Virchow, "Omnis cellula e cellula", toda célula proviene de otra célula. Figura 4. Portada de la publicación Recherches anatomiques et physiologiques sur la structure intime des animaux et des végétaux, et sur leur motilité de M. H. Dutrochet (1824). 1831. R. Brown describe el núcleo. Esto es controvertido puesto que en una carta de Leuweenhoek a Hook en 1682 describe una estructura en el interior de los glóbulos rojos de la sangre de un pez que no podría ser otra cosa más que un núcleo, aunque no le llamó de ninguna manera. Además, en 1802, el checo F. Bauer describió una estructura celular que no podía ser otra cosa sino un núcleo. M. J. Schleiden, posteriormente, primer axioma de la teoría celular posturlaría que todas las células para las plantas (no estudió tejidos contienen un núcleo (cosa que no animales). siempre es cierta). plantas decir, todas las formadas por están unidades 1832. B. Dumortier describe la Es llamadas células. T. Schwann, fisiólogo alemán, hizo división binaria en células de las extensivo ese plantas. Detalla la aparición de la animales y por extensión a todos pared entre las nuevas células y los propone que ese es el mecanismo publicación Mikroscopische de proliferación de las células y le Untersuchungen. Fue más allá hace rechazar otras teorías que diciendo existían por entonces como las animales como vegetales estaban que proponían que las células se governadas creaban unas dentro de otras a principios. concepto a los seres vivos en que su tanto por células los mismos modo de muñecas rusas, o que aparecían espontáneamente. Schwann también definió a la célula Descubrimiento de la división celular 1835. R. Wagner describe como una estructura por una membrana rodeada (estructura que no vio, y que ya había sido Dutrochet el nucléolo. imaginada dos años por antes mediante estudios de ósmosis). Lo 1837. J. Purkinje, en Chequia, que Scheleiden y Schwann uno de los mejores histólogos de describieron como membranas era su en realidad la pared celular de las época, propuso las ideas básicas de la teoría celular y ya células dijo tejidos citoplasma periférico de éstas. Se animales estaban formados por entiende que también propusieran células, sino también que los que el núcleo estaba inserto en tejidos animales eran básicamente la membrana. Schwann fue más análogos a los tejidos vegetales. allá y propuso que esa membrana no sólo que los vegetales más el (errónea) sería como una barrera 1838. botánico M. alemán, J. Schleiden, formaliza el capaz de mantener un medio externo separado de un medio interno a modo de barrera, cosa la vida. Con lo cual, la historia que se ha demostrado cierta, pero evolutiva de los seres vivos podía para representarse en un solo árbol de la membrana celular auténtica. la vida donde las plantas, los animales, Aunque tradicionalmente se atribuye la unificicación de los hongos y los organismos unicelulares estaban conectados entre sí. postulados de la teoría celular a Schleiden y Schwann, hay al 1839-1846. J.E. Purkinge y H. menos otros cuatro científicos que van llegaron misma independiente, llaman al contenido (1805), interior de las células, excuyendo Dutrochet (1824), Purkinje (1834) y al núcleo, protoplasma estudiando Valentin (1834), donde destaca a las células de las plantas. Dutrochet (ver más arriba). Las Previamente malas que Dujardin (1835) en las células Schwann conocía los escritos de animales. Fue F. Cohn (1850) Dutrochet y cogió "prestadas" sus quién ideas. Schleiden protoplasma y el sarcode eran la también habían apoyado la idea de misma cosa. Colocar a las células que las nuevas células surgían vegetales y animales en el mismo sólo desde el interior de células plano no era frecuente en aquella preexistentes, época. Puesto que la idea de antes conclusión: a la Oken lenguas aseguran Schwann y cosa que se demostró errónea. Mohl, se de manera llamado sarcode por dio cuenta que el membrana en realidad se refería a las paredes celulares de las 1839-1843. F. J. F. Meyen, F. plantas por error, y las animales no Dujardin y M. Barry conectaron y la poseían, cuando se estudiaron unificaron diferentes ramas de la con detalle células sin pared se biología los llegó a la conclusión de que la protozoos eran células individuales entidad viva de la célula era el nucleadas similares a aquellas que protoplasma. N. Pringsheim (1854) formaban parte de los animales y dijo que el protoplasma era la base de además material de la vida en las plantas. linajes Por esa época, se estableció que las al mostrar plantas, propusieron que que y los celulares continuos son la base de el protoplasma era el que controlaba la actividad celular por había propuso el concepto de lo que la idea de membrana protoplasma (Purkinje, 1839) que desapareció como definía la sustancia interior de esas elemento fundamental de la célula. celdas, es decir, el citoplasma Esto era lógico puesto que con el actual. Durante el siglo XIX ambas microscopio no se puede ver la palabras compitieron para hacerse membrana. con de nuevo el significado de unidad anatómica y fisiológica de los 1856. R. Virchow propuso a la seres vivos, pero la palabra célula célula como la forma más simple ganó de manifestación viva y que a protoplasma pesar representa prácticamente de los libros de completamente la idea de vida, es texto. Esta batalla de conceptos se la unidad produjo porque en aquella época viviente indivisible. "The cell, as no se tenía una idea clara de the life- donde residía la vida, si en en el nevertheless conjunto de la célula o en su de unidad ello orgánica, la simplest manifestation form that of la batalla. ha La palabra desaparecido fully represents the idea of life, is interior, the organic unity, the indivisible fuerza vital. Es decir, ¿era una living One". A mediados del XIX estructura viva o una materia esta teoría quedó consolidada. viva?. La palabra "célula" y el protoplasma el concepto de "célula" como unidad Modelos de membrana de vida no tuvieron una buena 1858. relación durante el siglo como XIX. EL de colorantes para uso estudiar los Algunos autores como E.B. Wilson tejidos supuso un avance sin en precedentes en la indentificación 1896 sugerían cambiar la palabra célula por otra puesto que de la unidad de vida no se parecía en estructuras en las células y los nada a una entidad vacía rodeada tejidos. Primeros colorantes para por paredes. Hay que tener en tejidos. Se atribuye a J. von cuenta célula Gerlach las primeras pruebas con (celda) se utilizó para describir las soluciones de carmín en tejido células muertas del corcho. Se nervioso. que la palabra manera En diferencial 1829, P de Mayer introduce la tinción de hematoxilina microscopio óptico usa el espectro y tinción de la luz visible, pero por sus combinada de dos colorantes. En propiedades de longitud de onda 1904, G. Giemsa introduce la no puede discriminar dos puntos tinción con eosina y azul de que estén a menos de 0.2 micras metileno que lleva su nombre. de distancia. Con el microscopio eosina como una electrónico se 1879. W. Flemming describe la separación de cromosomas e introduce el término de mitosis. estructuras internas de la célula que eran del orden de nanometros que una naturaleza lipídica para la interfaz entre el protoplama y el externo, y sugirió estudiar (10-3 micras) (Figura 5). Un hecho 1899. C. E. Overton propone medio pudieron la existencia de una fina capa de lípidos rodeando al protoplasma, basándose en que experimentos de ósmosis y de trasiego de lípidos entre el protoplasma y el medio externo. quedó microscopio existencia resuelto electrónico de la con el es la membrana plasmática rodeando a la célula, era la primera vez que se podía observar, pero también membranas formando parte de estructuras internas. El interior de la célula complejo eucariota y se mostró rico en compartimentos. Hacia 1960 ya se había explorado la célula a nivel ultraestructural. Gracias a los avances científicos poseemos un concepto moderno de teoría celular el cual se puede resumir en los siguientes principios: 5. Siglo XX 1932. Aparece el microscopio electrónico. Fue inventado en Alemania por M. Knoll y E. Ruska, y desarrollado en las décadas de los 30 y los 40 del sigo XX. El Todos los seres vivos están formados por células, bacterias y otro tipo de organismos, o por sus productos de secreción. La célula es la unidad estructural de la materia viva, y dentro de los diferentes niveles de complejidad biológica, una célula puede ser suficiente para constituir un organismo. Las funciones vitales de los organismos ocurren dentro de las células, o en su entorno inmediato, controladas por sustancias que ellas secretan. Cada célula es un sistema abierto único e irrepetible, que intercambia materia y energía con su medio. En una célula caben todas las funciones vitales, de manera que basta una célula para tener un ser vivo (que será un ser vivo unicelular). Así pues, la célula es la unidad fisiológica de la vida. Todas las células proceden de células procariotas preexistentes, por división de éstas o célula madre. Es la unidad de origen de todos los seres vivos. Ahora bien, ¿Qué son las células procariotas? Las células procariotas o procariontes son organi smos vivientes unicelulares, pertenecientes al imperio Prokaryota o reino Monera, dependiendo de la clasificación biológica que se prefiera. Estas células se caracterizan por no tener núcleo celular, sino tener su material genético disperso en el citoplasma, apenas reunido en una zona llamada nucleoide. Los organismos procariotas son evolutivamente anteriores a los eucariotas, es decir, los provistos de núcleo. Las formas de vida más simple eran y son todavía procariotas, como las bacterias y las arqueas. Dicha simpleza ha permitido su gran diversificación, lo que se traduce en metabolismos sumamente diversos (no ocurre lo mismo con las eucariotas) y una enorme diversidad en cuestión de ambiente, nutrición o incluso estructura. Así, las células procariotas pueden ser autótrofas (elaboran su propio alimento) o heterótrofas (se alimentan de materia orgánica ajena), tanto aerobias (requieren de oxígeno) como anaerobias (no requieren de oxígeno), lo cual se traduce en varios mecanismos de nutrición: Fotosíntesis. Tal y como las plantas, algunos procariontes pueden sintetizar energía química a partir de la luz solar, tanto en presencia como en ausencia de oxígeno. Quimiosíntesis. Semejante a la fotosíntesis, las células emprenden la oxidación de materia inorgánica como mecanismo para obtener su energía y obtener su propia materia orgánica para crecer. Nutrición saprófita. Basada en la descomposición de la materia orgánica dejada por otros seres vivos, ya sea al morir o como restos de su propia alimentación. Nutrición simbiótica. Algunos procariontes obtienen su materia orgánica para existir a partir de otros seres vivos, generándoles un beneficio y por ende colaborando para existir. Nutrición parásita. La contraria a la simbiótica: el organismo se nutre a partir de la materia orgánica de otro mayor, al que perjudica en el proceso aunque no llegue a matarlo directamente. Por último, la reproducción de las células procariotas también suele ser muy variada, tanto de índole asexual (mitosis) como parasexual (conjugación, transducción y transformación del ADN con fines adaptativos). Clasificación procariotas: de las células Las células procariotas pueden ser de cuatro tipos, de acuerdo a su morfología: Coco. Un tipo morfológico típico de las bacterias, presentan forma más o menos esférica y uniforme. Bacilo. Con forma de bastón, incluyen una vasta gama de bacterias y otros organismos saprófitos de vida libre. Vibrio. Un género de proteobacterias responsables de la mayoría de las enfermedades infecciosas en el hombre y los animales superiores, sobre todo aquellas típicas del tracto digestivo, como el cólera. Espirilos. Poseen forma helicoidal o de espiral, suelen ser muy pequeñas y abarcan desde bacterias patógenas hasta autótrofas. Pleomórficas. Es decir, de forma cambiante, principalmente referido a las arqueas. Rectangulares. También típica forma de las arqueas como la Haloquadratum. La célula procariota suele tener las siguientes estructuras: Membrana plasmática. Aquella frontera que divide el interior y el exterior de la célula, a su vez sirviendo de filtro para permitir el ingreso de nutrientes o la salida de residuos. Pared celular. Un rasgo compartido con vegetales y hongos, consiste en una fibra resistente y rígida que le confiere forma definida a la célula y una capa adicional de protección. Citoplasma. El interior mismo de la célula, es decir, una sustancia coloidal muy fina que compone el “cuerpo” celular. Nucleoide. Sin llegar a ser un núcleo, sino una región muy dispersa, es la parte del citoplasma en donde suele hallarse el material genético dentro de la célula procariota. Este material genético es, obviamente, indispensable para la reproducción. Ribosomas. Un complejo de proteínas y piezas de ARN presentes en todas las células (excepto los espermatozoides), y permiten la expresión y traducción de la información genética, es decir, sintetizan las proteínas requeridas por la célula en sus diversos procesos biológicos, conforme a lo estipulado en el ADN. Compartimientos procariotas. Exclusivos de este tipo celular, varían según el tipo de organismo y tienen funciones muy específicas dentro de su metabolismo. Algunos ejemplos son: clorosomas (para la fotosíntesis), carboxisomas (para fijar el CO2), ficobilisomas (pigmentos moleculares para recoger la luz solar), magnetosomas (permiten orientación conforme al campo magnético terrestre), etc. Adicionalmente, estas células pueden presentar: Flagelo. Orgánulo empleado para movilizar la célula, a modo de cola propulsora. Membrana externa. Una barrera celular adicional que caracteriza a las bacterias gram-negativas. Periplasma. Un espacio que rodea al citoplasma y lo separa de las membranas externas, permitiendo así una mayor efectividad en distintos tipos de intercambio energético. Plásmidos. Formas de ADN no cromosómico, de forma circular, que en ciertas bacterias acompañan al ADN bacteriano y se replican de modo independiente, confiriéndole características esenciales para una mayor adaptabilidad al medio ambiente. Fuente: https://concepto.de/celulaprocariota/#ixzz5rRfGi1Zu MATERIALES Pota-objetos Cubreobjetos Asa bacteriológica Mechero de alcohol Yogurt con probióticos Solución de Cristal Violeta RESULTADOS MUESTRA DE YOGURT (Objetivo 4x, 10x, 40x y 100x) Solución de Lugol Safranina o Fucsina Alcohol- acetona Alcohol- cloroformo Agua destilada Caldo nutritivo Caja de Petri Alimentos perecederos (busque en el procedimiento) Queso fresco (recién comprado) Guantes YOGURT 4x YOGURT 10x YOGURT 100X MUESTRA DE CARNE (Objetivo 4x, 10x, 40x y 100x) YOGURT 40X CARNE 4x CARNE 10x CARNE 100x MUESTRA DE FRUTA (Objetivo 4x, 10x, 40x y 100x) CARNE 40x FRUTA 4x MUESTRA DE QUESO (Objetivo 4x, 10x, 40x y 100x) FRUTA 10x QUESO 4x FRUTA 40x QUESO 10X FRUTA 100x analizar claramente los diferentes tendidos de las muestras en un primer momento, sin embargo, después una serie de intentos e ir manipulando el microscopio en dicho objetivo, fuimos adquiriendo a su vez la destreza para manejarlo hábil y eficazmente. CONCLUSION QUESO 40X Ésta práctica se enfocó principalmente en la identificación de organismos procariontes encontrados en diferentes alimentos perecederos, sean estos GRAM + (positiva) o GRAM – (negativa), para esto utilizamos técnicas sencillas de coloración. Además de esto, se pudo superar la dificultad que se presentó al momento de enfocar y analizar con el objetivo 100x, aprendiendo a su vez a manejarlo y así cumplir con los objetivos propuestos en la guía. QUESO 100X DISCUSIÓN DE RESULTADOS En este laboratorio, al momento de realizar la práctica con el microscopio, se nos presentó una ligera dificultad a la hora de maniobrar con el objetivo 100x/0.26 puesto que no teníamos experiencias anteriores, y esto no nos permitió Se logró identificar algunas de las bacterias presentes en alimentos como el yogurt, la carne, la fruta y el queso. Se determinó de manera cualitativa cuales eran las bacterias GRAM + (positiva) y GRAM – (negativa) ya que al analizar en el microscopio se observó que las bacterias GRAM + (positiva) se tornaban de color violeta y las GRAM – (negativa) tomaban un color rojo o rosado. Se aprendieron las diferentes técnicas de coloración utilizadas en el estudio de bacterias y con esto concluir exitosamente la práctica. CUESTIONARIO 1. ¿Qué es una bacteria Gram positiva y a que se debe su coloración después de la tinción de Gram? R/: las bacterias Gram positivas o bacterias buenas son aquellas que se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram. Esta característica química está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. La pared celular de las bacterias Gram positivas está formada en un 90% por peptidoglicano, siendo éste el principal componente que permite diferenciarlas con la pared de las Gram negativas, pues al teñirlas, es gracias al grosor que éste le proporciona, que se logra mantener la coloración del cristal violeta en el interior de la célula al teñirla con la tinción Gram. Tomado de: https://okdiario.com/curiosidades/bact erias-gram-positivas-697551 2. ¿Qué son bacterias Gram negativas y a que se debe su coloración después de la tinción de Gram? R/: las bacterias Gram negativas o bacterias malas son aquellas que se tiñen de rojo o grosella por la tinción de Gram. Esta característica química está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular, por lo que refleja un tipo natural de organización bacteriana. La pared celular de las bacterias Gram negativas está formada en apenas un 10% por peptidoglicano, siendo éste el principal componente que permite diferenciarlas con la pared de las Gram positivas, pues al teñirlas, es gracias al poco grosor que éste le proporciona, que no se logra mantener la coloración del cristal violeta en el interior de la célula al teñirla con la tinción Gram. Tomado de: https://okdiario.com/curiosidades/bact erias-gram-positivas-697551 3. ¿Cuál es el efecto de antibióticos sobre las bacterias? los R/: Cada antibiótico actúa de forma distinta y por eso pueden combinarse. Los principales mecanismos de actuación son de dos tipos: - Antibióticos que destruyen la membrana que rodea a la bacteria y hacen que explote (penicilina). - Antibióticos que interfieren con la síntesis de proteínas de los procesos vitales de la bacteria (macrólidos) o que impiden la replicación del material genético (quinolonas) y por tanto su proliferación. Tomado de: https://www.infosalus.com/farmacia/n oticia-funcionan-antibioticos20140816100433.html 4. ¿Qué es un medio de cultivo? Enumere algunos medios de cultivo para bacterias R/: Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él. La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Grampositivas). Condiciones generales para cultivo de microorganismos el El desarrollo adecuado de los microorganismos en un medio de cultivo se ve afectado por una serie de factores de gran importancia y que, en algunos casos, son ajenos por completo al propio medio. 1disponibilidad de nutrientes adecuados: un medio de cultivo adecuado para la investigación microbiológica ha de contener, como mínimo, carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento. Siempre han de estar presentes las sustancias adecuadas para ejercer de donantes o captadores de electrones para las reacciones químicas que tengan lugar. Todas estas sustancias se suministraban originalmente en forma de infusiones de carne, extractos de carne o extractos de levadura. Sin embargo, la preparación de estas sustancias para su aplicación a los medios de cultivo provocaba la pérdida de los factores nutritivos lábiles. Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la peptona. Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc. Igualmente pueden ser necesarios ciertos carbohidratos y sales minerales como las de calcio, magnesio, manganeso, sodio o potasio y sustancias promotoras del crecimiento, generalmente de naturaleza vitamínica. Muy a menudo se añaden al medio de cultivo ciertos colorantes, bien como indicadores de ciertas actividades metabólicas o bien por sus capacidades de ejercer de inhibidores selectivos de ciertos microorganismos. 2- consistencia adecuada del medio: partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en estado semisólido o sólido. Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla. Actualmente los medios sólidos son de uso universal, por su versatilidad y comodidad, pero hay también gran cantidad de medios líquidos cuyo uso está ampliamente extendido en el laboratorio. 3- presencia (o ausencia) de oxígeno y otros gases: Gran cantidad de bacterias pueden crecer en una atmósfera con tensión de oxígeno normal. Algunas pueden obtener el oxígeno directamente de variados sustratos. Pero los microorganismos anaerobios estrictos sólo se desarrollarán adecuadamente en una atmósfera sin oxígeno ambiental. En un punto intermedio, los microorganismos microaerófilos crecen mejor en condiciones atmosféricas parcialmente anaerobias (tensión de oxígeno muy reducida), mientras los anaerobios facultativos tienen un metabolismo capaz de adaptarse a cualquiera de las citadas condiciones. 4condiciones adecuadas de humedad: un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así que se deseque el medio. 5- Luz ambiental: La mayoría de los microorganismos crecen mucho mejor en la oscuridad que en presencia de luz solar. Hay excepciones evidentes como sería el caso de los microorganismos fotosintéticos. 6- pH: La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos metabólicos normales. 7- Temperatura: los microorganismos mesófilos crecen de forma óptima a temperaturas entre 15 y 43ºC. Otros como los psicrófilos crecen a 0ºC y los temófilos a 80ºC o incluso a temperaturas superiores (hipertemófilos). En líneas generales, los patógenos humanos crecen en rangos de temperatura mucho más cortos, alrededor de 37ºC, y los saprofítos tienen rangos más amplios. 8- Esterilidad del medio: Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el crecimiento microbiano normal del o de los especimenes inoculados en dichos medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave (que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante) Tomado de: http://www.consumer.es/seguridadalimentaria/sociedad-yconsumo/2013/02/04/215614.php 5. Diga el nombre de las bacterias más frecuentes en alimentos que se encuentren en mayor proporción y frecuencia. R/: Las bacterias son los patógenos más habituales en los alimentos, aunque no son los únicos. Virus, mohos y levaduras también suelen frecuentar los alimentos. Las bacterias pueden causar al consumidor infección e intoxicación, son dos consecuencias diferentes. La infección se produce por la ingesta de alimentos contaminados con bacterias vivas que entran en el huésped y provocan la enfermedad. La intoxicación, en cambio, aparece cuando se ingieren alimentos que antes se han contaminado con bacterias que producen toxinas, y estas últimas son las que causan la enfermedad. Sin embargo, el denominador común de todas ellas son los síntomas gastrointestinales que producen: dolor abdominal, nauseas, vómitos, diarreas, calambres, fiebre, etc. interior. La salmonella se encuentra en la cáscara. -No utilizar huevos rotos, con restos de plumas o heces. -Conservarlos en el frigorífico para aumentar su vida útil, aunque pueden almacenarse a temperatura ambiente. -Lavar el plato y utensilios donde se ha batido o manipulado huevo crudo para que no entre en contacto con los alimentos elaborados. -Cocinar la carne en general, pero sobre todo las aves, la temperatura en el interior debe alcanzar los 65ºC. E. coli Alimentos implicados: Carne de res cruda o poco cocinada. -Productos frescos crudos. -Leche cruda. Salmonella -Jugos de fruta sin pasteurizar. Alimentos implicados: Los huevos crudos en primer lugar y todos los derivados en cuya elaboración se utiliza huevo crudo, como mayonesa, clara batida o leche con huevo. -Agua contaminada o sin adecuado tratamiento potablización. -Aves crudas o poco cocinadas. -Cocinar de forma adecuada la carne de res, sobre todo las hamburguesas. -Alimentos ya elaborados que se dejan a temperatura ambiente durante varias horas. Recomendaciones: -No lavar los huevos, la cáscara es muy porosa y la humedad facilita la penetración de bacterias en el un de Recomendaciones: -Control de los alimentos frescos en el origen, de forma especial la leche y la carne. -Evitar consumo de leche no pasteurizada o agua no potabilizada. -Desinfectar los vegetales que vayan a consumirse crudos o bien lavarlos con abundante agua. -Pescado crudo o poco cocinado. Listeria monocytogenes Recomendaciones: Alimentos implicados: Alimentos refrigerados (se multiplica de forma rápida durante el almacenamiento de los alimentos a una temperaturas de refrigeración). -Cocinar de forma adecuada la carne de pollo. -Alimentos listos para consumir a base de carne de res, pollo o pescado. -Leche cruda. -Evitar contaminación cruzada, es decir, no mezclar carne cruda con alimentos ya cocinados. Este es el mayor riesgo de esta bacteria, por tanto, es importante la correcta higiene de las tablas de cortar, utensilios, platos, etc. -Quesos blandos. -Verduras con un excesivo almacenamiento en origen. -Productos en conserva o ahumados. Staphylococcus aureus Recomendaciones: Alimentos implicados: -Evitar el almacenamiento prolongado, incluso en refrigeración, de vegetales. -Alimentos cocinados ricos en proteínas: jamón cocido, carne de ave. -Limpiar y desinfectar las superficies de uso y los utensilios en contacto con alimentos crudos. -Productos de pastelería (sobre todo los rellenos de crema). -Mantener una cuidadosa higiene del frigorífico. -Asegurar una correcta cocción de los alimentos. Campylobacter jejuni Alimentos implicados: -Carne de cocinada. pollo cruda o poco -Leche sin pasteurizar. -Agua sin un adecuado tratamiento de potabilización o contaminada. -Productos lácteos. -Ensaladas. Recomendaciones: -Imprescindible una buena praxis higiénica, es una bacteria resistente a las condiciones ambientales y en la mayoría de los casos convierte a los manipuladores de alimentos en su principal vía de propagación. -Mantener los alimentos bajo temperaturas de refrigeración ya que el frío impide que se forme la toxina que desencadena la infección en humanos. Shigella Alimentos implicados: -Productos lácteos. -Carne de res y de pollo. -Ensaladas. -Frutas y verduras crudas. -Ostras crudas. -Agua no potabilizada o contaminada. Recomendaciones: -Evitar conservar los alimentos en refrigeración largos periodos de tiempo ya que es una bacteria resistente al frío. -Evitar el consumo de carne pescado crudo o poco cocinado. o -Evitar contaminación cruzada. -Extremar condiciones de higiene del manipulador. Tomado de: http://www.consumer.es/seguridadalimentaria/sociedad-yconsumo/2013/02/04/215614.php -Evitar consumir alimentos crudos o poco cocinados. -Mantener los productos crudos en refrigeración. -Adecuada higiene personal. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS -Evitar la contaminación cruzada, lavar utensilios de cocina después de su uso para no mezclar alimentos crudos con cocinados. https://okdiario.com/curiosidades/bact erias-gram-positivas-697551 Yersinia enterocolítica Alimentos implicados: -Carne de res. https://www.infosalus.com/farmacia/n oticia-funcionan-antibioticos20140816100433.html http://www.microinmuno.qb.fcen.u ba.ar/SeminarioMedios.htm -Pescado. -Marisco crudo. -Productos lácteos. -Productos frescos. -Agua no potabilizada o contaminada. Recomendaciones: http://www.consumer.es/seguridadalimentaria/sociedad-yconsumo/2013/02/04/215614.php
